全 文 ：第 29卷 ,第 3期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 9 , No . 3
2 0 1 2年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 2
掌裂草葡萄提取物的抗氧化性①
① 榆林市科技计划项目 ( 9760609)
② 联系人 ,手机: ( 0) 13891279937; E-mail: deng-bw@ sohu. com
作者简介:邓保炜 ( 1956— ) ,男 ,陕西省清涧县人 ,教授 ,主要从事天然产物研究工作。
收稿日期: 2011-05-25;接受日期: 2011-06-24
邓保炜　杜芳艳②　高立国a　王 京a
(榆林学院能源化工研究中心　陕西省榆林市西沙崇文路 2号　 719000)
a (榆林学院化学与化工学院　陕西省榆林市西沙崇文路 2号　 719000)
摘　要　通过测定掌裂草葡萄提取物对羟自由基 (· OH)的清除率、对超氧阴离子 ( O-2· )的抑制率 ,
研究其抗氧化活性。结果显示: 提取物对羟自由基 (· OH)、超氧阴离子 ( O-2· )有较强的清除抑制作用 ,并
随着提取物添加量的增加 ,抗氧化作用以及对羟自由基及超氧阴离子的清除抑制作用也随之增强。
关键词　掌裂草葡萄 ;抗氧化性 ;羟自由基 (· OH) ;超氧阴离子 ( O-2· )
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2012) 03-1753-03
1　引言
葡萄科蛇葡萄属 ( Ampelosis)植物约 25种 ,我国境内有 15种 ,多为民间中草药 ,具有活血散
瘀、消炎止血、清热解毒等功效 ,用于治疗风湿脾痛、无名肿毒、骨髓炎等疾病 [1 ]。 近年来 ,许多药理
和化学研究发现蛇葡萄属植物具有显著的保肝护肝、抗血栓、抗病毒、抗纤维化、抗肿瘤、止咳去痰 ,
阻断艾滋病病毒感染、抗致突变、抗过敏、抗炎镇痛、减轻乙醇中毒、消脂、抗自由基、抗氧化等多种
作用 [2— 6 ]。可用于防治糖尿病、动脉粥样硬化、高血脂等症 ;有可能用于临床上治疗几种危害严重的
内科疾病 ,有的已经被开发为具有降血脂、降血糖的保健藤茶 ,提示该属植物有很好的研究开发前
景 [7 ]。 掌裂草葡萄 [Ampelopsis aconitifolia Bge. var. palmiloba ( Carr. ) ]俗名:乌头叶蛇葡萄 ,是葡萄
科蛇葡萄属木质藤本植物 ,根药用 ,有活血散瘀、消炎止痛的功效 [ 8]。对掌裂草葡萄提取物抗氧化性
的研究目前还未见报道。因此 ,对掌裂草葡萄提取物的抗氧化性进行研究 ,不仅可以为天然食品抗
氧化剂增添新成员 ,而且随着对它的药理作用的深入研究 ,必然会引起人们的普遍关注 ,也为掌裂
草葡萄开发利用寻找到新的途径。
2　实验部分
2. 1　仪器与试剂
ESJ60-4电子分析天平 (上海精密科学仪器有限公司 ) ; HH-2型二孔电热恒温水浴锅 (北京科
伟永兴仪器有限公司 ) ; 722型可见分光光度计 (上海箐华电子科技有限公司 ) ; 101-1型鼓风干燥烘
箱 (上海一恒科学仪器有限公司 ) ; FS J-114多功能粉碎机 (广东美的家电有限公司 )。
掌裂草葡萄嫩茎叶:采于陕西省米脂县山区内 6月份植株 (经文献 [8]鉴定为原植物 ) ,取其嫩
茎叶洗净 ,将供试材料进行去杂处理 ,水漂洗并沥干水分。
主要试剂有: 邻苯三酚 ,邻二氮菲 ,硫酸亚铁铵 ,无水乙醇 , H2O2 , Tris试剂等。所用试剂均为分
析纯。 实验用水为二次蒸馏水。
2. 2　实验方法
2. 2. 1　抗氧化物质的提取制备
取掌裂草葡萄幼嫩干叶用水洗净 ,用 40mL石油醚洗去脂溶性物质和叶绿素 ,弃去石油醚 ,在
60± 1℃真空干燥 48h,冷却后粉碎。用 100目筛子筛取 10. 092g干燥的掌裂草葡萄粉末 ,按料液比
1∶ 15( g /mL)加入 60%的乙醇 ,在 60℃下浸提 2h,过滤 ,重复提取 3次 ,合并滤液 ,真空浓缩干燥 ,
得到黄色固体 ,储存备用。
2. 2. 2　提取物清除羟自由基试验
Fenton反应产生羟自由基 (· OH) [9 ] , H2O2+ Fe2+ · OH+ OH- + Fe3+ , Fe2+ 与邻二氮菲生
成红色配合物 ,加入提取液后 ,减弱了· OH对 Fe2+ /邻二氮菲的氧化作用 ,引起吸光度变化 ,取
8支 10mL容量瓶 ,分别依次加入 7. 5mmol /L硫酸亚铁铵溶液 0. 3mL, 7. 5mmol /L邻二氮菲溶液
0. 3mL, pH为 8. 20的 Tris-HCl缓冲溶液 1. 0mL, 1号为空白 ,在 2— 8号容量瓶中各加入
7. 5mmol /L H2O2溶液 0. 2mL,然后在 3— 7号容量瓶中分别加入掌裂草葡萄提取物溶液 (提取物
含量 /g ): 0. 5mL( 0. 009g)、 1. 0mL( 0. 017g)、 2. 0mL ( 0. 036g )、 3. 0mL( 0. 054g )和 4. 0mL( 0. 071g )
(显色剂均在最后定容前加入 ) , 8号中加入 0. 2g的 Vc,加水定容至刻度 ,在 37℃水浴中反应 1h,在
510nm波长下测定吸光度 ,计算羟自由基清除率 ,以百分率 (% )表示:
清除率 (% )= [A510 (加样 )- A510 (未加样 ) ]× 100% /[A510 (对照 )- A510 (未加样 ) ]
2. 2. 3　提取物抑制超氧阴离子活性试验
在碱性条件下 ( pH= 8. 20)邻苯三酚发生自氧化反应 ,经半醌自由基氧化为醌 [10 ] ,生成 O-2· 和
有色中间产物 ,该有色产物在λ= 420nm处有一特征吸收峰。当加入 O-2 ·清除剂时 , O-2·的生成
受到抑制 ,邻苯三酚自氧化速率受阻 ,溶液在 420nm处吸收减弱 ,故通过测定 A420值可以推测提取
物对 O-2·的清除作用 ,并比较不同提取物添加量对 O-2·清除作用的相对大小。取 3支 10mL容量
瓶 ,各加入 pH 8. 20的 Tris-HCl溶液 2. 0mL,再依次分别加入提取液 (提取物含量 /g ): 0mL、
1. 0mL( 0. 017g )和 2. 0mL ( 0. 036g) ,最后均加入 1mmo1 /L邻苯三酚溶液 1. 00mL,加水定容至刻
度 ,在波长 420nm处以时间模式记录 45min内每隔 30s吸光度的变化 ,计算提取物对超氧阴离子
自由基的抑制率:
抑制率 (% )= (ΔA1 /Δt-ΔA2 /Δt ) /(ΔA1 /Δt )× 100%
式中: ΔA1 /Δt——邻苯三酚自氧化时反应速率 ;ΔA2 /Δt——加入提取液后邻苯三酚自氧化反应速
率。
3　结果与讨论
3. 1　提取物对羟自由基的清除率
图 1表明提取物对羟自由基的清除率随添加量的增加而增加 ,当提取液添加量为 2. 0mL
( 0. 036g)时 ,对羟自由基的清除率为 47. 5% ,大于 0. 2g的 Vc对羟自由基的清除率 38. 4% ,当提取
液添加量达到 4. 0mL( 0. 071g )时 ,清除率可达到 78% ,说明提取物对羟自由基有较强的清除作用。
3. 2　提取物对超氧阴离子的抑制率
邻苯三酚随时间的增加其自氧化速率急剧增大 ,见图 2a,加入提取液使邻苯三酚的自氧化曲
线明显降低 ,当加入 1. 0mL( 0. 017g )提取液 , 45min后抑制率达到 32. 2% ,见图 2b。当加入 2. 0mL
1754 光谱实验室 第 29卷
( 0. 036g)提取液 , 45min后抑制率达到 49. 1% ,见图 2c。说明提取物对邻苯三酚的自氧化有显著的
抑制作用 ,而且随提取物添加量的增加抑制作用增强 ,见图 2。
图 1　不同量提取物对· O H的清除率 图 2　邻苯三酚自氧化曲线
a—— 1m L邻苯三酚 ; b—— a+ 1mL提取液 ( 0. 017g ) ;
c—— a+ 2m L提取液 ( 0. 036g)。
4　结论
掌裂草葡萄提取物 ,有较强的消除羟自由基、超氧阴离子自由基作用。而且 ,掌裂草葡萄提取物
是天然产物 ,安全无毒 ,可用于医药、保健食品生产 ,市场前景广阔。
参考文献
[1 ]陈科力 ,张秀明 .国产蛇葡萄属药用植物的开发前景 [ J ].中药材 , 1999, 22( 2): 58— 60.
[ 2 ] Hollman P C, Kata M B. Dietary Flavonoids: Intake, Heal th Ef2 Fects and Bioavailabilit y [ J ] . Food Chem . Toxicol , 1999,
37( 9— 10): 937— 942.
[3 ]杨振淮 ,郭洁文 ,潘竞锵等 .蛇葡萄属植物抗肿瘤、抗氧化、护肝和调血脂的药理作用研究 [ J].中医研究 , 2004, 17( 4): 57— 58.
[4 ]沈伟 ,陈树和 ,张秀桥等 .蛇葡萄属药用植物研究概况 [ J ].湖北中医杂志 , 2006, 28( 9): 55— 57.
[5 ]种正贤 ,覃洁评 ,周桂芬等 .广西藤茶总黄酮降血糖实验研究 [ J] .中国中药杂志 , 2002, 27( 9): 687— 689.
[6 ]熊大胜 ,朱金桃 ,刘朝阳 .显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物抑菌作用研究 [ J] .食品科学 , 2000, 21( 12): 49— 50.
[7 ]张琼光 ,丁英平 ,陈科力等 .蛇葡萄属植物药理学研究概况 [ J] .时珍国医国药 , 2005, ( 2): 151— 156.
[8 ]中国科学院植物研究所 .中国高等植物图鉴 (补编第二册 ) [M ] .北京:科学出版社 , 1983. 349— 356.
[ 9]金鸣 ,蔡亚欣 ,李金荣等 .邻二氮菲 -Fe2+ 氧化法检测 H2O2 /Fe2+ 产生的羟自由基 [ J] .生物化学与生物物理进展 , 1996, 23( 6):
553— 555.
[10 ]石碧 ,狄莹 .植物多酚 [M ] .北京:科学出版社 , 2000. 134— 137.
Antioxidation of Extracts of Ampelopsis aconit ifolia
Bge. var. palmiloba( Carr. )
DEN G Bao-Wei　 DU Fang-Yan　 GAO Li-Guoa　WANG Jinga
(Research Center of Chemical Engineer ing , Yul in College, Yul in , Shaanxi 719000, P. R. China)
a( School of Chemistr y and Chemical Engineer ing , Yul in Col lege, Yul in , Shaanxi 719000, P. R .China)
Abstract　 By measuring clearance rate of Ampelopsis aconiti folia Bge. var. palm iloba ( Carr. )
ex tracts on hydroxyl radical (· OH) and inhibition rate of that on superox ide anion ( O-2 · ) , it s
antioxidant w as studied. The ex tracts on hydroxyl radical (· OH) , superoxide anions ( O-2 · ) has a
strong scavenging and inhibition ef fect , and wi th the increase in the amount of ex tract , the antioxidant
and scavenging and inhibition ef fect on hydroxyl radical, superoxide anion also increased.
Key words　 Ampelopsis aconit ifolia Bge. var. palmiloba( Carr. ) ; Antioxidation; Hydroxyl Radical
(· OH); Superoxide Anions( O-2· )
1755第 3期 邓保炜等:掌裂草葡萄提取物的抗氧化性