全 文 ：第 27 卷 第 2 期
2009 年 2 月
河 南 科 学
HENAN SCIENCE
Vol.27 No.2
Feb. 2009
收稿日期： 2008-11-21
基金项目： 郑州市科技攻关项目（０７４SGYS３３２０５－２）
作者简介： 袁秀云（１９７０－），女，河南许昌人，副教授，博士研究生，主要从事植物生物技术研究工作 .
文章编号：1004-3918（ 2009）02-0175-03
贴梗海棠组培快繁技术研究
袁秀云， 张仙云， 马 杰
（郑州师范高等专科学校 生物技术研究所，郑州 ４５００４４）
摘 要： 对贴梗海棠的外植体进行了愈伤组织和植株再生体系研究. 结果表明，带芽茎段为最适外植体；诱导芽的最适培
养基为 MS＋６－BA １．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L；芽生长培养基为 MS＋６－BA ２．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L；在 １/２ MS＋NAA ０．３ mg/L
培养基上，生根率为 ９０ ％ .
关键词： 贴梗海棠； 组织培养； 快速繁殖
中图分类号： S ７２２．３ 文献标识码： A
贴梗海棠（Chaenomeles speciosa）是蔷薇科（Rosaceae）木瓜属（Chaenomeles）落叶小灌木，高可达 ２ m，花
３朵至 ５朵簇生于 ２年生老枝上，先叶后花或花叶同放，花色艳丽，树姿婆娑；枝干黝黑，枝型奇特，弯曲如铁
丝，是制作传统式盆景的上好材料 . 贴梗海棠它耐旱、喜光、耐寒，可植于庭园，林缘等处，也可盆栽，是春赏
花、秋观果的优良园林观赏植物；其果实又称皱皮木瓜，可以药用[1] . 贴梗海棠在我国栽培历史悠久，与木瓜
海棠（Chaenomeles sinensis）、垂丝海棠（Malus halliana）和西府海棠（Malus micromalus）一起被称为海棠四品
之一 . 长期以来，其繁殖主要用分株、扦插和压条的方法，产苗量低，市场价格高 . 通过离体器官的组织培
养，可以使其快速繁殖，降低成本，但目前此方面的研究还少有报道，因此，建立贴梗海棠高效快繁再生体系，
以期为其组培快繁以及遗传转化育种开辟一条有效可行的途径 .
１ 材料和方法
１．１ 供试材料及处理
20０７年 ６月从郑州师范高等专科学校校园内选取 ２年生带芽枝条. 将枝条剪成小段，放于自来水管下冲
洗 ５～６ h，去除表面污垢，然后在超静工作台上将叶片取下，用酒精浸泡 ２０ s，无菌水冲洗 ３次，再用 １０ ％次
氯酸钠灭菌 １０ min，切割成 ０．５ cm×１ cm的小块；将枝条用 ７０ ％酒精浸泡 ４５ s，用无菌水漂洗 ３次，再用 ０．１ ％
升汞灭菌 ８ min，无菌水冲洗 ３～４次[2]，剪成 １ cm的带芽茎段和不带芽茎段备用 .
１．2 试验材料
基础培养基（MS）、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、α-萘乙酸（NAA）、活性炭（Ac）. 培养基类型见
表 1 .
１．３ 实验方法
１．３．１ 愈伤组织的诱导 将叶片和茎段分别接种在
１，２，３，４，５，６号培养基上，每种培养基各接种 １０瓶，
每瓶 ３个外植体，进行愈伤组织的诱导（表 １）.
１．３．２ 愈伤组织的增殖 将愈伤组织切割接种于
７号和 ８号培养基上，每瓶 ２块愈伤组织进行增殖诱
导（表 １）.
１．３．3 芽的诱导 将芽分株接种于 ７号和 ８号培养
基上，每瓶接种 ２个，进行芽的生长诱导 .
１．３．４ 生根诱导 将小苗分株接种于 ９，１０，１２，１３号
培养基上进行培养，用于根的诱导 .
表 １ 培养基类型
Tab.１ The types of the medium
培养基配方培养基类型 编号
愈伤组织诱
导培养基
１ MS＋６-BA １．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L
２ MS＋６-BA １．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L＋KT ０．５ mg/L
３ MS＋６-BA ２．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L
４ MS＋６-BA ２．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L＋KT ０．５ mg/L
５ MS＋６-BA ３ mg/L＋NAA ０．２ mg/L
６ MS＋６-BA ３ mg/L＋NAA ０．２ mg/L＋KT ０．５ mg/L
增殖分化培
养基
７ MS＋６-BA １．０ mg/L＋NAA ０．１ mg/L
８ MS＋６-BA ２．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L
生根培养基
９ MS＋６-BA １．０ mg/L
１０ MS＋６-BA １．０ mg/L＋Ac ０．３ ％
１１
１２
１/２ MS＋NAA ０．３ mg/L
１/2 MS＋NAA ０．３ mg/L＋Ac ０．５ ％
DOI:10.13537/j.issn.1004-3918.2009.02.021
第 27卷 第 2期河 南 科 学
１．３．５ 培养条件 所有培养基中蔗糖质量分数为 ３ ％，琼脂质量分数为 ７．５ ％. pH值 ５．８～６．０，培养温度（２５±２）℃，
光照度 ２ ０００ lx，每天光照 １２ h .
２ 结果与分析
２．１ 不同培养基对愈伤组织诱导的影响
将叶片和茎段分别接种在 １，２，３，４，５，６号 ６种培养基上中进行愈伤组织的诱导，不断进行观察发现，在
诱导培养过程中，６种培养基的诱导率均较低，为 ２５ ％～４２ ％之间（见表 ２）. 对于叶片愈伤组织的诱导，首
先是第 １０天时叶片出现褶皱，接着从叶片边缘出现愈伤组织，愈伤组织为黄白色，且愈伤组织随着 ６-BA浓
度的增加，愈伤组织增多，但组织增生较慢；第 ３０天时褐变死亡，可见这几种培养基均不适合贴梗海棠叶片
正常愈伤组织的诱导 . 对于无芽茎段的诱导培养，６种培养基的诱导率均为 １００ ％，出现愈伤组织的过程为
从第 １５天开始，首先是茎段两端出现膨大，逐渐向茎段中央产生愈伤组织，愈伤组织也是黄白色，仅愈伤组
织的中心是淡绿色，组织疏松；到第 ３０天时，愈伤组织块的周边似乎死亡，随 ６-BA浓度的增加，愈伤组织块
增大，可见 ６-BA有利于愈伤组织的诱导 . 对于带芽茎段的诱导，除了茎段两端出现黄白色愈伤组织外，丛
生芽被诱导，芽的诱导率为 １００ ％ . 随着 ６-BA浓度的增大，愈伤组织块增大，但芽较矮，且芽逐渐成为黄白
色 . KT在低 ６-BA浓度条件下，对愈伤组织的产生没有不良的影响；当 ６-BA浓度增加时，KT有利于愈伤组
织的产生，但会加强愈伤组织的玻璃化，使愈伤组织疏松发白 .
表 ２ 不同培养基对贴梗海棠器官愈伤组织的诱导
Tab.２ Induction of callus from different orgains with different media in Chaenomeles speciosa
２．２ 不同培养基对愈伤组织增殖的影响
剥去无芽茎段外面的黄白色愈伤组织，将黄绿色愈伤组织分别接种于 ７号和 ８号培养基上进行增殖培
养 . 结果显示，在 ２种培养基上，无芽茎段的愈伤组织均有增大，但从原来的黄白色逐渐褐化死亡 .
２．３ 不同培养基对贴梗海棠芽分化的影响
切掉带芽茎段的愈伤组织，将丛生芽分株，将高约 １．５ cm的芽分别接种于接种在 ７号和 ８号培养基上
进行诱导，结果发现：在 ７号培养基上的芽生长缓慢，３０天时约 ２．５ cm，５０天时无增高；而在 ８号培养基上，
芽生长较快，３０天时形成高约 ６ cm的无根苗，５０天时苗高约 ８ cm；说明 ６-BA ２．０ mg/L＋NAA ０．２ mg/L的配
比较为适合贴梗海棠芽的生长，而 ６-BA和 NAA含量低时不利于芽的生长，两种培养基均不诱导芽的增殖
和生根 .
培养基 器官 诱导率/% 诱导状态
１号
叶 ２５ 第 １０天时出现皱缩，愈伤组织黄白色，疏松干燥，３０天时褐化死亡
无芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，３０天时愈伤组织周边黄白色，中央黄绿色
带芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，３０天时组织黄白色，丛生芽分化，芽绿色
２号
叶 ２５ 第 １０天时出现皱缩，愈伤组织黄白色，疏松干燥，３０天时褐化死亡
无芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，３０天时愈伤组织周边黄白色，中央黄绿色
带芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，３０天时组织黄白色，丛生芽分化，芽绿色
３号
叶 ３５ 第 １０天时出现皱缩，愈伤组织黄白色，疏松干燥，３０天时褐化死亡
无芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，愈伤组织块较大，周边黄白色，中央黄绿色
带芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，３０天时愈伤组织黄白色，丛生芽分化
４号
叶 ４０ 第 １０天时出现皱缩，愈伤组织黄白色，疏松干燥，３０天时褐化死亡
无芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，愈伤组织块较大，周边黄白色，中央黄绿色
带芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，３０天时愈伤组织黄白色，丛生芽分化
５号
叶 ４０ 第 １０天时出现皱缩，愈伤组织黄白色，疏松干燥，３０天时褐化死亡
无芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，愈伤组织块大，黄白色
带芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，愈伤组织黄白色，丛生芽分化，芽矮，黄白色
６号
叶 ４２ 第 １０天时出现皱缩，愈伤组织黄白色，疏松，３０天时褐化死亡
无芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，愈伤组织块大，黄白色
带芽茎段 １００ 第 １５天时出现愈伤组织，愈伤组织块大，丛生芽分化，芽矮，黄白色
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2009年 2月 袁秀云等： 贴梗海棠组培快繁技术研究
２．４ 不同培养基对贴梗海棠生根的影响
将贴梗海棠无根苗分别接种于 ９，１０，１１，1２号培养基上进行培养，３０天时发现在 ９号和 １０号培养基上均
无生根苗，且芽没有长高，生长处于停滞状态，芽基部褐化；在 １１号培养基上，生根率为 ９０ ％，根数量多，根
长 ４～７ cm，４５天时 ７～１０ cm；在 １２号培养基上，生根率为 ３５ ％，根较短为 ０．５～２ cm，４５天时根无明显增长 .
由此可见，MS基本培养基和 ６-BA不利于根的诱导，而 １/２ MS培养基和 NAA有利于根的诱导，活性炭对生根
有一定的抑制作用（表 ３）.
表 ３ 不同培养基对贴梗海棠生根的影响
Tab.３ Effect of different media on inducing roots in Chaenomeles speciosa
３ 结论
贴梗海棠的外植体组织培养及植株再生体系研究表明，叶片开始产生的愈伤组织疏松干燥，黄白色，最
后逐渐褐化死亡，不适合诱导愈伤组织；无芽茎段经过诱导培养产生的愈伤组织疏松，周边黄白色，中央黄绿
色，但愈伤组织不能增殖和分化，也不适合诱导愈伤组织；贴梗海棠丛生芽的诱导比较容易，以 MS基本培养
基中添加 １．０ mg/L ６-BA和 ０．２ mg/LNAA最为合适；６-BA的浓度过大，产生的愈伤组织疏松，颜色发白，同时
不利于芽的长高；而高浓度的 ６-BA和 NAA能促进芽的生长；KT能促进愈伤组织的产生，但会增加愈伤组织
的玻璃化程度，使其疏松发白，最终褐化死亡；１/２ MS和 NAA培养基有利于根的形成 . 在组织培养时，当外
植体被切割和接种时，损伤的切面和组织老化都会引起愈伤组织褐变，一般情况下，培养基中加入活性炭可
以减少愈伤组织的褐化[3]，而此实验结果表明，活性炭抑制贴梗海棠根的生成 .
参考文献：
［１］ 崔 波，李 服，马 杰． 郑州植物志［M］． 北京：中国科学技术出版社，２００８.
［２］ 陈正华． 木本植物组织培养及其应用［M］． 北京：高等教育出版社，１９８６．
［３］ 郑文静，赵海岩，杨国立． 植物组织培养操作过程中的常见问题及其解决办法［J］. 辽宁农业科技，２００１（２）：４９-５１．
Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Chaenomeles speciosa
Yuan Xiuyun， Zhang Xianyun， Ma Jie
（Institute of Biology Technology，Zhengzhou Teacher’s College，Zhengzhou ４５００４４，China）
Abstracr：In this paper the tissue culture and plant regeneration of Chaenomeles speciosa was researched． The
results show that the stem with buds is optimum explant． MS＋６-BA １．０ mg /L ＋NAA ０．２ mg /L is the optimum
medium for bud induction；MS＋６-BA ２．０ mg/L ＋NAA ０．２ g/L is optimum growth medium of buds；The best
medium for rooting is １/２ MS＋NAA ０．３ mg /L，the rooting rate reached ９０ ％．
Key words：Chaenomeles speciosa； tissue culture； callus induction
培养基 接种数/棵 生根数/棵 生根率/%
９ １２ ０ ０
１０ １４ ０ ０
１１ １０ ９ ９０ ％
１２ １４ ５ ３６ ％
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