全 文 ：第 26卷 第 4期
2 0 0 8年 4月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 26 No. 4
Apr. 2 0 0 8
761
中华中医药
761
学刊
大蓟对 5种癌细胞抑制作用的研究
王振飞,李 煜,戴宝贞,贾瑞贞
(内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室, 内蒙古 呼和浩特 010021)
摘 要:目的: 研究大蓟对癌细胞生长的抑制作用。方法:细胞形态观察、活细胞计数法和克隆形成率法研究
大蓟对人白血病细胞 K562、肝癌细胞 HepG2、宫颈癌细胞 H e la、胃癌细胞 BGC823、结肠癌细胞 HT - 29生长的抑
制作用。结果:大蓟可使五种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、裂碎等变化, 生长受到明显抑制,抑制率最高可
达 81. 73%。结论:大蓟有确切的抑癌作用。
关键词:大蓟; 癌细胞;生长; 抑制作用
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2008) 04 - 0761 -02
Study on Inh ib itory Effects ofC irsium Japon icum
F isch. DC on F ive K inds ofHum an Carc inoma Ce lls
WANG Zhen-fe,i L I Yu, DA IB ao-zhen, JIA Rui-zhen
( Key Laboratory ofM amm alRep roductive B iology and B iotechnology, M in istry of
E du cation, InnerM ongolia University, H uhhot 010021, InnerM ongolia, Ch ina)
Abstract: Ob jective : T o investigate the inh ib itory effec ts o fC irsium japonicum F isch. DC on grow th of hum an ca rc i-
nom a ce lls. M ethod s: M orpho log ical change obse rva tion, live cell accoun ting and c loning efficiency w ere u sed to inve sti-
gate the inh ibito ry effec ts o fC irs ium japonicum F isch. DC on hum an chronic m y lo id leukem ia K562 ce l,l hepa tom a
H epG2 cel,l cervica l ca rc inom aH e la cel,l gastric carcinom a BGC823 ce ll and co lonic carcinom aHT -29 cel.l Results:
G row th o f the five k inds of ce lls w as significan tly inh ibited byC ir sium japonicum F isch. DC, highest inh ib it ra te w as 81.
73% and ce ll m orpho log ica l change s inc luded shrinkage, roundne ss, floa ting and crum bling. C onclusion: C irsium
japon icum F isch. DC has re liable carcinom a - inhibiting effects.
Keywords: C irsium japonicum F isch. DC; ca rcinom a ce l;l g row th; inhibito ry e ffec ts
收稿日期: 2007 - 11 - 04
基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30460054 )
作者简介:王振飞 ( 1981 - ) ,男, 河北易县人, 2004级硕士研究生,
研究方向:细胞工程与中药。
通讯作者:李煜 ( 1956 - ) ,男,河北蔚县人,副教授,硕士研究生导
师,博士,研究方向:主要从事专业:细胞工程。 Te:l 0471
- 4995867 - 8017, E -m ai:l liyu66@ 126. com。
笔者在临床上见一癌症病人,经中医中药治疗, 取得十
分满意的效果,在征得主治医生同意后, 将其方中出现频率
较高的中药制成提取液,逐一扩大抑癌筛选范围, 发现其中
的大蓟提取液具有良好作用, 现将大蓟的研究情况报道如
下。
1 材 料
1. 1 药材 大蓟生药购于内蒙古中蒙医院药房。取生药
适量,六蒸水洗 3遍, 烘干, 称量; 用适量 3. 5%乙酸浸湿,
充分烘干;六蒸水浸泡过夜, 武火煮沸, 文火煎煮 20m in, 纱
布过滤, 滤渣加适量六蒸水置 115e 高压蒸汽锅内 30m in,
纱布过滤;合并两次滤液, 2e 冰箱中静置 72h, 高、中、低速
滤纸, 0. 45Lm、0. 22Lm 微孔滤膜逐级过滤; 滤液蒸发浓缩、
灭菌、4e 保存, 使用时以培养液稀释至所需质量分数 (以
生药计算 )。
1. 2 器材与试剂 倒置相差显微镜 ( N ikon ec lipseTE2000
-U ), 超净台 (苏州净化设备有限公司 ), CO2培养箱 ( GAL-
AXY & BINDER), 24孔培养板 ( BIOF IL ), RPM I1640、高糖
DMEM ( G IBCO ), 胎牛血清 ( TBD )。
1. 3 癌细胞系 人白血病细胞系 K562、肝癌细胞系
H epG2、胃癌细胞系 BGC823、宫颈癌细胞系 H e la、结肠癌细
胞 HT -29(均由本实验室传代保种 ), 均常规传代培养。
2 方 法
2. 1 实验分组 每种细胞均设对照组 (不加药 )与观察组
(加药 ),观察组分设高 ( 12m g /mL )、中 ( 6m g /mL )、低 ( 2mg /
mL ) 3个剂量组。
2. 2 倒置相差显微镜下观察细胞形态变化取对数生长期
的 5种癌细胞, 均以 2 @ 104 /孔接种于 24孔培养板, 接种
24h后加药。加药后 8h、24h、48h于倒置相差显微镜下观
察细胞形态变化并拍照。
2. 3 台盼蓝拒染法计活细胞数 接种、加药同 2. 2。加药
后每隔 24h各组均取 5孔细胞台盼蓝拒染法计活细胞数,
每孔计 3次, 5孔取平均值, 计算出当天的生长抑制率 (抑
制率 = [ (对照组平均活细胞数 -观察组平均活细胞数 ) /
对照组平均活细胞数 ] @ 100% ) [1 ],连续 6天。
2. 4 克隆形成率的检测 (不包括 k562) 取对数生长期
的 H epG2、H e la、BGC823、HT - 29细胞, 以 500个 /孔接种于
6孔培养板, 接种 48h后加药, 每个浓度设 3复孔, 静置
120h后, 弃培养液, PBS洗 2 次, 甲醇 /冰醋酸 3: 1 固定
DOI：10.13193/j.archtcm.2008.04.90.wangzhf.060
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20m in,吉姆萨染色 20m in, 显微镜下计数大于 50个细胞的
克隆数。计算出各组的克隆形成率,克隆形成率 = ( 3孔平
均克隆数 /500) @ 100% [2]。
2. 5 抑制效果的判断与分析 ¹ 细胞形态的观察与分析;
º平均抑制率: 6天的生长抑制率相加取平均值 ; »克隆形
成率:观察组与对照组间比较采用 V 2检验。
3 结 果
3. 1 大蓟对 5种癌细胞形态的影响 对照组: K562(图 1)
大小均匀,胞体圆整, 折光性好, 日益密集; H epG2(图 3)、
H e la(图 5)、BGC823(图 7)和 HT - 29(图 9)紧贴板壁, 胞
间紧密接触,胞质透亮, 可见分裂相, 细胞集落不断扩大。
观察组:加药后 8h, K562多数大小不均, 胞膜内陷或出泡;
H epG2、He la、BGC823和 HT -29部分胞体回缩, 胞质发暗、
有颗粒物积累。加药后 24h, K562(图 2)大部分形态异常,
或皱缩或内容物释放形成 /鬼影0,折光性差, 板底明显可
见碎渣样物质; H epG2 (图 4)和 H ela (图 6 )很多皱缩、变
圆、脱壁, 难觅分裂相, H epG2(图 4)板底已明显可见碎渣
样物质; BGC823(图 8)和HT - 29 (图 10 )多数胞体回缩、
丧失胞间联系, 少数变圆,部分细胞内明显可见空泡, 。加
药后 48h, k562多数崩解; H epG2、H e la大多数脱壁、碎裂,
碎渣量大; BGC823、HT - 29部分脱壁并出现碎渣。
3. 2 大蓟对 5种癌细胞的平均抑制率 表 1。由表可见,
大蓟对 5种癌细胞的生长都有明显抑制作用, 高浓度组的
平均抑制率均大于 50% ;但对它们的抑癌强度不同: K562
> H epG2 > H ela> BGC823 >HT - 29。
表 1 大蓟对 5种癌细胞的平均抑制率 (% )
项目 12m g /m L 6m /m L 2m g /mL
K562 81. 73 59. 29 27. 06
H epG2 73. 46 50. 92 18. 26
He la 59. 75 40. 32 13. 52
BGC823 53. 83 34. 07 6. 37
HT - 29 52. 50 32. 25 4. 30
3. 3 大蓟对 4 种癌细胞克隆形成率的影响 表 2。
由表可见, 各加药组克隆形成率均极显著低于对照组 ( P
< 0. 01), 说明大蓟对 4种癌细胞的生长都有明显抑制作
用。
表 2 大蓟对 H epG2 H ela BGC823
HT -29克隆形成率的影响 (% )
项目 H epG2 H ela BGC 823 HT - 29
对照组 28. 00 22. 00 19. 00 25. 60
2. 00 5. 73 6. 53 7. 13 10. 13
6. 00 0. 40 1. 53 2. 13 3. 47
12. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00
注:各组克隆形成率与对照组相比均有极显著差异, P <
0. 01。
4 讨 论
近年来, 越来越多的癌症病人愿意主动接受中医药治
疗, 中医药越来越显示出它的强大生命力。研究有效的抗
癌中药特别是无毒中药更有其特殊的临床价值, 对于中医
药走出国门、挺进世界,为更多的癌症病人减除痛苦是必不
可少的重要一环。大蓟是一种常用、无毒中药,临床应用广
泛, 本实验从形态观察、活细胞计数、克隆形成率检测三方
面证实其对来源于血液、消化、生殖 3个系统的 5种癌细胞
均有明显抑制作用, 显示出良好的体外抑癌效果, 提示值得
进一步深入研究为其临床抗癌应用提供参考。
参考文献
[1 ] 张卓然.细胞培养学与细胞培养技术 [M ].上海:上海科学技
术出版社, 2004: 424.
[2 ] 章静波.细胞生物学实用方法与技术 [M ].北京:北京医科大
学中国协和医科大学联合出版社, 1995: 77.