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绞股蓝茶脂溶性提取物的气质联用分析及其抗氧化活性研究



全 文 :·Technique技术
2012.05·
食品工程
绞股蓝茶为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝 (Gynostem-
ma pentaphyllum) 的芽及幼嫩茎叶的茶艺加工品, 它以
绞股蓝顶芽下 1~4 节、 长 5~10cm 的幼嫩部分通过特殊
工艺制成。 绞股蓝主要有效成分为绞股蓝皂苷, 另外还
含有多糖类、 黄酮类、 氨基酸和维生素以及锌、 铜、 铁
和锰等微量元素, 具有抗疲劳、 抗缺氧、 降血脂、 降血
压和促进细胞新陈代谢以及临床治疗气管炎、 传染性肝
炎、 增强免疫、 抑制肿瘤和祛痰利尿等作用。
目前关于绞股蓝化学成分分析及乙醇提取物对
DPPH 自由基清除能力方面的报道较多, 而关于绞股蓝
脂溶性成分的组成及抗氧化活性的报道还很少。 有鉴于
此, 本研究拟运用 GC-MS联用技术对绞股蓝茶的脂溶性
成分中进行了分析, 并测定了其抗氧化活性, 以期为绞
股蓝茶的深度开发提供基础。
1 试验材料与方法
1.1 材料
1.1.1 材料与试剂
股绞蓝茶于 2011 年 11 月, 购于广西金秀大瑶山艺
耕堂茶庄;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 (DPPH); 石油醚、
无水乙醇、 磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、 铁氰化钾、 三氯
乙酸和氯化铁, 均为国产分析纯试剂。
1.1.2 仪器与设备
Trace DSQII 型气相色谱质谱联用仪, 美国 Finnigan
公司; WFJ-7200 型可见光分光光度计, 尤尼柯 (上海)
仪器有限公司; 万分之一分析天平, 赛多利斯科学仪器
(北京) 有限公司; HH-4 型水浴锅, 金坛市杰瑞尔电器
有限公司; RE-52A 型旋转蒸发器, 上海亚荣生化仪器
厂。
1.2 方法
1.2.1 样品的提取和制备
称取绞股蓝茶 10g 与萃取剂石油醚按料液比 1∶5 于
50℃进行冷凝回流萃取 2 次, 每次 2 h, 萃取后分别进行
过滤, 待 2 次萃取结束, 将 2 次所得的提取液一并过滤
入圆底烧瓶中, 在 40℃下旋转蒸发去除石油醚, 并在室
温下放置隔夜, 然后加乙醇稀释为浓度为 2mg/mL 的样
品溶液备用。
1.2.2 采用气质联用分析脂溶性成分的组成
色谱条件: 色谱柱 TR-35MS 石英毛细管柱 (30m×
0.25mm×0.25μm); 初始柱温为 50℃ (保持 1min), 然后
以 10℃/min 的速度升温至 200℃, 并保持 1min, 然后以
5℃/min 的速度升温至 300℃, 并保持 1min。 进样口温度
为 300℃; 载气为氦气, 流速为 1mL/min, 样品的进样量
为 1μL。 质谱条件: 电离方式 EI, 电离电压 70eV, 离子
源温度 200℃, 扫描质量范围 50~650m/z。 质谱数据库为
NIST05数据库。
1.2.3 DPPH自由基清除力测定
分别吸取不同浓度的提取物的乙醇溶液 2mL, 加入
2×10-4mol/L 的 DPPH 乙醇溶液 2mL, 摇匀后, 在室温,
黑暗处放置 30min。 以无水乙醇调零, 测定 517nm 处的
吸光值 A 样品。 同时, 测定样品溶液 2.0mL 与乙醇 2.0mL
混合液在 517nm 处的吸光值 A 空白, 再测定 2.0mL DPPH
溶液与 2.0mL 乙醇在 517nm 处的吸光值 A 对照。 同一测定
重复 3次。
绞股蓝茶脂溶性提取物的气质联用分析及其抗氧化活性研究
张美艳 1 刘 洋 2
(1.漯河职业技术学院食品工程系 2.河南科技学院食品学院)
【摘要】 本文采用溶剂萃取法提取了绞股蓝茶中的脂溶性成分, 用 GC-MS 联用技术对该脂溶性提
取物进行了分析。 采用 DPPH 自由基清除能力测定和铁离子还原力试验测定了该脂溶性提取物的体外抗
氧化活性。 结果表明: 绞股蓝茶中脂溶性提取物对 DPPH 自由基有很强的清除作用, 对铁离子也具有很
强的还原能力, 且均随着提取物浓度的增加呈线性上升。
【关键词】 绞股蓝茶; 脂溶性成分; 气质联用; 抗氧化
中图分类号: TS 202.3 文献标识码: A 文章编号: 1000-9868(2012)05-0105-03
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DOI:10.16167/j.cnki.1000-9868.2012.15.003
技术 Technique·
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DPPH自由基清除率= [1- (A 样品-A 空白) /A 对照] ×100%
1.2.4 还原铁离子能力测定
吸取 0.5mL 不同浓度的样品液加入 2.5mL 磷酸缓冲
液 (pH值 6.6, 0.2M) 及 2.5mL1%K3Fe(CN)6, 于 50℃水
浴中反应 20min 后迅速冷却, 并加入 2.5mL 10%的 TCA
(三氯乙酸) 溶液, 以 3 000r/min 离心 10min 后取上清液
2.5mL, 并加入 2.5mL蒸馏水及 0.5mL 0.1% FeCL3, 溶液,
混合均匀, 于 10min 后, 测定 700nm 的吸光值, 同时做
空白管调零。 还原力的高低用 700nm 吸光值的增量来表
示, 同一测定重复 3次。
2 结果与讨论
2.1 绞股蓝茶中脂溶性提取物成分分析
用溶剂萃取法提取绞股蓝龙须茶中脂溶性成分, 经
GC-MS 所得到的气相色谱图如图 1 所示, 用面积归一法
计算出相对含量, 相应质谱数据经计算机检索并经结合
文献查阅, 共鉴定出 8种化合物。
2.2 绞股蓝脂溶性提取物的 DPPH自由基清除力分析
研究表明: 自由基与机体的许多功能障碍和疾病的
发生有关。 因此, 研究自由基的检测方法并探讨物质对
自由基的清除作用具有重要意义。 DPPH (二苯代苦味酰
自由基) 分析法被广泛用于清除自由基物质性质的研究,
DPPH 在有机溶剂中是一种稳定的自由基, 其在 517nm
附近有强吸收 (呈深紫色)。 当自由基清除剂存在时,
DPPH 的孤对电子被配对, 其 517nm 吸收消失或减弱,
通过测定吸收减弱的程度, 可评价自由基清除剂的活性。
图 2 为绞股蓝脂溶性提取物清除 DPPH 自由基的活性,
随着绞股蓝脂溶性提取物浓度的提高, 其 DPPH 自由基
清除活性逐渐增大。
2.3 绞股蓝脂溶性提取物对 Fe3+的还原力分析
食用抗氧化剂抗氧化测定的主要基于不同抗氧化防
御体系机理, 及活性氧和羟自由基的减少、 脂质过氧化
的抑制和金属离子的螯合。 在大多数情况, 抗氧化作用
与氧化链式反应的阶段无关, 大多数非酶抗氧化作用
(自由基的清除、 脂质过氧化的抑制等) 受氧化还原反应
的调节, 因此本研究考察了绞股蓝茶脂溶性提取物对三
价铁离子的还原力 (700nm 的吸收光值越大表明还原力
越强)。 由图 3可知: 随着样品浓度的上升, 脂溶性提取
物 700nm 处的吸收光值呈线性上升, 即脂溶性提取物对
三价铁离子的还原力随其浓度的上升而增强。
3 结论
采用溶剂萃取法提取绞股蓝茶中的脂溶性成分, 用
GC—MS联用技术对该脂溶性成分进行分析。 鉴定出了 8
图 1 绞股蓝茶中脂溶性成分的总离子流图
编号 化合物名称 保留时间(s) 面积(%)
1 Ethanone,2,2-dihydroxy-1-phenyl- 3.59 80.34
2 Benzoic acid,3-methyl-2-nitro- 4.95 0.72
3 1-Buten-3-one, 1- (2-carboxy-4, -4-
dimethylcy clobutenyl) -
5.52 2.51
4 1,2 -Dimethoxy -4 - ( 1 -methoxy -1 -
propenyl) benzene
5.79 1.68
5 Acetic acid,N -[3 -(1 -hydroxy -1 -
phenylethyl)phenyl]hydrazide
5.91 2.16
6 5 -(P -aminophenyl) -4 -(P -tolyl) -2 -
thiazolamine
6.14 2.57
7 1,2 -Dimethoxy -4 -(1 -methoxyethenyl)
benzene
6.29 6.28
8 1-Heptatriacotanol 32.96 3.75
表 1 绞股蓝龙须茶中脂溶性成分化学组成与相对含量
图 2 绞股蓝茶脂溶性提取物的 DPPH 自由基清除活性
图 3 绞股蓝茶脂溶性提取物的还原力
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种物质。 抗氧化试验表明: 绞股蓝茶中脂溶性提取物对
DPPH自由基有很强的清除作用, 对 Fe3+也具有很强的还
原能力, 并呈明显的剂量关系。
参 考 文 献
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收稿日期: 2012-01-12
作者简介: 张美艳 (1978—), 女, 内蒙古人, 讲师, 研究方向食品化
学。
通信地址: (462000) 河南省漯河市双龙文景区大学路中段
仁用杏是山杏和优良甜仁杏的总称, 属蔷薇科杏属。
果实较少, 杏仁肥大, 有苦甜之分, 主要用于取仁, 故
称仁用杏。 其营养成分除了含糖量较低外, 在有机酸、
蛋白质、 脂肪、 Vc、 果胶、 钙、 钾、 铁、 硒和锰等元素
和多酚类物质的含量等方面均优于其他果品, 是集营养
和保健为一体的宝贵食品原料。 多酚类化合物是果实中
重要的抗氧化成分, 其具有抗菌、 消炎、 抗血栓、 抗病
毒、 抗癌和扩张血管等生理作用, 这通常是由其抗氧化
作用实现的, 且已被证实强于某些抗氧化维生素。 到目
前的为止初步分离方法中, 大孔树脂有选择性好, 吸附
容量大, 处理方便及吸附、 解析容易和操作简单等优点,
在天然物质的提取中得到了广泛应用。 本文以仁用杏成
熟果肉中多酚粗提物为对象, 对不同的树脂进行筛选试
验, 研究树脂对于仁用杏多酚的吸附特性, 并对纯化的
大孔树脂纯化仁用杏多酚的研究
黄东晓 伍 军
(北京农学院食品科学与工程学院)
【摘要】 通过静态、 动态吸附和解析试验对 6 种大孔树脂进行筛选, 并应用液质联用对所得到的纯
化样品进行了初步鉴定。 结果表明: HP2GML 型大孔树脂的整体吸附和解析性能表现好, 能够较好地富
集纯化仁用杏多酚。 其操作参数为仁用杏多酚液浓度 1.4mg/mL、 pH 值 5 和流速 1.0mL/min; 较佳的洗脱
条件为乙醇浓度 70%和洗脱流速 1.0mL/min。 初步判断仁用杏的多酚提取物中含有绿原酸、 芦丁、 儿茶素
和表儿茶素 4 种酚类物质。
【关键词】 仁用杏多酚; 大孔树脂; 纯化; 液质联用
中图分类号: TS 229 文献标识码: A 文章编号: 1000-9868(2012)05-0107-04
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