全 文 ：南 京 药 学 院 学 报
一九八 O年 第一期 (总第十 四期 )
云 芝 深 层 发 酵 工 艺
潘维新
徐丽仙
刘桂英
成爱东 .
渡祖芹
狄二林 .
Te e h n o l o g yo ft h e S ub me r ge d Fe r me n t at in o o f
P o l y st ie t u s ve r sie o l o r
P an W
e i x in
Xu Li x in a
Li uG u i yin g
h Ce n gA i don g
P u Z uq in
D 1E r l in
【提要】本文对云芝的深层发 酵工 艺进行 了研 究 , 并提 出了具体的工 艺流程 。
经多批发酵 , 初步认 为本工艺方法 简便 , 生产周期短 , 适合工业 生产 。
云芝 〔P 。 l y s t i c t u s v e r s i。 o l o r ( L . ) F r . 〕 是一种增强机体免疫功能的真菌类药物 。 国
外报道 , 云芝为肿瘤免疫治疗的药物 , 其子实体和发酵产物提取的多糖体可提高机体的免疫
功能〔’ 、 幻 。 野生云芝来源较少 , 为了大规模工业化生产云芝以解决临床供药间题 , 我们对云
芝的深层发酵工艺进行了研究 , 制定出具体的工艺流程 。 初步认为本工艺方法简便 、 生产周
期短 、 原材料价廉 、 适合工业生产 。 现报告于下 。
发 酵 工 艺
(一 ) 菌种来源
本工艺所用的菌种来自中国科学院微生物研究所分离保藏的云芝 〔P ol ys t i。 ut s v e r s i -
e o l o r ( L
.
) F r
. 〕 , 菌号 5 . 4 5 。
(二 ) 工艺流程简介
1 9 7 5年 1 0月 1 4日收稿
. 清江制药厂
7O
试管斜面菌种、 摇瓶种子、 一级种子罐培养、 二级种子罐培养 , 三级种子罐培养 , 发酵
罐 (五吨 )发酵培养一板框过滤或离心机分离忍喜董篡二篡霏翼取浓缩液弟混合液净糖浆剂
(三 ) 斜面菌种培养
培养基 : 马铃薯 (去皮煮汁 ) 2。% , 葡萄糖 2 . 2% , 酵母粉 。 . 2% , . K H : P O ` 。 . 3% ,
M g S O
` 0 . 0 5%
,
V B
: 0
.
0 0 1%
, 桑扛脂 1 . 5写 , 自然 p H 。
培养温度及时间 : 2 4一26 ℃培养 3一 4天 , 白色幼嫩 的菌丝体长满斜面即可作种 。 如暂不
作种可置于 4 ℃冰箱保存 。
( 四 ) 摇瓶种子培养
培养基 : 豆饼粉 1% , 葡萄糖 2 . 2% , 酵母粉 0 . 2 % , K H : P O 4 0 . 15 % , M g S O ` 。 . 05 % ,
V B : 0
.
0 0 1%
, 自然 p H 。
培养方法 : 取斜面菌种一管 , 接种于装 2 0 m l种子培养基的 1 0。。 m l三角瓶中 , 置往复式
摇床振荡培养 (摇床冲程 7 c m , 每分钟振荡 1 0 次 ) 。
培养温度及时间 : 24 一 26 ℃培养 3一 4天 , 至菌液由稀变稠 , 有清香味 , 大小 白 色 菌 球
(见图 I ) 布满时即可作种移入一级种子罐 。
图 I 云芝的菌球 图 l 云芝的菌丝体 ( X 1 0 2 4 )
(五 ) 种子罐培养
培养基 : 豆饼粉 1% , 葡萄糖 2 . 5% , 酵母粉 c . 2% , K H : P O ` 。 . 15 % , M g S O ` 。 . 05 % ,
豆油 (消沫剂 ) 0 . 2% , p H 6 。
接种量 : 一级种子罐 : 1 % , 二级种子罐 : 13 % , 三级种子罐 : 30 % , 罐压 : 。 . 3一 。 . 4
( k g / c m
“
)
, 通气量 : 1 : 。 . 3 ( v/ v/ 分 )通气搅拌 。
培养温度及转罐时间 : 26 一 28 ℃培养 , 至种子液由稀变稠 、 菌丝球由少 变 多 、 、由 小 变
大 , 镜检菌丝粗壮 , 菌丝细胞充满内含物 , 无空泡 , 同时 , 锁状联合出现较多 (见图 l ) ,
种子液有清香味 , 无杂菌污染即可转罐 。
(六 ) 发酵罐发酵培养
培养基 : 豆饼粉 1% , 葡萄糖 2 . 5% , K H : P O 4 O . 15 % , 入馆 5 0 ` 0 . 05 % , 豆油 (消沫剂 )
0
.
2%
, P H 6
。
接种量 : 1 7% , 罐压 0 . 3一 0 . 6 ( k g / e m “ ) , 通气量 : 1 : 0 . 3 ( v / v /分 )通气搅拌 。
培养温度 :2 6一招 ℃ 。
发酵周期代谢情况 :根据 1 13 1批 5 吨发酵罐菌丝生长量和养分消耗情况的测定结果 (见
图 1) 表明 :发酵开始后 , 发酵液还原糖减少 , p H值下降 ; 培养 30 至 40 小时 , 发酵液糖 分
的消耗剧增 , 菌丝量也剧增 ; 培养 50 小时菌丝体自溶 , 菌丝量减少 , 发酵液 p H值回升 。
怎仍
幼月08
声可斜
2于 盯
巾 勿 必 即 面 了
图 1 5 吨发酵罐 ( 1 1 13 批 )云芝发酵代谢曲线 ( 26 ℃ 士 1)
G
: 发酵液还原糖 ( g / l o o m l)
p H
: 发酵液 p H值
W
: 菌丝体干重 `g / 1 0。二 1)
T : 培养时间 (小时 )
发酵终点判断 (见表 1 ) : 发酵 38 一 40 小时发酵液 p H值降至 3 . 8 5一 4 . 06 , 残糖量降至
。 . 64 %一 0 . 87 % , 发酵液内布满大量白色菌球 ; 有浓清香味 ; 镜检菌丝细胞壁不平整 , 细胞
内出现许多空泡 , 菌丝体即将 自溶 。 此时即为发酵终点 , 可结束发酵 (放罐 ) 。
表 1 二批云芝发酵终点测定数据
压盆里立…二三…~一竺 一澹篡羔丽…一望生一阵二竺 ~ 一炸寸 ,’ 共二找二心子厂 { 0 。 6 4 { O。 8了一生鉴二生旦竺三竺兰二一 一 }
_
_ 4
_
_
_
菌 牲 体干 重 } _ _ _ }一乎黔焉 一 {一上竺生 卜士兰 一一 ” 厂 .1t 仗f 、 ` 一 刁 } 理O } 3 8、 J/ 、 日幼尹 』 {
放罐后处理 : 放罐后将菌丝体和发酵液分离 , 菌丝体经 9 5一 1 0 ℃热水提取 10 小时 , 并
浓缩 , 发酵液也浓缩 , 合并浓缩液供制备云芝糖浆 。
讨 论
(一 ) 发酵周期的控制问题 :
根据云芝在深层发酵过程中的代谢变化 (见 图 l )可知 , 云芝的发酵代谢是符合微生物深
层培养生长的一般规律 。 对于发酵终点的判断 , 目前以发酵液 p H值 (不低于 3 . 8) 和菌丝体
生长情况 (菌丝 自溶之前 ) 为主要依据 。 但是 , 为了获得最高产量的菌体多糖和滤液多糖 ,
今后必须在发酵过程的不同时期测定上述多糖体的含量 , 特别要探索菌沐合成胞内外多糖的
生化过程 , 以便更好地控制发酵终点 。
(二 ) 本工艺发酵产物的疗效间题 :
一九七七年十月 , 南京钟阜医院应用云芝糖浆治疗慢性迁延型肝炎 , 临床试验证明 , 可
使 G P T 降至正常 , 临床症状好转 。 又经无锡市传染病医院 、 启东县海东地区卫生院 、 苏州
市传染病医院 、 南京空军第一医院扩大临床试验也相续获得一定的疗效 。
一九七八年 四月又与启东肝癌防治研究所协作试用于肝癌癌前病变患者 , 经初步临床试
验证明可提高 A F P 的转阴率 。
参 考 文 献
〔1〕 T e t s u r o 1 K e k a w a , e t a l : G a n n 5 9 : 1 5 5一 1 5 7 , 1 9 6 8
〔2〕 严述常 : 中药研究资料 ( 3 ) , 中医研究院中药研究所情报资料室 , 1 9 7 7