全 文 ：分光光度法测定竹节人参甲醇提取物中皂甙含量
向东山a＊　翟　琨b
(a生物资源保护与利用湖北省重点实验室 ,湖北民族学院生物技术研究所　恩施 445000;
b湖北民族学院化学与环境工程学院　恩施)
摘　要　采用分光光度法 ,以人参皂甙 Rbl为对照 , 选择波长为 571 nm, 建立了测定竹节人参皂甙含量的方
法。实验结果表明 ,皂甙含量在 100 ～ 600 μg之间 , 皂甙的质量与吸光度具有明显线性关系。在此范围内 ,建
立的皂甙质量(μg)和吸光度之间回归方程为 Y=392.47x+104.18(R2 =0.998 5)。检测方法的加样回收率为
99.54%, RSD为 0.97%。测定方法与高效液相色谱法的测定结果无显著差异。
关键词　竹节人参 , 皂甙 ,分光光度法 ,测定
中图分类号:O657.3　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1000-0518(2009)03-0358-03
2008-02-10收稿 , 2008-05-11修回
湖北省自然科学基金(2006ABA036)资助项目和生物资源保护与利用湖北省重点实验室开放基金项目(2007020)
通讯联系人:向东山 ,男 ,讲师;E-mail:zk3100@sina.com;研究方向:生物化学
竹节人参属五加科植物[ 1] (别名:竹节三七 、竹节参 、白三七 、北三七 、大叶三七),兼具我国北药人
参和南药三七之功效 ,在民间有 “草药之王 ”的美誉 。常用于治疗病后虚弱 ,肺结核咯血 ,产后血瘀腹痛 ,
寒湿脾痛 ,跌打损伤等症 [ 2] ,属我国特有珍贵中药材资源。现代药理学研究表明 ,竹节人参主要活性物
质为皂甙类 、多糖 、氨基酸及少量的挥发性油等 [ 3] 。在这些活性物质中 ,研究最多的是其皂甙类化合物。
这类物质具有抑制肿瘤 、抗炎 、镇痛 、镇静 、抗病毒 、免疫调节 、提高学习记忆能力 、保护脑损伤及心肌缺
血损伤 、抗衰老及抗疲劳等多方面的功能[ 4, 5] 。目前 ,对竹节人参皂甙的测定常用 HPLC法 ,但由于
HPLC法仪器昂贵 ,因此 ,建立竹节人参总皂甙的简便检测方法 ,具有重要的现实意义。资料表明[ 6] ,竹
节人参皂甙类化合物在高氯酸作用下 ,与香草醛反应 ,生成紫红色化合物 ,在一定浓度范围内颜色的深
浅与其浓度成正比。本文据此建立了分光光度法快速 、简便检测竹节人参皂甙含量的方法。
实验材料为人工栽培 3年生竹节人参根(湖北省中药材研究所),人参皂甙 Rb1为对照品(中国药
品生物制品检定所),其它试剂均为分析纯 。S53/54型紫外可见分光光度计(上海棱光科学仪器厂);
LC-10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津)。
竹节人参样品溶液的制备:竹节人参置鼓风干燥箱中 60℃烘干 ,粉碎至全部通过 0.25mm筛 。精
密称取样品粉末约 2g,置索氏提取器中 ,加入 80mL乙醚 ,加热回流 2h后 ,弃去乙醚液。药渣挥去乙醚
再置于索氏提取器中 ,加入 80mL甲醇 ,温度加热提取 2h,取甲醇提取液 ,挥干 ,残渣中加水 15 mL溶解
后 ,用水饱和的正丁醇萃取(15 mL×5),合并正丁醇萃取液 ,用质量分数为 1%的 NaOH溶液洗涤
(15mL×3),正丁醇相用正丁醇饱和的水洗涤(15mL×3),正丁醇相蒸干后 ,残渣加甲醇溶解 ,定溶于
25 mL的容量瓶中 ,为供试品溶液 。
测定方法:精密称取经 P2O5干燥至恒重的人参皂甙 Rbl约 12.5mg,加甲醇溶解定容至 25 mL,制
成 0.5g/L的人参皂甙对照品溶液 。分别精密吸取对照品溶液 100μL和供试品溶液 50 μL,置于干燥
具塞试管中 。在水浴上挥干溶剂 ,加入新配制的质量分数为 5%香草醛冰醋酸溶液 0.2 mL,高氯酸
0.8mL,于 60℃恒温水浴加热 15min。取出 ,流水冷却 5min,加 5mL冰醋酸 ,摇匀以试剂空白为参比 ,
在分光光度计上 ,扫描 500 ～ 700 nm波长范围吸收光谱 , 2种溶液的吸收光谱相似 ,确定最大吸收波长
为 571nm。
结果与讨论
按测定方法 ,以试剂空白为参比 ,对 10个不同浓度的对照品溶液测定 571 nm处的吸光度 ,以吸光
第 26卷 第 3期 应 用 化 学 Vol.26 No.3
2009年 3月 　　　　　　　CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY　　　　　　　 Mar.2009
图 1　吸光度与人参皂甙质量的线性关系
Fig.1　Relationshipbetweentheamountof
saponinsandtheabsorbance
度对人参皂甙质量作图 ,如图 1。从图中可看出 ,人
参皂甙含量在 100 ～ 600 μg之间 ,有良好的线性关
系 。对线性范围内的皂甙质量(μg)和吸光度进行
线性回归处理 ,得回归方程 Y=392.47x+104.18
(R2 =0.998 5),式中 Y为质量(μg), x为吸光度 。
按测定方法 ,对 6份相同的对照品溶液显色后 ,
测定 571 nm处吸光度 x分别为 0.456、 0.448、
0.452、0.456、0.460和 0.447、相对标准偏差 RSD
为 1.12%,表明方法具有良好的精密度。
按测定方法对 6份竹节人参样品溶液分别加入
一定量的人参皂甙对照品溶液 ,测定吸光度 ,计算皂
甙含量 ,结果如表 1所列 。由表 1的数据可知 ,不同
样品的平均回收率为 99.54%,相对标准偏差较小 ,
说明本测定方法具有很好的准确度。
表 1　回收率实验结果(n=6)
Table1　Resultsofrecovery(n=6)
NO. Samples/μg Added/μg TotalFound/μg Recovery/% AverageRecovery/% RSD/%
1 35.98 40.00 75.65 99.2 99.54 0.97
2 32.25 40.00 71.72 98.7 99.54 0.97
3 25.32 40.00 65.43 100.3 99.54 0.97
4 19.86 40.00 59.22 98.4 99.54 0.97
5 23.46 40.00 63.82 100.9 99.54 0.97
6 31.23 40.00 71.16 99.8 99.54 0.97
　　按测定方法 ,分别将对照品溶液及样品溶液在显色后每隔 20min测定 1次吸光度 ,结果列表 2。由
表 2可知 ,样品溶液和对照品溶液在显色后 2 h内吸光度变化都不大 , RSD均较小 ,说明样品溶液显色
2 h以内测定是稳定的。
表 2　稳定性实验结果(n=6)
Table2　Resultsofstability(n=6)
Absorbence Agingtime/min
20 40 60 80 100 120
RSD/%
ReferenceSample 0.772 0.760 0.753 0.747 0.740 0.735 1.80
Sample 0.356 0.348 0.342 0.340 0.331 0.323 3.46
　　对同一竹节人参样品各 3份分别用本文的分光光度法和 HPLC法测定皂甙含量 ,结果如表 3所列。
从表中可以看出 , 2种方法测定结果基本相同 。
表 3　不同测定方法实验结果
Table3　Resultsofdifferentmethods
Method Measurement
1 2 3
Average/%
HPLC 3.13 3.08 3.25 3.15
Spectrophotometry 3.09 2.96 3.16 3.07
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Jiangxi(江西科技出版社), 1995
359　第 3期 向东山等:分光光度法测定竹节人参甲醇提取物中皂甙含量
　 2　ChineseAcademyofMedicalSciencesInstituteofDrug(中国医学科学院药物研究所)Auths(著).RecordofTradition-
alChineseMedicine(No.1)(中药志(第一册))[ M] , Chapt.2(第 2章).Beijing(北京):Pepole′sMedicalPublishing
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DeterminationofSaponinsinMethanolExtractfrom
PanaxJaponicusbySpectrophotometry
XIANGDong-Shana＊ , ZHAIKunb
(aHubeiKeyLaboratoryofBiologicalResourcesProtectionandUtilization,
ResearchInstituteofBiologicalTechnology;bColegeofChemistryandEnvironmentEngineering,
HubeiInstituteforNationalities, Enshi445000)
Abstract　Saponinsofpanaxjaponicuswasdeterminedbyspectrophotometryat571 nmwavelengthwith
ginsenosideRb1asareference.Theresultsshowedlinearitybetweenthequantityandtheabsorbance, andthe
linearrangeofsaponinswas100 ～ 600 μg.TheregressionequationwasY=392.47x+104.18(R2 =
0.998 5).Theaveragerecoveryratewas99.54% andtheRSDwas0.97%.Themethodiscomparableto
HPLC.Themethodissimple, rapidandaccurate.
Keywords　panaxjaponicus, saponin, spectrometricmethod, determination
360 应 用 化 学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 26卷