全 文 ：基金项目:科技部“重大新药创制”重大科技专项课题(No． 2009ZX09301 － 011)
作者简介:余小磊，女，研究方向:中药分析，E － mail:303628094@ qq． com
通讯作者:卢燕，女，博士研究生，副教授，硕士生导师，研究方向:中草药活性成分与质量控制，Tel:021 － 51980157，E － mail:luyan@ fudan．
edu． cn
国产日本当药中獐牙菜苦苷与当药苷的 HPLC含量测定及其品质评价
余小磊1，卢 燕2，黄 庆3，陈道峰2
(1．江西中医药大学药学院，江西 南昌 330004;2．复旦大学药学院生药学教研室，上海 201203;
3．日本富基株式会社，日本 神户 6580032)
摘要:目的 建立一种可以同时测定日本当药中獐牙菜苦苷与当药苷的方法，对我国引种与日本产的日本当
药进行品质评价和比较。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为 Phenomenex C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);流动相
为乙腈 －水，梯度洗脱，流速为 1 mL·min －1，柱温为 30 ℃，进样量为 10 μL，检测波长分别为 238、247 nm。结果
獐牙菜苦苷、当药苷分别在 0. 019 ～ 1. 234 mg·mL －1(r = 1)、0. 002 ～ 0. 232 mg·mL －1(r = 0. 999 8)内呈良好的线
性关系，平均加样回收率分别为 99. 50%、99. 90%，ＲSD 值分别为 1. 58%、2. 10%。我国引种日本当药与日本产样
品相比，个别成分相对含量略有差异，其中獐牙菜苦苷含量较高，达到了 97. 21 mg·g －1，而当药苷含量则较低;不
同产地的日本当药均以花中有效成分含量最高。结论 我国引种的日本当药中的獐牙菜苦苷含量高，很有开发价
值，该文所建方法为我国对国产日本当药的合理开发利用和质量控制提供了依据和技术。
关键词:日本当药;高效液相色谱;獐牙菜苦苷;当药苷;品质评价
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:A 文章编号:2095 －5375(2015)05 －0262 －004
Determination of swertiamarin and chiratin in Swertia japonica by HPLC and its quality evaluation
YU Xiao-lei1，LU Yan2，HUANG Qing3，CHEN Dao-feng2
(1． School of Pharmaceutical Sciences，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang
330004，China;2． Department of Pharmacognosy，School of Pharmacy，Fudan University，Shanghai
201203，China;3． Japan Tomimoto Co. ，Ltd. ，Kobe 6580032，Japan)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the determination of swertiamarin and chiratin in Swertia ja-
ponica，as well as to evaluate the quality of S. japonica samples from China and Japan. Methods The determination method
was developed on Phenomenex C18 column，eluting by a mixture of acetonitrile and water in gradient. The detector was set at
238 nm for swertiamarin and 247 nm for chiratin. Ｒesults The line ranges of swertianmarin and chiratin were 0. 019 ～
1. 234 mg·mL －1(r = 1)and 0. 002 ～ 0. 232 mg·mL －1(r = 0. 999 8)，respectively. The average recoveries were 99. 50%
(ＲSD = 1. 58%)and 99. 90%(ＲSD = 2. 10%)，respectively. The HPLC chromatograms of S. japonica samples from Japan
and China were similar except for the relative height of some peaks. Compared with samples from Japan，S. japonica cultivat-
ed in China contained more swertiamarin and less chiratin. Both swertiamarin and chiratin were present with high content in
flowers of S. japonica. Conclusion S. japonica was rich with swertiamarin as a potential medicinal resource. The quantita-
tive method can be used in the development and quality control of S. japonica in China.
Key words:Swertia japonica;HPLC;Swertiamarin;Chiratin;Quality evaluation
日本当药是龙胆科獐牙菜属植物 Swertia japon-
ica Makino的全草，性寒、味苦，归肝、肾、大肠经，具
有消湿热、健胃及抗胆碱的功效［1］，主要分布在日
本、朝鲜［2］。据文献报道，日本当药的粗提物对于
胃损伤及结肠癌有一定的修复及预防作用［2，3］，在
日本，主要作为苦味健胃剂来使用［2］，是一种很有
·262· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 5
DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2015.05.005
开发价值的药用资源。日本当药中富含环烯醚萜
类、三萜类和黄酮类化合物，其中环烯醚萜类成分獐
牙菜苦苷及当药苷具有多种生物活性，包括保肝、抗
胆碱、镇痛镇静和护肤护发作用等［4 ～ 7］，但现版日本
药局方的 Swertiae Herba 标准中仅测定獐牙菜苦苷
的含量［8］。我国的当药来源于同属植物瘤毛獐牙
菜(S. pseudochinensis Hara．)的全草，也具有清湿热、
健胃的功效，其质量控制方法以獐牙菜苦苷和当药
苷作为指标成分［9 ～ 12］。目前日本当药已在我国浙
江引种，但尚未建立相关的质量标准。为了评价国
产日本当药的质量，并比较日本当药与我国传统当
药的差异，本研究在文献方法基础上，建立了高效液
相色谱(HPLC)法同时测定日本当药中獐牙菜苦苷
和当药苷两种活性成分的含量，对日本当药不同批
次、不同产地及不同部位的样品进行了分析，并对日
本当药与当药进行了比较，以期为日本当药在我国
的成功引种及资源开发利用提供科学依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Agilent HP1200 型高效液相色谱仪;
AB135 － S天平(梅特勒 －托利多仪器有限公司);
US10300AH超声波清洗器(北京优晟联合科技有限
公司);DIY －200C型中药粉碎机(上海比朗仪器有
限公司)。
1. 2 试药 当药苷对照品(中国药品生物制品检定
所，批号:111742 － 200501);獐牙菜苦苷(自制，经质
谱、氢谱和碳谱确证结构，纯度大于 98%);4 批日本
当药药材中有 2批为日本原产样品，2 批为中国浙江
引种样品，经复旦大学药学院陈道峰教授鉴定均为
Swertia japonica Makino的全草，标本存放于复旦大学
药学院生药学教研室，6 批当药样品为市场上不同产
地的药材，经陈道峰教授初步鉴定为獐牙菜属植物的
全草，具体品种有待进一步鉴定;乙腈(国药集团化学
有限公司，色谱纯);水(杭州娃哈哈集团有限公司，去
离子水);其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex C18(4. 6 mm
× 250 mm，5 μm);流动相:乙腈 －水(0 ～ 10 min，
13% ～13%;10 ～ 12 min，13% ～ 20%;12 ～ 35 min，
20% ～50%;35 ～ 38 min，50% ～100%;38 ～ 50 min，
100% ～100%);流速:1 mL·min －1;獐牙菜苦苷检
测波长为 238 nm，当药苷检测波长为 247 nm;柱温:
30 ℃。在上述色谱条件下，獐牙菜苦苷和当药苷对
应的保留时间分别为 7. 9 min 和 11. 8 min，分离度
良好，色谱图见图 1。
图 1 HPLC色谱图(247 nm)
A．混合对照品;B．日本产日本当药;C．国产日本当药;D．当药
1．獐牙菜苦苷;2．当药苷
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称定对照品獐
牙菜苦苷 6. 17 mg和当药苷 1. 16 mg，分别置 5 mL容
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液
(浓度分别为 1. 234 mg·mL －1和 0. 232 mg·mL －1)。
2. 3 供试品溶液的制备 取日本当药或当药药材
粉末(过 3 号筛)约 0. 1 g，精密称定，置三角烧瓶
中，用移液管精密移取 10 mL甲醇于三角烧瓶中，称
重，超声处理(功率 200 W，频率 40 kHz)40 min，放
冷，称重，用甲醇补足所失重量，摇匀，过滤，所得滤
液作为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 将獐牙菜苦苷储备液依次稀
释至 2、4、8、16、32、64 倍，精密吸取上述稀释液及储
·362·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 5
备液各 10 μL注入高效液相色谱仪，以峰面积 Y 对
进样浓度 X 求得回归方程为 Y = 13 154X － 25. 541
(r = 1);将当药苷储备液依次稀释 2、4、8、16、32、64、
128倍，精密吸取上述稀释液及储备液各 10 μL 注入
高效液相色谱仪，以峰面积 Y对进样浓度 X求得回归
方程为 Y = 17 183X － 3. 156 2(r = 0. 999 8)。结果表
明，獐牙菜苦苷在 0. 019 ～ 1. 234 mg·mL －1内呈良好
的线性关系，当药苷在 0. 002 ～ 0. 232 mg·mL －1内呈
良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 取浓度为 0. 617 mg·mL －1的獐
牙菜苦苷溶液，按上述色谱条件连续进样 6 次，每次
进样 10 μL，獐牙菜苦苷峰面积的 ＲSD 值为
1. 13%;取浓度为 0. 007 mg·mL －1的当药苷溶液，
相同方法测定，当药苷峰面积的 ＲSD 值为 1. 90%。
结果表明该方法精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取批号为 74 － KY －2012M的日
本当药粉末(过 3 号筛)约 0. 1 g，精密称定，制备供
试品溶液，室温放置，分别于 0、3、5、7、9、12 h 进样
(每次进样 10 μL)，计算獐牙菜苦苷及当药苷含量，
其 ＲSD 值分别为 0. 54%和 1. 36%，表明供试品溶
液在 12 h 内稳定性良好;另于 1、2、3、4、5 d 进样
(每次进样 10 μL)，计算獐牙菜苦苷及当药苷含量，
其 ＲSD 值分别为 1. 52%和 2. 57%，表明供试品溶
液在 5 天内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取批号为 74 － KY －2012M的日
本当药粉末(过 3 号筛)0. 1 g，精密称定，平行 6 份，
制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定，计算得
到獐牙菜苦苷及当药苷平均含量分别为 59. 91
mg·g －1和 1. 84 mg·g －1，其 ＲSD值分别为 1. 9%和
2. 5%，结果表明该方法重复性良好。
2. 8 加样回收率考察 取批号为 74 － KY － 2012M
的日本当药粉末(过 3 号筛)0. 05 g，置于三角烧瓶
中，精密称定，平行 6 份，分别精密加入獐牙菜苦苷
对照品溶液(2. 848 mg·mL －1)1 mL 和当药苷对照
品溶液(0. 144 mg·mL －1)1 mL，再用移液管精密移
取 8 mL的甲醇，按供试品溶液制备方法进行处理，
测定并计算加样回收率，獐牙菜苦苷和当药苷的平
均回收率分别为 99. 5%、99. 9%，ＲSD 分别为
1. 58%、2. 10%，结果见表 1。
2. 9 样品测定
2. 9. 1 不同产地日本当药及当药的含量测定 取
各批次日本当药药材粉末及当药药材粉末(过 3 号
筛)约 0. 1 g，精密称定，制备供试品溶液，分别测定
其中獐牙菜苦苷及当药苷的含量，结果见表 2。
表 1 獐牙菜苦苷及当药苷的加样回收率(n = 6)
测定
成分
取样量
(g)
样品中含
量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得总
量(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
獐牙菜
苦苷
0． 050 42 3． 021 2． 848 5． 878 100． 32
0． 050 81 3． 044 2． 848 5． 946 101． 89
0． 050 20 3． 007 2． 848 5． 803 98． 17
0． 050 48 3． 024 2． 848 5． 883 100． 39
0． 050 32 3． 015 2． 848 5． 807 98． 03
0． 050 49 3． 025 2． 848 5． 828 98． 42
99． 5 1． 58
当药苷
0． 050 42 0． 092 0． 144 0． 240 102． 01
0． 050 81 0． 093 0． 144 0． 240 102． 43
0． 050 20 0． 092 0． 144 0． 233 97． 78
0． 050 48 0． 093 0． 144 0． 234 100． 35
0． 050 32 0． 093 0． 144 0． 236 99． 44
0． 050 49 0． 093 0． 144 0． 233 97． 36
99． 9 2． 10
表 2 日本当药及当药中獐牙菜苦苷和当药苷的含量比较(n = 3)
品种 产地 批号
獐牙菜苦苷含
量(mg·g － 1)
ＲSD
(%)
当药苷含
量(mg·g － 1)
ＲSD
(%)
日本当药 日本 74 － 31204A 74． 84 2． 40 1． 598 0． 83
日本当药 日本 74 － KY2012M 59． 91 1． 90 1． 840 2． 50
日本当药 浙江 浙江 － 1 84． 28 1． 60 0． 486 1． 66
日本当药 浙江 浙江 － 2 97． 21 0． 40 0． 304 2． 55
当药 四川 SC － 20140305 0． 189 2． 91 0． 455 2． 90
当药 辽宁 LN － 20140303 0． 397 2． 77 0． 686 0． 30
当药 陕西 SX － 20140301 0． 530 0． 44 0． 866 1． 41
当药 河北 HB － 20140303 0． 512 2． 87 0． 917 1． 14
当药 河北 HB － 20141114 0． 402 2． 34 0． 881 0． 54
当药 吉林 JL － 20141114 0． 429 1． 24 0． 818 1． 52
由结果可知，浙江引种的日本当药与日本产样
品相比，两者 HPLC色谱图中成分种类基本一致，但
个别成分相对含量不同，其中獐牙菜苦苷的含量以
浙江产样品较高，而当药苷含量以日本产样品较高。
日本当药与当药成分差异显著，尤其是獐牙菜苦苷
的含量远远高于 6 批当药商品中獐牙菜苦苷的含
量，当药苷的含量差异也比较明显。
2. 9. 2 日本当药不同部位的含量测定 从批号为 74
－KY －2012M及浙江 －1 2批日本当药药材中挑拣出
根、茎、叶和花 4 个部位，粉碎，精密称取各个部位药
材粉末(过 3号筛)约 0. 1 g，制备供试品溶液，分别测
定其中獐牙菜苦苷及当药苷的含量，结果见表 3。
表 3 日本当药不同部位中獐牙菜苦苷和当药苷的含量(n = 3)
品种 产地 批号 部位
獐牙菜苦苷含
量(mg·g － 1)
ＲSD
(%)
当药苷含
量(mg·g － 1)
ＲSD
(%)
日本当药 日本 74 － KY2012M 根 10． 20 2． 10 0． 617 1． 83
日本当药 日本 74 － KY2012M 茎 27． 27 2． 12 0． 305 2． 90
日本当药 日本 74 － KY2012M 叶 41． 87 1． 00 0． 505 2． 18
日本当药 日本 74 － KY2012M 花 117． 38 1． 92 8． 390 2． 81
日本当药 浙江 浙江 － 1 根 11． 95 2． 21 0． 491 2． 73
日本当药 浙江 浙江 － 1 茎 65． 04 2． 34 0． 160 1． 56
日本当药 浙江 浙江 － 1 叶 187． 83 1． 09 1． 005 2． 75
日本当药 浙江 浙江 － 1 花 274． 37 0． 16 1． 319 0． 68
由上述表中结果可知，无论是日本产还是浙江
·462· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 5
引种的日本当药中，獐牙菜苦苷及当药苷在花中的
含量都是最高的，而且远远高于其他部位，提示花期
为日本当药的最佳采收期。
3 讨论
獐牙菜苦苷及当药苷是日本当药和当药的主要
活性成分，本研究发现，无论是日本原产还是我国引
种的日本当药都富含獐牙菜苦苷，其含量不仅远远
高于日本药局方中日本当药中的獐牙菜苦苷的含量
标准(20 mg·g －1)［8］，也高于《中国药典》2010 年版
中当药中獐牙菜苦苷的含量标准(35 mg·g －1)［12］。
而与《中国药典》2010 年版当药的当药苷含量标准
(0. 7 mg·g －1)［12］相对照，日本原产日本当药含量
明显高于标准，引种的日本当药含量略低于标准。
因此，很有必要加强对国产日本当药的开发利用，同
时深入比较日本当药与当药的药效差异。
我国獐牙菜属植物有 79 种，市场上当药品种混
乱，质量参差不齐［9］。本研究从市场上收集到的 6
批当药药材质量差异明显，其中当药苷的含量基本
符合现行《中国药典》标准，但獐牙菜苦苷的含量都
远低于药典标准，为不合格药材，推测可能都是伪品
或混淆品，其具体植物来源还有待鉴定，也说明现行
当药质量标准急需完善，以提高其真伪鉴别的专属
性。今后研究中，将收集足够批次的正品当药与日
本当药样品，进行两种当药的比较与质量标准完善
研究。
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