全 文 ：人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期
细 柱 五 加 果 实 提 取 物
对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用
张正光 钱士辉＊
（南京中医药大学·江苏 南京·210028）
黄厚才
（江苏省中医药研究院·江苏 南京·210028）
摘 要：目的 研究细柱五加果实乙醇提取物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。 方法 将 60只小
鼠随机分成细柱五加果实的高、中、低剂量组以及阳性对照组、模型对照组、空白对照组共 6组。 6
组小鼠 ig给药 20 mL/(kg·d)。连续 14 d。第 14 d给药 1 h后，除空白对照组外，其余各组均 ip 0.1%
CCl4 0.2 mL/20g。 所有小鼠在 ip CCl4 16 h后采用眼球取血并脱颈椎处死。 然后离心取血清，剖腹
取肝。 分别将各组肝脏取出 0.1 g， 加 0.9 mL生理盐水进行匀浆。 检测血清中丙氨酸氨基转移酶
（ALT）、天门冬氨酸氨基转氨酶（AST）活性及肝匀浆中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）
活性的变化。结果 与模型对照组相比，不同剂量的细柱五加果实乙醇提取物均能显著降低血清中
丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转氨酶（AST）的活性及肝组织中丙二醛（MDA）的含量，
提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 结论 细柱五加果实乙醇提取物对四氯化碳致小鼠的急性肝
损伤有保护作用。
关键词：细柱五加；果实；乙醇提取物；四氯化碳；急性肝损伤；保护作用
The protective effects of the extracts of the fruits of Acanthopanax
gracilistylus on acute liver injury induced by carbon retrachloride in mice
Abstract: Objective: To study the protective effects of the ethanol extracts of the fruits of Acanthopanax gracilistylus on acute liver injury
induced by carbon retrachloride in mice. Methods: Sixty mice were randomly divided into the fruits of Acanthopanax
gracilistylus high dose group, middle dose group, low dose group, the positive control group, the model group and the normal
group. Six groups of mice were administrated orally 20 mL/(kg·d) for 14 days. Except the normal group , other groups were
injected 0.1% carbon retrachloride 0.2 mL/20g after 1 hour when the mice were administrated on the 14th day . After all the
mice were filled with stomach Carbon tetrachloride 16 hours, blood were obtained by eyeballs and the mice were cervical killed
off. Then the serum were separated by centrifuge and the livers were taken by cutting the belly. The livers of each group were
cutted 0.1 g and 0.9 mL physiological saline were added to carry on the refining. The change of the Alanine Aminotransferase
(ALT), Aspartate Aminotransferase (AST) in serum and the Malondialdehyde (MDA), Superoxide Dismutase (SOD) in liver
homogenate were examined. Results: Compared with the model group, different doses of the fruits of Acanthopanax gracilistylus
could significantly reduce the activity of ALT, AST in serum , the content of MDA in liver homogenate and enhance the
activity of SOD in liver homogenate. Conclusion: The ethanol extracts of the fruits of Acanthopanax gracilistylus has obvious
effects on acute liver injury induced by carbon retrachloride in mice.
Keyword: canthopanax gracilistylus; Fruits; Ethanol extracts; Carbon retrachloride; Acute liver injury; Protective effects
基金项目：江苏省公益研究项目（BM2010601）。
＊通讯作者：E－mil:njqsh205@126.com。
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期张正光等：细柱五加果实提取物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用
细柱五加果实为五加科细柱五加 Acanthopanax
gracilistylus W.W.Smith的干燥成熟果实。其味甘、微苦，
性温，归肝、肾经，具有补肝肾，强筋骨的功效，在临床上
用于治疗肝肾亏虚，小儿行迟，筋骨痿软等症状[1]。 目前
国内对细柱五加的研究主要集中在根皮上[2～9]，而有关于
果实的研究却鲜有报道。为了加强对细柱五加资源的综
合开发利用，我们对细柱五加茎、叶与果实的化学成分
进行了较为系统的研究[10～15]。本文通过研究细柱五加果
实乙醇提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用， 并对其作
用机理进行探讨，为细柱五加果实的开发利用提供依据。
1 材料与仪器
1.1 实验动物
昆明种小鼠 60 只（清洁级，雌雄各半，体重 18~
22 g）（南通大学实验动物中心，许可证号 SCXK（苏）
2008—0010）。
1.2 药物与试剂
细柱五加果实(采自江苏省盱眙县)、联苯双酯滴
丸（北京协和药厂，批号：09070105）、无水乙醇（南京
化学试剂有限公司，批号：10060710605）、冰乙酸（天
津市博迪化工有限公司，批号：20100712）、四氯化碳
（广东光华化学厂有限公司，批号：20100121）、生理盐
水（四川科伦药业股份有限公司，批号：B100827H）、
蒸馏水（江苏省中医药研究院自制）、花生油（上海嘉
里粮油工业有限公司 ）、ALT 试剂盒 、AST 试剂盒 、
MDA 试剂盒、SOD 试剂盒、 考马斯亮蓝蛋白试剂盒
（均由南京建成生物工程研究所提供）。
1.3 主要材料
圆底烧瓶、冷凝管（四川蜀牛玻璃仪器有限公司）；
橡胶管（济南晨生医用硅橡胶制品有限公司）；取样器
（赛默飞世尔科技公司）；匀浆器（海门市花凯实验玻璃
仪器有限公司）；灌胃针；腹腔注射针等。
1.4 主要仪器
电子天平（美国双杰兄弟（集团）有限公司）；旋转
蒸发仪(瑞士 Buchi 公司)；电热套（江苏省通州市申通
电热器厂）； 数显恒温水浴锅 （常州国华电器有限公
司）；离心机（美国 Beckman 公司）；紫外可见分光光
度计（上海校光技术有限公司）。
2 方法[16～17]
2.1 细柱五加果实乙醇提取物的制备
取细柱五加干燥果实 300 g， 以 2400 mL 80%乙
醇回流提取 2 次（每次 2 h），再以 2400 mL 40%乙醇
回流提取 1 次（2 h）。 合并提取液并减压回收溶剂得
乙醇提取浸膏，待用。将浸膏用新鲜蒸馏水溶解，分别
配制成高剂量组 2.8 g/kg、中剂量组 1.4 g/kg、低剂量
组 0.7 g/kg 三个浓度的样品。 样品的 ig 体积均为 20
mL/kg。
2.2 动物的分组与给药
取小鼠 60 只，随机平均分为细柱五加果实的高、
中、低 3个不同剂量组、阳性对照组（200mg/kg 联苯双
酯）、空白对照组和模型对照组。空白对照组和模型对
照组均 ig 同等剂量的蒸馏水 。 每天 ig 给药 1 次
（20mL/kg）。连续 14d。第 14d给药 1h后，除空白对照
组外， 其余均 ip 用花生油配制的 0.1%CCl4 0.2mL/
20g，将小鼠禁食 16h后采用眼球取血并脱颈椎处死。
2.3 肝脏指数的测定
将小鼠剖腹取出肝脏，用 4℃生理盐水冲洗，再用
滤纸吸干后称重。 计算肝脏指数。
肝脏指数=肝脏重量（mg）/体重（g）×100%
2.4 血清中 ALT、AST活性的测定
将收集到的血液以 4000 r/min 离心 10 min，制得
血清， 按照试剂盒要求采用赖氏法测定血清中 ALT、
AST的含量。
2.5 肝匀浆的制备和蛋白含量的测定
分别将各组肝脏取出 0.1g， 加 0.9mL生理盐水制
备成 10%的组织匀浆。 将该组织匀浆以 3000r/min 离
心 10min，取上清液。采用考马斯亮蓝 G-250法测定肝
匀浆中的蛋白含量。
2.6 肝匀浆中 MDA含量的测定
取 10%肝匀浆悬液， 按照 MDA测定试剂盒的操
作，依次加入各试剂。充分振荡均匀后，在 95 ℃水浴锅
中放置 40 min，取上清液于 532 nm处测定其吸光度。
2.7 肝匀浆中 SOD活性的测定
将 10%肝匀浆悬液稀释成 1%肝匀浆液， 按照
SOD 测定试剂盒的操作，依次加入各试剂，充分振荡
均匀后，在 37℃水浴锅中放置 40min，加入显色剂，混
匀后在室温下放置 10min， 于 550 nm 处测定其吸光
度。
2.8 统计学处理
采用 SPASS 11.5 对数据进行统计分析， 结果均
以 x±s表示。 多组间的比较采用完全随机设计的方差
分析；两组间的比较采用 t 检验，以 P<0.05 或 P<0.01
表示组间差异有统计学意义。
3 结果
3.1 肝脏指数的测定
与空白对照组相比，模型对照组肝脏指数显著升
高。 与模型对照组相比，各给药组的肝脏指数都显著
降低，细柱五加果实乙醇提取物对小鼠肝脏指数的影
响，结果见表 1。
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期
注：与空白对照组比较，△P < 0.01；与模型对照组相比，*P < 0.05；**P < 0.01
组别 剂量（g/kg） ALT（U/L） AST（U/L）
空白对照组 — 59.72±7.36 121.51±24.92
模型对照组 — 315.17±48.63△ 349.33±50.78△
阳性对照组（联苯双酯组） 0.2 126.47±35.41** 181.14±39.26**
高剂量组 2.8 182.84±36.12** 198.26±41.84**
中剂量组 1.4 197.12±44.67** 234.26±30.61**
低剂量组 0.7 209.23±56.24** 262.15±47.46**
表 2 细柱五加果实乙醇提取物对小鼠血清中 ALT、AST活性的影响（x±s，n=10）
注：与空白对照组比较，△P < 0.01；与模型对照组相比，*P < 0.05；**P < 0.01
表 3 细柱五加果实乙醇提取物对小鼠肝匀浆中 MDA含量、SOD活性的影响（x±s，n=10）
组别 剂量（g/kg） MDA（nmol/mgprot） SOD（U/mgprot）
空白对照组 — 11.62±3.31 128.34±29.42
模型对照组 — 23.93±2.55△ 67.17±15.14△
阳性对照组（联苯双酯组） 0.2 16.84±2.97** 105.33±25.49**
高剂量组 2.8 17.62±3.65** 98.91±16.74**
中剂量组 1.4 18.94±4.03** 89.15±20.31**
低剂量组 0.7 20.42±3.12* 85.41±15.53*
3.2 血清中 ALT、AST活性的测定
与空白对照组相比， 模型对照组中 ALT、AST 活
性显著升高。说明CCl4进入机体内能造成肝损伤。与
模型对照组相比，细柱五加果实乙醇提取物的高、中、
低剂量组均可使 ALT、AST 活性下降。 说明细柱五加
果实乙醇提取物对 CCl4 造成的急性肝损伤有保护作
用。 细柱五加果实乙醇提取物对小鼠血清中 ALT、
AST活性的影响，结果见表 2。
组别 剂量（g/kg） 肝脏指数（mg/g）
空白对照组 — 47.72±5.81
模型对照组 — 61.59±6.43△
阳性对照组（联苯双酯组） 0.2 48.94±6.02**
高剂量组 2.8 51.49±5.71**
中剂量组 1.4 53.56±6.14*
低剂量组 0.7 54.97±5.85*
表 1 细柱五加果实乙醇提取物对小鼠肝脏指数的影响（x±s，n=10）
注：与空白对照组比较，△P < 0.01；与模型对照组相比，*P < 0.05；**P < 0.01
3.3 肝匀浆中 MDA含量、SOD活性的测定
与空白对照组相比，模型对照组肝匀浆中的 MDA
含量显著升高，SOD活性显著降低。 与模型对照组相
比，细柱五加果实乙醇提取物的高、中、低剂量组均可
使 MDA含量降低，SOD活性升高。 细柱五加果实乙醇
提取物对小鼠肝匀浆中 MDA含量、SOD活性的影响，
结果见表 3。
4 讨论
肝脏是机体内重要的代谢器官。它在糖类、脂类、
蛋白质类、维生素类等多种物质的代谢中起着重要作
用。同时肝脏还具有分泌、排泄、生物转化等方面的功
能。 当肝脏出现损伤时人体的代谢则会出现障碍，并
影响其他器官的功能，严重时甚至会危及生命。
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期
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CCl4 是一种常见的诱导肝细胞损伤的化学物质。
其在进入机体后， 在细胞色素 P450 的作用下分解为
三氯甲烷自由基。三氯甲烷自由基既能够选择性地损
伤小叶中央区的肝细胞， 又能够与 O2快速结合转化
成过氧化三氯甲烷自由基， 从而引起脂质过氧化反
应，破坏肝细胞膜的结构和功能，最终导致肝细胞坏
死。这样就会使肝细胞内的转氨酶渗入到血液中而使
酶的活性升高。 ALT 与 AST 为机体肝细胞内的重要
转氨酶。 当肝细胞受到损伤时，肝细胞膜的结构遭到
破坏，通透性升高，ALT 与 AST 即从肝细胞内逸出而
进入到血液循环中。 此时血清中 ALT、AST 的含量高
低可以反映机体肝损伤的程度。 MDA 是脂质过氧化
反应的主要产物。其浓度的变化能够间接反映自由基
对肝脏组织的破坏程度。SOD是机体内的一种活性物
质，能消除生命体在新陈代谢而产生的有害物质。 其
能够阻止自由基与膜脂质和膜蛋白进行反应，从而保
护肝细胞。 MDA和 SOD是也反映氧自由基对肝细胞
损伤程度的敏感指标。
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