全 文 ：野生冬菇产病原拮抗物的工艺参数确定
韩启灿，霍光华 *，罗桂祥，胡殿民，张 宝，陈明辉
(江西农业大学 生物科学与工程学院 / 南昌市生物资源保护和利用重点实验室，江西 南昌 330045)
摘 要：为开发绿色野生药用大型真菌源饲料抗菌添加剂，本研究采用杯碟法筛选活性菌株和一剂量法测定
效价，通过单因素试验法、Plackett-Burman筛选、最陡爬坡、中心组合试验、响应面分析及正交试验优化抗菌物
质的发酵生产工艺，获得了一株对病原菌具有高效、广谱抗性的野生冬菇 0612-9，其 5倍浓缩发酵液对金黄色葡
萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌圈直径分别为 23.26 mm、16.12 mm和 19.70 mm，与盐酸四环素比，抗金
黄色葡萄球菌的相对效价为 1806.34 U/mL。0612-9菌株发酵生产抗菌物质的最佳工艺为：土豆 270.53 g/L，麸皮
7.429 g/L，葡萄糖 30 g/L，MgSO4·7H2O 0.4551 g/L，KH2PO4 2 g/L，培养基初始 pH值为 4.0，发酵周期 11 d，接
种量 5 mL/100 mL，转速 180 r/min，摇床温度 27 ℃，装液量 100 mL/250 mL。该胞外抗菌物质在低于 60 ℃、
pH1.0～6.0抑菌活性稳定，对紫外照射不敏感，乙酸乙酯为抗菌物质的最佳提取剂。
关键词：野生冬菇；发酵工艺；响应面法；抗菌物质
中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2014)03-0208-06
The fermentation process of anti-pathogenic bacteria
substances produced by a wild Flammulina ssp
HAN Qi-can, HUO Guang-hua*, LUO Gui-xiang, HU Dian-min, ZHANG Bao, CHEN Ming-hui
(Nanchang Key Laboratory of Bioresources Conservation and Utilization, College of Bioscience and Bioengineering,
Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China)
Abstract: To develop green feed antibacterial additives originated from wild edible and medicinal fungi, a total of 65 fungi
were screened by cup plate method, the potency were tested by a dose method and the process for the production of antimicrobial
substances were optimized by single factor experiment, the Plackett-Burman screening, steepest ascent, central composite design,
response surface analysis and orthogonal test. The 0612-9, a kind of wild mushroom produced the substances which possessed
broad-spectrum antibacterial activity. The antibacterial circle diameter of 5 times concentrated fermentation broth on
Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Monila albicans were 23.26 mm, 16.12 mm and 19.70 mm, the relative potency
against S.aureus was 1.806.34 U/mL. The optimal fermentation parameters were 270.53 g/L of potatoe, 7.429 g/L of wheat bran,
30 g/L of glucose, 0.4551 g/L of MgSO4·7H2O and 2 g/L of KH2PO4. The initial pH value of the medium was 4.0, the fermentation
period of 11day, packing in the volume of 100 mL/250 mL, inoculating at 5 mL ∶100 mL, rotating at speed of 180 r/min and
incubating at 27 ℃ respectively. The extracellular antibacterial substances could remain active less than 60 ℃, pH1.0-6.0.
Key words: Flammulina ssp; fermentation process; response surface methodology; antibacterial material
收稿日期：2013-09-04
基金项目：南昌市生物资源保护和利用重点实验室项目(2012-sys-04)
作者简介：韩启灿(1988-)，男，云南德宏人，硕士研究生，主要从事生物物质分离技术研究.
* 通信作者：E-mail：hgh3813899@sohu.com
中 国 预 防 兽 医 学 报
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
第 36卷 第 3期
2014 年 3 月
Vol. 36，No.3
Mar. 2014
doi: 10.3969/j.issn.1008-0589.2014.03.10
*Corresponding author
在畜禽养殖业中肠道疾病严重影响动物的生长
与发育，为诱发幼崽高死亡率的主要原因。大肠杆
菌(E.coli)和食源性金黄色葡萄球菌(S.aureus)分泌的
肠毒素等是引起畜禽腹泻与食物中毒的主要原因之
一 [1]。目前，畜禽腹泻的主要治疗对策是在饲料中
添加抗生素、化学合成药物等，然而该类药物长期
使用已经造成了病原抗药性和生物富集 [2]，开发绿
色饲料添加剂已成为该领域的发展方向。双孢菇、
白林地菇 [3]、蜜环菌 [4]、菌草灵芝 [5]、榆耳 [6]等野生
大型真菌具广谱抗菌活性，某些用作饲料添加剂已
展示出应用前景。本实验从 56种野生大型真菌中筛
选到一株对 S.aureus、E.coli 等病原菌具有强抑制活
性的野生冬菇(Flammulina ssp) 0612-9，进而探明了
该菌株发酵生产抗菌物质的培养基组成、发酵条件
和抗菌物质的提取条件，以提高其所产抗菌物质的
产量。
1 材料和方法
1.1 菌株及培养基56 种野生大型真菌的野生分
离菌 (具体名称略 )、S.aureus、E.coli、白色念珠菌
(M.albican)的标准菌株均由南昌市生物资源保护和
利用重点实验室保存。马铃薯葡萄糖琼脂培养基、
牛肉膏蛋白胨培养基、种子液体培养基、发酵液体
培养基 [7]、发酵基础培养基(葡萄糖 20 g、麸皮 10 g、
KH2PO4 3 g、MgSO4·7H2O 1.5 g、维生素 B1 0.1 g，
加水至 1 000 mL，pH自然)均由本实验室配制。
1.2 筛选抗菌活性菌株发酵液对病原菌的抑制活
性试验按照文献[8]进行。
1.3 活性菌株发酵液效价的测定以 S.aureus 为指
示菌，盐酸四环素 (1 mg=1 000 U)为标准品，采用
一剂量法测定浓缩 5倍发酵液的效价[9]。
1.4 抗菌活性物质的发酵生产条件
1.4.1 培养基组成优化 单因子法优选碳氮源：等
量的常用碳氮源(碳源：蔗糖、葡萄糖、玉米粉、可
溶性淀粉、甘露糖；氮源：麸皮、蛋白胨、酵母粉、
硝酸铵、尿素)分别替换发酵基础培养基中的相应成
分，进行发酵及其发酵液抗菌活性测定。响应面设
计：单因素优化基础上，首先采用 N=12的 Plackett-
Burman试验筛选出主因素，然后通过最陡爬坡试验
逼近最大响应区域，最后采用中心组合试验设计及
响应面分析对主因素作进一步优化。
1.4.2 摇瓶发酵条件优化 在上述发酵条件优化基
础上，以摇床温度、发酵周期、培养基初始 pH 值
和接种量为考察因素，采用 L16(45)的正交设计对野
生冬菇生产抗菌物质的发酵条件作进一步的优化。
1.4.3 抗菌活性物质的提取条件 抗菌活性物质的
稳定性：热稳定性、pH稳定性和紫外照射稳定性试
验方法参照文献[7]进行。抗菌活性物质提取剂选择
试验方法参照文献[10]。
1.4.4 试验设计方案和计算 采用 SASJMP9.0.2 软
件进行试验设计和计算。
2 结 果
2.1 广谱抗菌活性菌株的获得本研究筛选到一
株具广谱抗菌活性的野生冬菇 0612-9，实验结果显
示其发酵液对 S.aureus、E.coli及 M.albican的抑菌圈
直径分别为 23.26 mm、16.12 mm、19.70 mm，抑菌
效果均属高度敏感。发酵液乙酸乙酯粗提物对 S.aureus
的 MIC 为 1.25 mg/mL；10 mg/mL 发酵液乙酸乙酯
粗提物抑菌圈直径为 20.48 mm，与同等浓度盐酸四
环素(抑菌圈为 21.04 mm)的抑菌效果相近(图 1)。
2.2 发酵液的效价以盐酸四环素对 S.aureus 的抑
菌圈直径校正值为纵坐标，盐酸四环素浓度对数值
为横坐标绘制标准曲线(图 2A)。标准曲线的回归方
程为：Y=8.0976X-18.750，R2=0.980，其中 Y 为抑菌
圈直径的校正值(用 250 ppm的盐酸四环素来校正抑
菌圈直径)，X为盐酸四环素浓度的对数值(图 2B)。
图 1 野生冬菇菌株 0612-9 发酵液的抗病菌活性检测
Fig.1 Antibacterial activity of fermentation broth from
Flammulina ssp strain 0612-9
M.albican
Sterile water
Fermentation liquid
S.aureus
Sterile water Sterile water
Fermentation liquid Tetracycline Extracts
韩启灿，等. 野生冬菇产病原拮抗物的工艺参数确定第 3期 209
E.coli
Sterile water
Fermentation liquid
A: The inhibitory standard curves of Tet on S.aureus; B: The inhibitory
effect of fermentation broth from Flammulina ssp strain 0612-9 on
S.aureus (1 for the fermentation broth, 2 for the Tet)
图 2 野生冬菇菌株 0612-9 发酵液对 S.aureus的抑制效价
Fig.2 Determination of inhibitory titer of fermentation liquid
on S.aureus
On the numerical of the concentration
of tetracyline hydrochlorideTh
e
co
rre
ct
io
n
va
lu
e
of
di
am
et
er
of
in
hi
bi
tio
n
zo
ne
/m
m
4
3
2
1
0
-1
-2
-3
-4
2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0
经测定，野生冬菇发酵液抗 S.aureus 的抑菌圈
直径平均校正值为 7.76 mm (发酵液与 250 ppm四环
素分别形成的抑菌圈直径之差，即 23.48 mm～
15.72 mm)，代入标准曲线回归方程得到 5倍浓缩发
酵液的相对效价为 1 806.34 U/mL。
2.3 0612-9 菌株发酵培养基碳、氮源筛选 以葡
萄糖、麸皮汁作为发酵培养基的碳、氮源时，所得
发酵液对 S.aureus 的抑菌圈分别达到 20.71 mm、
20.43 mm，抑菌活性显著高于其他供试碳氮源 (表
1)，试验结果表明 0612-9 菌株发酵生产抗菌物质的
最佳碳、氮源分别为葡萄糖与麸皮汁。
2.4 显著因素的 Plackett-Burman 筛选试验设计
及结果见表 2。对实验结果进行多元回归分析和方
差拟合，获得抑菌圈直径(Y)与自变量的多元一次回
归模型为：Y=17.15+3.238X1+0.367X2+1.168X3+0.44X4-
1.705X5+0.337X6+0.65X7+0.895X8+0.643X9+0.397X10
(X1 马铃薯、 X2 葡萄糖、 X3 麸皮、 X4KH2PO4、
X5MgSO4·7H2O、X6接种量、X7转速、X8发酵周期、
X9温度、X10装液量)。该模型拟合性评价表明，其
决定系数 R2为 0.991，拟合性良好。
t 检验分析结果显示，该菌株发酵生产抗菌活
表 2 N=12 PB 试验设计与结果(指示菌为 S.aureus)
Table 2 Plackett-Burman design and result (indicator bacteria: S.aureus)
Diameter
Y (mm)
14.86±0.39
17.72±0.12
11.50±0.06
12.54±0.59
10.51±0.26
16.34±0.26
16.25±0.24
21.96±0.13
18.41±0.06
19.77±0.17
22.48±0.12
23.46±0.21
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
t-value
p-value
Potato
X1 (g/L)
150
150
150
150
150
150
250
250
250
250
250
250
26.99
0.0236**
Glucose
X2 (g/L)
10
10
10
30
30
30
10
10
10
30
30
30
3.06
0.2014
Bran
X3 (g/L)
3
7
7
3
3
7
3
3
7
3
7
7
9.74
0.0652*
KH2PO4
X4 (g/L)
2
1
1
1
2
2
1
2
2
1
1
2
3.67
0.1695
MgSO4·H2O
X5 (g/L)
0.5
0.5
1
1
1
0.5
1
0.5
1
0.5
0.5
1
-14.21
0.0447**
Inoculation
volume/% X6
5
10
10
5
10
5
5
10
5
10
5
10
2.81
0.218
RPM
X7 (r/min)
180
150
180
180
150
150
150
180
150
150
180
180
5.42
0.1162
Fermentation period
X8 (d)
7
10
7
10
7
10
10
10
7
7
7
10
7.46
0.0849*
Temperature
X9 (℃)
28
28
25
28
25
25
25
25
28
28
25
28
5.36
0.1174
Medium volume
X10 (mL)
100
100
80
80
100
80
100
80
80
80
100
100
3.31
0.1870
Dry weight of mycelium
(g/100 mL)
0.12
0.10
0.11
0.14
0.31
0.70
0.16
0.17
0.06
0.09
0.23
0.15
Run
表 1 不同碳、氮源对抗菌活性的影响
Table 1 Effect of different carbon and nitrogen sources on antibacterial activity
碳源 Carbon source
氮源 Nitrogen source
葡萄糖 Glucose
蔗糖 Sucrose
玉米粉 Corn
可溶性淀粉 Soluble starch
甘露糖 Mannose
CK (Without the addition of carbon source)
麸皮 Bran
蛋白胨 Peptone
酵母粉 Yeast extract powder
NH4NO3
尿素 Carbamide
CK (Without the addition of nitrogen source)
菌丝干重
Dry weight of mycelium (g/100 mL)
0.18
0.08
0.16
0.07
0.05
0.09
0.25
0.34
0.10
0.02
0
0.01
金黄色葡萄球菌
Staphylococcus aureus
23.43±0.49a
19.12±0.39c
21.00±0.63b
17.11±0.39d
15.97±0.25e
0
20.43±0.49a
8.12±0.39d
16.76±0.63b
0
0
12.04±0.33c
大肠杆菌
Escherichia coli
20.71±0.62a
18.15±0.11b
16.17±0.22c
11.64±0.23d
0
0
22.71±0.22a
0
10.54±0.30c
13.89±0.03b
0
8.60±0.28d
白色念珠菌
Candida albicans
21.04±1.2a
19.30±0.93b
19.76±0.21b
15.49±0.24c
11.21±0.48d
0
21.21±0.95a
11.17±0.83c
0
14.40±0.70b
0
0
Note: The analysis using the Duncans Multiple Ranger Test method, the same column with different letters indicate a significant difference
(p<0.05, n=4), below
中 国 预 防 兽 医 学 报 2014年210
表 5 中心组合模型的回归系数评价
Table 5 Estimation of regression coefficients for
central composite design model
参数
Parameter
Intercept
X1
X2
X3
X1*X2
X1*X3
X2*X3
X1*X1
X2*X2
X3*X3
参数评价
Parameter estimate
23.3917
0.6827
0.7882
-0.6962
-0.4788
-0.2813
-0.1813
-0.8608
-0.8184
-0.9704
标准误
Standard error
0.2617
0.1736
0.1736
0.1736
0.2268
0.2268
0.2268
0.1690
0.1690
0.1690
89.39
3.93
4.54
-4.01
-2.11
-1.24
-0.80
-5.09
-4.84
-5.74
0.0000*
0.0028*
0.0011*
0.0025*
0.0610
0.2434
0.4429
0.0005*
0.0007*
0.0002*
Pr>│t│t-value
性物质的极显著(置信度大于 99 %)影响变量有马铃
薯、MgSO4·7H2O，显著(95 %< 置信度 <99 %)影响
变量为麸皮。其中马铃薯、麸皮为正效影响因素，
MgSO4·7H2O为负效影响因素。后续试验选择土豆、
麸皮、MgSO4·7H2O三因素作进一步优化。
2.5 最陡爬坡试验逼近最大响应值的响应区域表
3 显示，处理 3 所得响应值最大，采用第 3 次实验
条件为响应面实验因素的中心水平点作进一步优
化，其余因素取值为：葡萄糖 30 g/L，KH2PO4 2 g/L、
接种量 10 mL/100 mL、转速 180 r/min、温度 28 ℃、
装液量 100 mL、发酵周期 10 d。
2.6 中心组合试验优化发酵工艺试验设计及结果
见表 4。拟合获得二次多元方程为：Y=23.391+
0.683X1+0.788X3-0.696X5-0.479X1X3-0.281X1X5-0.181X3X5
-0.861X12-0.813X32-0.970X52，其中 Y 为抑菌圈直径。
该二次多元回归方程的决定系数 R2为 0.9273，拟合
性较好，所以该方程可用来预测和分析 0612-9 菌株
发酵产抗菌物质的活性强弱。回归分析显示，所有
一次项与二次项对发酵液抗菌活性均有显著影响
(p<0.05) (表 5)，然而交互项影响均不显著，表明三
因素之间交互作用相对较小。响应面及等高线图(图
3)表明，响应曲面的顶点与等高线的中心点均在所
选的因素水平内，表明该水平范围内存在极大值。
计算可得：土豆为 270.53 g/L，麸皮 7.429 g/L，Mg-
SO4·7H2O 0.4551 g/L时取得最大响应值 26.84 mm。
2.7 野生冬菇发酵条件的正交试验表 6表明，四
因素对野生冬菇发酵上清液的抗菌活性均有不同程
度的影响，极差数值比较表明摇床温度影响最为显
著，依次是接种量、发酵周期和培养基的初始 pH
值。水平极差分析结果表明野生冬菇摇瓶发酵产抗
菌活性物质的最佳发酵培养条件组合是：摇床温度
27 ℃、接种量 5 %、发酵周期为 11 d、培养基初始
pH值为 4.0。
2.8 最优发酵工艺参数综上所述，野生冬菇发酵
生产抗菌物质的最佳发酵工艺参数为：土豆 270.53 g/L，
麸皮 7.429 g/L，葡萄糖 30 g/L，MgSO4·7H2O0.4551 g/L，
KH2PO4 2 g/L，培养基初始 pH 值为 4.0，发酵周期
表 3 最陡爬坡试验设计及结果
Table 3 Experimental design and results along
the path of steepest ascent
Run
1
2
3
4
5
土豆
Potato (g/L)
200
230
260
290
320
麸皮
Wheat bran (g/L)
5
6
7
8
9
MgSO4·7H2O
(g/L)
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
菌丝干重
Dry weight of
mycelium (g/100 mL)
0.18
0.17
0.27
0.18
0.16
抑菌圈直径
Inhibition zone
(mm)
21.75±1.90bc
19.13±0.81c
24.37±2.19a
22.63±0.60b
21.20±1.04bc
显著因素 Significant factors
表 4 中心组合试验设计及结果
Table 4 Experimental design and result of
central composite method
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
土豆 Potato
(g/L)
-1(230)
-1
-1
-1
1(290)
1
1
1
-1.682(210)
1.682(310)
0(260)
0
0
0
0
0
0
0
0
0
麸皮 Wheat bran
(g/L)
-1(6)
-1
1(8)
1
-1
-1
1
1
0(7)
0
-1.682(5.3)
1.682(8.7)
0
0
0
0
0
0
0
0
MgSO4·7H2O
(g/L)
-1(0.4)
1(0.6)
-1
1
-1
1
-1
1
0(0.5)
0
0
0
-1.682(0.33)
1.682(0.67)
0
0
0
0
0
0
抑菌圈直径
Inhibition zone(mm)
22.20±0.22
22.00±0.13
25.42±0.56
23.00±0.12
25.68±0.14
22.86±0.22
25.49±0.76
23.44±0.51
12.60±0.27
25.26±0.26
12.22±0.41
25.88±0.53
24.22±0.25
23.02±0.48
26.98±0.55
26.00±0.28
26.84±0.13
26.12±0.42
26.04±0.33
26.38±0.11
Run
A: Surface layer of the mutual-affection of potato and wheat bran
concentration on antibacterial effects; B: Surface layer of the
mutual-affection of potato and MgSO4·7H2O concentration on
antibacterial effects; C: Surface layer of the mutual-affection of wheat
bran and MgSO4·7H2O concentration on antibacterial effects
图 3 3 个主因素影响抗菌活性的响应面及等高线
Fig.3 The response surface and contour curve for antibacterial
effects of three main factors
A B C
Y Y Y
X5X5X1 X1 X3X3
韩启灿，等. 野生冬菇产病原拮抗物的工艺参数确定第 3期 211
11 d，接种量 5 mL/100 mL，转速 180 r/min，摇床
温度 27 ℃，装液量 100 mL/250 mL。
2.9 抗菌活性物质提取
2.9.1 抗菌物质稳定性 为了能够控制抗菌物质提
取过程中的条件，本实验研究了温度、pH和紫外照
射对发酵液中抗菌物质活性的影响，结果表明当温
度达到 80 ℃、pH>6.0 时抗菌物质显著失活，而该
抗菌物质对紫外线照射不敏感(图 4)。
2.9.2 抗菌物质提取剂的选择 表 7 显示，发酵液
的乙酸乙酯、正丁醇萃取相均表现出抑菌活性，而
石油醚萃取相无抑菌活性。据相似相容原理，可大
致判断该抗菌物质为中等极性。乙酸乙酯对发酵液
抗菌成分的提取效果最佳，因此选用乙酸乙酯作为
发酵上清液抗菌物的提取溶剂。菌丝体各萃取相均
无抗菌活性，表明抗菌物质为胞外产物。
3 讨 论
真菌液体培养过程中，发酵液产生多糖、多肽、
核酸、酶、甾醇、维生素及具有抗生素作用的多种
化合物，其营养丰富，并且具有抗菌、抗癌、消
炎、提高免疫等生物活性。目前，从药用大型真菌
中探寻天然抗菌剂的研究也有报道。马慧妮等 2006
年研究表明多孔菌发酵液乙酸乙酯提取物能够显
著抑制 S.aureus、E.coli和枯草芽孢杆菌[11]。
真菌冬菇的菌丝体含有较高的脂溶性维生素 E，
菌丝体干粉具有显著免疫活性，其发酵液和菌丝体
含有必需氨基酸、微量元素等多种营养成分，可以
开发为新型营养饮料、保健药、食品添加剂等，然
而用作抗菌剂的研究鲜有报道。本研究筛选到一株
具有广谱抗菌活性的野生冬菇 0612-9，其发酵液的
乙酸乙酯提取物对 S.aureus 的 MIC 为 1.25 mg/mL，
远小于辛英姬等研究所得茶树菇多糖对 S.aureus 的
MIC 值 (6.25 mg/mL) [12]，表明本研究获得的野生
冬菇对 S.aureus 的抑制作用显著高于茶树菇多糖。
该野生冬菇的 5 倍浓缩发酵液与盐酸四环素活性相
近，其抗 S.aureus 的相对效价为 1 806.34 U/mL，具
有强抑菌效果，并且在低于 60 ℃、pH1.0～6.0 和
紫外照射下活性稳定，有望开发成为绿色饲料添加
剂，以替代目前存在诸多缺点的兽用抗生素。
在微生物发酵代谢产物的研究中，发酵工艺优
化起着举足轻重的作用。目前，通过响应面法优化
生物反应过程的报道较多，大部分取得较好的优化
表 7 液体发酵产物各萃取组分抑菌活性
Table 7 Antibacterial activity of extracts from liquid
fermentation product
发酵产物
The fermentation products
发酵液
Fermentation liquid
菌丝体
Mycelium
提取剂
Extractant
石油醚 Petroleum ether
乙酸乙酯 Ethyl acetate
正丁醇 Butyl alcohol
水相 Aqueous phase
石油醚 Petroleum etherr
乙酸乙酯 Ethyl acetate
正丁醇 Butyl alcohol
水相 Aqueous phase
抑菌圈直径
Inhibition zone (mm)
-
15.52±0.49
10.30±0.89
-
-
-
-
-
Note: K is Bacteriostatic circle diameter of the sum of the level of each
factor, k=K/4，R=kmax-kmin
表 6 野生冬菇发酵条件正交试验结果
Fig.6 The results of orthogonal test of the fermentation
conditions of wild Flammulina ssp
试验号因素
Foutor
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
K1
K2
K3
K4
K1
K2
K3
K4
R
摇床温度
（℃）
27(1)
28(2)
29(3)
30(4)
27
28
29
30
27
28
29
30
27
28
29
30
91.86
85.64
86.12
64.58
22.97
21.41
21.53
16.15
6.82
发酵周期
（d）
9(2)
11(4)
11
9
10(3)
8(1)
8
10
8
10
10
8
11
9
9
11
82.72
76.88
83.48
85.12
20.68
19.22
20.87
21.28
2.06
培养基
初始 pH值
6(3)
4(1)
6
4
4
6
4
6
7(4)
5(2)
7
5
5
7
5
7
84.94
82.12
78.78
82.36
21.24
20.53
19.70
20.59
1.54
接种量
（%）
6(3)
5(2)
7(4)
4(1)
7
4
6
5
5
6
4
7
4
7
5
6
81.02
89.28
82.34
75.56
20.26
22.32
20.59
18.89
3.43
抑菌圈
直径(mm)
21.22
25.00
20.04
15.50
21.44
19.52
23.00
18.00
25.20
22.04
22.00
15.00
24.00
19.08
21.08
16.08
A: Effect of temperature on antibacterial activity; B: Effect of pH on
antibacterial activity; C: Effect of UV on antibacterial activity
图 4 抗菌物质稳定性
Fig.4 Stability of antimicrobial substance
In
hi
bi
tio
n
zo
ne
(m
m
)
Temperature (℃ ) pH Time (min)
In
hi
bi
tio
n
zo
ne
(m
m
)
In
hi
bi
tio
n
zo
ne
(m
m
)
A B C
30
20
10
0
25
20
15
10
5
0
14
13
12
12110080604020CK 131211109876543210 706050403020100
中 国 预 防 兽 医 学 报 2014年212
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(本文编辑：彭永刚)
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结果。本研究采用响应面法与正交设计优化了野生
冬菇 0612-9的发酵工艺，获得了最佳工艺参数。由
于野生冬菇 0612-9菌体生物量与抗菌活性物质的积
累不一致，主因素碳、氮源和矿物质的使用量直接
影响到两者的增幅，因此本研究结果对在该抗菌物
质放到生产中降低发酵成本和提高生产效率具有指
导意义。
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韩启灿，等. 野生冬菇产病原拮抗物的工艺参数确定第 3期 213