全 文 ：★标准研讨★
雷丸药材定性和定量分析方法研究＊
胡珊梅 1 ,李玲玲 1 ,肖新月2＊＊ ,陈洁1
(1.厦门市药品检验所 ,厦门 361012;2.中国药品生物制品检定所 , 北京 100050)
摘要　目的:建立雷丸主要成分的定性与定量分析方法。方法:采用薄层色谱法对雷丸中的麦角甾醇 、麦角甾酮进行鉴别。
运用可见 -紫外分光光度法对雷丸所含的驱绦虫成分雷丸凝集素进行含量测定 , 以水为提取溶剂 ,采用 Fonlin酚法 ,测定波长
650nm。结果:应用所建立的方法对 13批雷丸药材进行定性与定量分析 , 结果 TLC斑点清晰 ,专属性强 , 均可检出雷丸的特
征斑点;13批雷丸药材雷丸凝集素的含量以牛血清白蛋白计为 0.61% ～ 4.23%;方法学研究结果表明 , 牛血清白蛋白的量在
52.76 ～ 263.8 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为 98.0%(RSD=1.0%, n=6)。结论:本方法操作简便 ,
重复性好 , 结果准确可靠 ,可用于雷丸的定性定量分析 ,以控制雷丸药材及相关产品的质量。
关键词:雷丸;薄层色谱法;可见 -紫外分光光度法;雷丸凝集素;麦角甾醇类
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:0254-1793(2010)09-1781-04
StudyonqualitativeandquantitativeanalysisofOmphalia＊
HUShan-mei1 , LILing-ling1 , XIAOXin-yue2＊＊ , CHENJie1
(1.XiamenInstituteforDrugControl, Xiamen361012, China;
2.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts, Beijing100050, China)
Abstracts　Objective:ToestablishthequalitativeandquantitativeanalysismethodsofOmphalia.Methods:With
TLCtoidentifyergosterolandergosta-4 , 6, 8(14), 22 -tetraen-3-one.Ultravioletspectrophotometryandco-
lourmetrywereusedtodeterminateOmphalialapidescenslectin(OLL)ofOmphaliabyFolinphenolagent, andthe
detectedwavelengthwas650nm.Theextractingsolventwaswater.Results:InTLCthespotsdevelopedwerequite
clearandexclusive.ThecontentsofOLLin13 lotsofsampleswere0.61%-4.23%, thelinearrangeofsenumal-
buminbovinewas52.76-263.8 μg(r=0.9997), theaveragerecoverywas98.0%(RSD=1.0%, n=6).Con-
clusion:Themethodissimple, accurateandcanbeusedforthequalitativeandquantitativeanalysisofOmphalia
andalsorelatedproducts.
Keywords:Omphalia;TLC;ultravioletspectrophotometry;Omphalialapidescenslectin(OLL);ergosterol
中国药典 2005年版一部收载的雷丸为白蘑科
真菌雷丸 OmphalialapidecsensSchroet.的干燥菌核 。
微苦 ,寒 ,归胃 、大肠经 ,具有杀虫消积作用 。用于绦
虫 、钩虫 、蛔虫病 ,虫积腹痛 ,小儿疳积 。目前雷丸药
源仍以野生为主 ,常腐生于竹根 、棕榈根下 ,在我国
西北 、西南 、华南各地均出产 ,以四川 、湖北 、云南 、贵
州等地产量最多 ,又称竹苓 、竹林子 、竹铃芝 、木莲
子 、雷实及雷矢等。近年来有关雷丸活性成分研究
表明 ,其中所含的雷丸凝集素(Omphalialapidescens
lectin, OLL)是一种蛋白酶 ,为雷丸主要驱虫 、抗肿
瘤活性的有效成分 [ 1, 2] 。中国药典 2005年版一部
雷丸标准收载有性状 、显微及化学反应鉴别 [ 3] ,缺
乏专属性的定性及定量指标 。
目前国内外对雷丸药材的定性与定量研究资料
极少 ,有关雷丸凝集素的检测主要采用生化的方
法[ 4 ～ 6] 。真菌类大多都含有麦角甾醇类成分 ,但未
见雷丸含有麦角甾醇的文献报道。为此 ,本文参照
文献 [ 4, 7]方法 ,研究建立雷丸药材中麦角甾醇类
—1781—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
＊
＊＊
中药质量标准研究和信息化体系建设平台(课题编号 2009ZX9308-004)课题内容之一;《中国药典 》 2010版一部标准研究课题(YZ-
214)
通讯作者　Tel:(010)67095432;E-mail:xiaoxy@nicpbp.org.cn
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.09.021
成分的薄层色谱鉴别方法和雷丸凝集素的紫外可见
分光光度定量分析方法 ,并对 13批雷丸样品进行检
测 ,结果薄层色谱斑点清晰 、分离度良好;雷丸凝集
素含量为 0.61% ～ 4.23%。以期为提高雷丸药材
的质量控制水平 ,更好地开发利用这一药材提供可
靠依据 。
1　仪器与试药
Lambda25紫外可见分光光度计 , MetlerAE-
240电子天平 ,厦门和达超声仪(功率 250 W,频率
33 kHz)。
雷丸药材分别购自安徽 、浙江 、厦门 、昆明 、贵
阳 、福建 、成都 、湖南 、湖北 、河南等地 。对照品:麦角
甾醇 、麦角甾酮 、牛血清白蛋白 (批号 140619 -
200718,含量测定用)均为中国药品生物制品检定
所提供 。
甲醇 、乙醇 、石油醚(60 ～ 90 ℃)、乙酸乙酯 、甲
酸 、磷钼酸 、碳酸钠 、氢氧化钠 、硫酸铜 (CuSO4 ·
5H2O)、酒石酸钠 、钨酸钠(Na2WO4· 2H2O)、钼酸
钠(Na2MoO4· 2H2O)、磷酸 、盐酸 、硫酸锂等均为分
析纯。
Folin酚试剂为自制 [ Folin酚试剂 A的配制:
试剂甲为 4%碳酸钠溶液与 0.2 mol· L-1氢氧化
钠溶液等体积的混合液;试液乙为 0.04 mol· L-1
硫酸铜(CuSO4· 5H2O)溶液与 2%酒石酸钠溶液
等体积的混合液 ,用时将试液甲 、试液乙 2种溶液
按 50∶1混合 ,即得 。 Folin酚试剂 B的配制:取钨
酸钠(Na2WO4· 2H2O)100 g与钼酸钠(Na2MoO4·
2H2O)25 g,加水 700 mL、85%磷酸 50 mL与盐酸
100mL,置磨口圆底烧瓶中 ,缓缓加热回流 10 h,放
冷 ,再加硫酸锂 150 g、水 50 mL与溴液 3 ～ 5滴 ,加
热煮沸 15min,冷却 ,加水稀释至 1000 mL,滤过 ,滤
液作为储备液 ,置棕色瓶中 ,临用前加水 1倍 ,摇匀 ,
即得。
2　薄层色谱鉴别
参照文献 [ 7]对雷丸中麦角甾醇类成分进行薄
层色谱鉴别 ,以麦角甾醇和麦角甾酮对照品为对照 ,
确定雷丸中含有麦角甾醇和麦角甾酮 ,但二者含量
均较低 。
2.1　溶液的制备 　取本品细粉 6g,加乙醇 30mL,
浸泡过夜 ,超声处理 30min,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加
甲醇 0.5 mL,使溶解 ,作为供试品溶液;另取麦角甾
醇 、麦角甾酮对照品 ,分别加甲醇制成每 1 mL含 2
mg和 1 mg的溶液 ,作为对照品溶液 。
2.2　薄层鉴别　吸取上述 3种溶液各 10 μL,分别
条带状点样于同一硅胶 G薄层板上(烟台大学生物
科学与工程研究所),以石油醚(60 ～ 90 ℃)-乙酸
乙酯 -甲酸(7∶4∶0.3)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,
置紫外灯(365 nm)下检视 。样品色谱中 ,在与麦角
甾酮对照品色谱相应的位置上 ,显相同亮蓝色的荧
光斑点;喷以 10%磷钼酸乙醇溶液 ,在 140 ℃加热
至斑点清晰;13批样品的色谱中 ,在与麦角甾醇和
麦角甾酮对照品色谱相应的位置上 ,均显相同蓝黑
色的斑点 ,见图 1。
图 1　雷丸药材薄层色谱图
Fig1　TLCchromatogramsofOmphalia
1-13:样品(sample)　S1:麦角甾醇对照品(ergosterolreferenesub-
stance)　S2:麦角甾酮对照品(ergosta-4, 6, 8(14), 22-tetraen-
3-onereferenesubstance)
A.UV 365nm　B.可见光(visiblelight)
—1782— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
3　雷丸凝集素含量测定
3.1　测定波长的选择　参照文献 [ 6] ,取雷丸供试
品溶液及牛血清白蛋白对照品溶液在 700 ～ 300 nm
下进行紫外 -可见光谱扫描;其光谱在 700 ～
430nm为一条斜线 ,见图 2,最后确定检测波长(650
±2)nm,测得的吸光度值比较适中。
图 2　雷丸药材紫外扫描图谱
Fig2　SpetrogramofOmphalia
1.对照品(referenesubstans)　2.样品(sample)
3.2　对照品溶液的制备　精密称取牛血清白蛋白
12.5mg,置 50 mL量瓶中 ,加水适量使溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得 (每 1 mL中含牛血清白蛋白
0.25mg)。
3.3　测定法　取本品细粉 0.3 g,精密称定 ,置具塞
三角烧瓶中 , 精密加水 10 mL, 称定重量 , 浸泡
30 min,超声处理 (功率 250 W, 频率 33 kHz)30
min,取出 ,放冷 ,再称定重量 ,用水补足减失的重量 ,
混匀 , 转移至离心管中 , 离心 10 min(3000 r·
min-1),精密吸取上清液 1 mL,置具塞试管中 ,精密
加入 Folin酚试剂 A5 mL,混匀 ,于 20 ～ 25 ℃放置
10 min,再分别加入 Folin酚试剂 B0.5 mL,混匀 ,于
20 ～ 25 ℃放置 30 min以上 ,以相应试剂为空白 ,照
紫外 -可见分光光度法(中国药典 2005年版一部附
录Ⅴ A),在 650nm波长处测定吸光度 ,从标准曲线
上读出供试品溶液中相当于对照品牛血清白蛋白的
重量(mg),计算。
3.4　方法学验证
3.4.1　线性关系的考察 　精密量取对照品溶液
0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mL,分别置具塞试管中 ,各管
分别加水至 1.0mL,混匀 ,按 “3.3”项下方法自 “精
密加入 Folin酚试剂 A5 mL, ……”起操作 ,测定吸
光度 ,以吸光度为纵坐标 , 牛血清白蛋白的重量
(mg)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得到线性方程为:
Y=2.344X+0.01886　r=0.9997
牛血清白蛋白的量在 52.76 ～ 263.8 μg范围内呈良
好的线性关系 。
3.4.2　重复性试验 　分别取 5号样品 6份 , 按
“3.3”项下方法操作 ,测得样品中雷丸凝集素平均
含量(n=6)为 0.67%, RSD为 1.6%。
3.4.3　稳定性试验　取 5号样品供试品溶液 ,分别
于 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 h测定 ,平均吸光
度(n=7)为 0.5866, RSD=0.19%。表明供试品溶
液在 3 h内稳定。
3.4.4　加样回收试验　精密称取已知含量的 1号
样品约 0.13 g, 精密加入牛血清白蛋白对照品
1.3480mg,按 “ 3.3”项下方法测定 ,从标准曲线上
读出牛血清白蛋白的量 (mg),并计算回收率(n=
6)为 98.0%, RSD为 1.0%。
3.5　样品含量测定　按 “ 3.3”项下方法测定了 13
批样品中雷丸凝集素的含量 ,结果见表 1。
表 1　样品中雷丸凝集素含量测定结果(以牛血清白蛋白计)
Tab1　ContentsofOmphalialapidescenslectin(OLL)
(calculatedasbovineserum)
样品编号
(No.)
收集地
(colectingregion)
产地
(resourceregion)
含量
(content)/%
1 安徽(Anhui) 安徽(Anhui) 0.91
2 浙江(Zhejiang) 安徽(Anhui) 4.23
3 厦门(Xiamen) 四川(Sichuan) 1.12
4 厦门(Xiamen) 云南(Yunnan) 1.00
5 昆明(Kunming) 云南(Yunnan) 0.72
6 贵阳(Guiyang) 贵阳(Guiyang) 0.64
7 厦门(Xiamen) 云南(Yunnan) 0.96
8 厦门(Xiamen) 四川(Sichuan) 0.61
9 成都(Chengdu) 云南(Yunnan) 0.93
10 湖南(Hunan) 湖南(Hunan) 0.97
11 湖北(Hubei) 湖北(Hubei) 0.86
12 厦门(Xiamen) 湖南(Hunan) 0.62
13 河南(Henan) 四川(Sichuan) 0.78
4　讨论
4.1　薄层色谱鉴别　曾参照文献 [ 7] ,分别比较了
乙醚 、乙醇和丙酮作溶剂提取 ,在相同条件下作薄层
色谱 ,以乙醇为溶剂提取显示的信息最多;试验了多
—1783—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
个展开系统 ,结果以石油醚(60 ～ 90 ℃)-乙酸乙酯
-甲酸系统斑点清晰 ,并发现甲酸在展开剂中的比
例对麦角甾醇的分离影响很大 ,分别实验了石油醚
(60 ～ 90 ℃)-乙酸乙酯 -甲酸(7∶4∶0.1)、(7∶4∶
0.2)和(7∶4∶0.3)3个比例 ,结果以石油醚(60 ～
90 ℃)-乙酸乙酯 -甲酸(7∶4∶0.3)能使麦角甾醇
与杂质分开 ,先在 365nm下检视 ,再以 10%磷钼酸
乙醇溶液为显色剂 ,日光检视。上述展开剂中甲酸
比例为 0.1和 0.2时 ,虽然斑点清晰 、集中 ,但麦角
甾醇与其他相邻斑点重叠 ,样品斑点在与对照品相
应的位置上不一致 ,因此 ,展开剂的配制要准确;麦
角甾醇的荧光不强 ,要放置过夜 ,次日观察较为清
晰 。该方法已被收入 2010年版中国药典。
4.2　雷丸凝集素含量测定　研究建立的可见分光
光度测定雷丸素方法 ,经实验表明 ,方法简便 ,重复
性好。实验过程中发现 ,加 Folin酚试剂 B时 ,要及
时在旋涡振荡器上充分混匀 ,以便在磷钼酸 -磷钨
酸试剂被破坏之前能发生还原反应 ,否则会使显色
不完全;吸光度与显色时间和温度有密切关系 ,第 2
次在 20 ～ 25℃放置时间不得少于 30min,待出现明
显蓝紫色后才能进行测定;试剂要临用前混合或稀
释 ,现用现配 。
4.3　限度确定　自全国收集的 13批雷丸样品中雷
丸凝集素含量测定结果为 0.61% ～ 4.23%, 2号样
品含量高出 12批样品平均值的 5倍 。认为在规定
限度时应作为异常数据剔除 ,不列入计算 。建议暂
定雷丸中雷丸凝集素的含量以牛血清白蛋白计 ,不
得低于 0.60%。此方法与限度已被中国药典 2010
年版采纳 。
参考文献
1　NanjingUniversityofChineseMedicine(南京中医药大学).Tradi-
tionalChineseMedicineDictionary(中药大辞典).Shanghai(上
海):ShanghaiScienceandTechnologyPublishers(上海科学技术出
版社), 2006.3457
2　CHENYi-tao(陈宜涛), SHIMei-fen(施美芬), YAOJin-jing
(姚金晶), etal.Comparisonofanti-tumoractivitiesbetweenpro-
teinsextractedfromSlerotiumsandMyceliaofOmphalialapidescens
Schroet.invitro(雷丸菌核与发酵菌丝蛋白体外抑瘤对比分析).
ProgModBiomed(现代生物医学进展), 2008, 8(7):1250
3　ChP(中国药典)2005VolⅠ (一部):248
4　SUNXiao-hui(孙晓辉), ZHANGGui-jun(张贵君), WANG
Zhuo-xuan(王倬 喧).Determinationofproteincontentin
blackfelowsbreadbyFolinphenolagent(Folin酚法测定雷丸中雷
丸素的含量).HeilongjiangMedJ(黑龙江医药), 2003, 16(2):89
5　YUYong-hai(于勇海), GONGJun(龚隽), YUMing-kun(余明
琨).StudiesonthepurificationandpropertiesofOmphalialapi-
descenslectin(雷丸凝集素的纯化及理化性质的研究).Mycosys-
tema(菌物系统), 2000, 19(2):278
6　GUOMao-di(郭毛娣), WANGShu-fang(王淑芳), ZHAO
Guan-hong(赵冠宏), etal.FermentationandextractionofLeiwan
(OmphalialapidescensSchroet.)proteinaseanditsactivationagainst
cysticeruscelulosaeinvitro(雷丸蛋白酶的发酵 、提取及对猪囊尾
蚴体外活性作用的初步研究).ChinPharmJ(中国药学杂志),
1997, 32(2):75
7　LIUXun-hong(刘训红), WANGYu-xuxi(王玉玺), FANGKe
-hui(房克慧), etal.ChineseMedicinalHerbsTLC(中药材薄层
色谱鉴别).Tianjin(天津):TianjinSienceandTechnologyPress(天
津科学技术出版社), 1990
(本文于 2010年 1月 14日收到)
—1784— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)