全 文 ：Mycosystema
菌 物 学 报 15 January 2011, 30(1): 108-115

jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2011 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.






基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项资金
*Corresponding author. E-mail: shenjinwen336699@163.com
收稿日期: 2010-07-24, 接受日期: 2010-10-25

原生质体再生对糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus 病毒脱除的效果
关园园 1 周素静 1 王震 3 麻兵继 2 高玉千 1 邱立友 1 戚元成 1
申进文 1*
1河南农业大学生命科学学院 郑州 450002
2河南农业大学农学院 郑州 450002
3驻马店市农业科学研究所 驻马店 463000



摘 要：以糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus 菌株新 831 和豫 6 为材料，从这两个菌株的菌丝体中提取了糙皮侧耳病毒基因组，
共有 3 个 dsRNA 片段，大小分别为 8.2kb、2.6kb 和 1.1kb。采用菌丝尖端分离脱毒、原基组织分离脱毒和原生质体再生脱毒
技术对糙皮侧耳菌丝体进行脱毒处理，利用 dsRNA 技术对脱毒效果进行检测。结果显示，原基组织分离脱毒后 3 个条带依
然存在；菌丝尖端分离脱毒后，8.2kb 和 1.1kb 2 个条带完全脱除，2.6kb 的条带亮度有所减弱；原生质体再生脱毒后 3 个条
带完全脱除；对 3 种脱毒技术得到的菌株进行生理生化指标测定，结果显示，原生质体再生脱毒菌株的菌丝生长速度、生物
量、呼吸强度、纤维素酶活等均明显优于出发菌株、原基组织分离脱毒和菌丝尖端分离脱毒菌株；栽培结果表明，原生质体
再生脱毒菌株前两茬菇的生物学效率达到 96.4%－99.1%，比出发菌株提高 19.9%－25.4%，并且菌盖宽度和长度有所增加，
表明原生质体再生技术可以有效脱除糙皮侧耳菌株病毒，提高糙皮侧耳栽培产量。
关键词：食用菌，糙皮侧耳，dsRNA 技术，脱毒，脱毒菌株，生理性状，糙皮侧耳栽培

Effect of protoplast regeneration technology on the virus-
elimination of Pleurotus ostreatus
GUAN Yuan-Yuan1 ZHOU Su-Jing1 WANG Zhen3 MA Bing-Ji2 GAO Yu-Qian1 QIU Li-You1
QI Yuan-Cheng1 SHEN Jin-Wen1*
1College of Life Science, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
2Agronomy College of Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
3Zhumadian Institute of Agricultural Science, Zhumadian 463000, China
DOI:10.13346/j.mycosystema.2011.01.018
Vol.30 No.1 109
菌物学报
Abstract: Three dsRNA bands with sizes of 8.2kb, 2.6kb and 1.1kb respectively, were isolated from two Pleurotus ostreatus strains,
Xin-831 and Yu-6. Three virus-eliminated methods, i.e. hyphal tips isolation virus-elimination (HTIVE), primordium tissue isolation
virus-elimination (PTIVE) and protoplast regeneration virus-elimination (PRVE) were applied to prepare virus-eliminated strains,
and the effect of virus-elimination was detected by dsRNA technique. The results showed that no dsRNA remained in the strains by
PRVE method. However, 3 dsRNA bands still remained by PTIVE method and one dsRNA band of 2.6kb, remained by HTIVE
method. The results also showed that the hyphal growth rate, biomass, breath intensity and cellulose activity of virus-free strains by
PRVE method were obviously superior to the original strains and strains by HTIVE and PTIVE methods. In addition, the biological
efficiency of virus-free strains was 96.4% to 99.1%, and 19.9%－25.4% higher than the original strains. Moreover, the length and
width of pileus increased. In all, these results indicated that protoplast regeneration technique could effectively eliminate virus of the
strains and improve yield of P. ostreatus.
Key words: edible fungi, Pleurotus ostreatus, dsRNA technique, virus-elimination, virus-free strains, physiological characteristics,
cultivation of Pleurotus ostreatus


食用菌产业已经成为我国农村经济中极具活
力的一项新兴产业。糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus 是
我国栽培范围最广，栽培量最大的食用菌。在糙皮
侧耳生产中其病毒病时有发生，糙皮侧耳菌株一旦
感染病毒，会出现抗病力减弱、子实体畸形、不出
菇、出菇茬数减少、产量降低等一系列的反常现象
（徐章逸和边银丙 2008）。因此，研究糙皮侧耳菌
株的病毒感染问题，及时检测出带病毒菌株，对带
病毒菌株进行脱毒处理，为生产提供无病毒优质菌
种，已成为一个刻不容缓的问题。
真菌病毒绝大多数为 Double-stranded RNA
（dsRNA）病毒。已发现的糙皮侧耳病毒主要有糙
皮侧耳球形病毒（oyster mushroom spherical virus，
OMSV）（Yu et al. 2003）、糙皮侧耳等面体病毒
（oyster mushroom isometric virus，OMIV）（Ro et al.
2006）、糙皮侧耳病毒-I（Pleurotus ostreatus virus-I，
POV-I）（Lim et al. 2005），糙皮侧耳病毒 -SN
（Pleurotus ostreatus virus-SN，POV-SN）（Kim et al.
2008）4 种，除 OMSV 为 Single-stranded RNA
（ssRNA）病毒外，其他 3 种均为 dsRNA 病毒。
Morris & Dodds（1979）首次将 dsRNA 技术用于真
菌和植物病毒的研究中，随后该技术又相继被应用
于稻瘟病菌 Magnaporthe grisea（方祥等 2000）、
葡萄 Vitis vinifera L. 病毒病（牛建新和李东栋
2002）等的 dsRNA 检测中。dsRNA 技术在食用菌
如糙皮侧耳（李彦鹏 2007）、双孢蘑菇（Gaze et al.
2000）等的病毒检测中也得到了应用。
防治食用菌病毒病的最有效方法是制备和应
用脱毒菌种（李彦鹏 2007）。制备脱毒菌种的方
法已报道的有菌丝尖端分离脱毒法和原基组织分
离脱毒法。菌丝尖端分离脱毒法是切取尖端菌丝进
行继代培养，如此反复 4－5 次，电镜观察发现菌
丝中没有病毒粒子（Last et al. 1974）。原基组织分
离脱毒法是取原基组织进行分离培养得到脱毒菌
种，但脱毒效果没有检测（曹德宾 2001）。vander
Lende et al.（1995）报道在制备的糙皮侧耳原生质
体再生菌株中有少数菌株不含 dsRNA，且菌丝生长
速度显著高于出发菌株和含有 dsRNA 的菌株。
本研究采用菌丝尖端分离脱毒、原基组织分离
脱毒、原生质体再生脱毒等 3 种方法，对带毒糙皮
侧耳菌株新 831 和豫 6 进行脱毒处理，采用 dsRNA
技术检测脱毒效果，并结合脱毒菌株的生理生化特
性和栽培实验，比较 3 种脱毒方法的脱毒效果，以
期筛选出脱毒彻底、脱毒后菌株生物学效率等农艺
性状明显提高的脱毒方法，得到无病毒菌株，为糙
皮侧耳的高产稳产提供源头上的保证，促进我国糙
皮侧耳产业健康稳定的发展。
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1 材料与方法
1.1 菌种
糙皮侧耳菌株新 831 和豫 6，河南农业大学生
命科学学院应用真菌研究室保藏菌株。
1.2 dsRNA 的提取
参照 Morris & Dodds（1979）的方法。
1.3 dsRNA 的 DNaseⅠ和 S1 Nuclease 酶切验证
取 10μL dsRNA 溶液，依次加入 2μL 10×
DNaseⅠBuffer、1μL DNaseⅠ（TaKaRa）、7μL DEPC-
处理水、37℃水浴 30min；酶切产物纯化后加入适量
的灭菌双蒸水溶解，用 1%的琼脂糖凝胶电泳检测。
取 10μL dsRNA 溶液，依次加入 2μL 10×S1
Buffer、S1 Nuclease 10U（100－200U/μL，TaKaRa）、
DEPC-处理水至终体积 20μL，23℃反应 15min，用
20μL 的 20mmol/L EDTA 终止反应；酶切产物纯化
后加入适量的灭菌双蒸水溶解，用 1%的琼脂糖凝胶
电泳检测。
1.4 菌丝尖端分离脱毒 hyphal tips isolation
virus-elimination（HTIVE）
挑取尖端菌丝参考 Last et al.（1974）的方法。
1.5 原 基 组 织 分 离 脱 毒 primordium tissue
isolation virus-elimination（PTIVE）
原基组织分离参考曹德宾（2001）的方法。
1.6 原生质体再生脱毒 protoplast regeneration
virus-elimination（PRVE）
参考 Go et al.（1985）的方法，并稍作修改。
溶壁酶浓度为 1.5%，酶解温度 30℃，酶解 4h，酶
解过程间歇振荡。
1.7 菌丝生长速度测定
参考《食用菌研究法》（杨新美 1998）。
1.8 菌丝球干重测定
用灭菌后直径 1cm 的打孔器打取长满平板的
原代和脱毒菌种菌丝体，接入液体培养基中，放入
25℃、150r/min 的摇床中培养 8－9d，待菌丝球大
量出现，发酵液变澄清时结束培养。菌液在
3,000r/min 离心 10min，去上清液，将湿菌丝球于
60℃烘箱中烘至恒重后称量菌丝球干重。
1.9 呼吸强度测定
呼吸强度的测定采用小篮子法（张志良 1990）。
1.10 纤维素酶活测定
菌种纤维素酶活力以滤纸酶活（FP）和羧甲基
纤维素酶活（CMC）表示，测定方法参考《食用菌
研究法》（杨新美 1998）。
1.11 栽培试验
将原代菌种和各种脱毒菌种制备成栽培种，用
发酵棉籽壳的培养料进行塑料袋栽培，采用两层
料、三层菌种的接种方式，两端菌种要封住料面，
每袋装湿料 3,200g，每个处理 30 袋。常规发菌出
菇管理。待子实体菌盖边缘接近平展时及时采收并
称鲜重，同时测量菌盖大小。
统计前两茬子实体鲜重，计算生物学效率，取
平均值，作为试验结果。
2 结果与分析
2.1 dsRNA 的提取及酶切验证
从保藏的糙皮侧耳新 831 和豫 6 菌株的菌丝体
中成功提取出了病毒的 dsRNA，并且这两个菌株的
dsRNA 带型完全一致。其基因组是分段的，共有 3
个片段，大小分别为 8.2kb、2.6kb 和 1.1kb。其中
1.1kb 的量很少（图 1）。从图 1 可以看出，在提取

图 1 新 831 和豫 6菌株的 dsRNA M：Marker；1：新 831 菌株；
2：豫 6 菌株.
Fig. 1 dsRNA extracted from the mycelium of Pleurotus ostreatus of
Xin-831 and Yu-6. M: λ-HindⅢ digest DNA Marker; 1: xin-831; 2:
yu-6.
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的基因组中，8.2kb 片段中含有 2 个大小非常相近
的片段，在琼脂糖凝胶电泳中不易分开。
提取到的病毒基因组分别经 DNase 1、S1
Nuclease 酶切处理，其带型均与提取到的病毒基因
组一致，说明提取到的病毒基因组为 dsRNA（图 2）。

图 2 供试菌株 dsRNA 经 DNaseⅠ和 S1 Nuclease 酶切
M：Marker；1：新 831 菌株；2：新 831 菌株 DNase1 酶切处理；3：豫
6 菌株；4：豫 6 菌株 DNase1 酶切处理；5：新 831 菌株；6：新 831 菌株
S1 Nuclease 酶切处理；7：豫 6 菌株；8：豫 6 菌株 S1 Nuclease 酶切处理.
Fig. 2 Endonuclease result of dsRNA treated with DNaseⅠand S1
Nuclease of tested strains. M: λ-HindⅢ digest DNA Marker; 1:
Xin-831; 2: Xin-831 treated with DNaseⅠ; 3: Yu-6; 4: Yu-6 treated
with DNaseⅠ; 5: Xin-831; 6: Xin-831 treated with S1 Nuclease; 7:
Yu-6; 8: Yu-6 treated with S1 Nuclease.
2.2 dsRNA 技术检测脱毒效果
糙皮侧耳新 831 和豫 6 菌株原基组织分离脱毒
之后的电泳检测表明，在菌丝培养时间、菌丝重量、
点样量等所有操作完全一致的情况下，即使是脱毒
效果最好的菌株其前后变化尚不十分明显。如 2 号、
10 号泳道所示，在 8.2kb 和 1.1kb 处的条带亮度有
所减弱，而 2.6kb 的条带几乎没有变化（图 3），说
明这种脱毒方法脱毒效果不理想。
糙皮侧耳新 831 和豫 6 菌株菌丝尖端分离脱毒
后的电泳检测表明，从3、11号泳道可以看出，dsRNA
的条带明显减少，其中在 8.2kb 和 1.1kb 处的条带已
经完全消失，2.6kb 的条带亮度也有所减弱，说明病
毒的浓度明显减少（图 3）。但采用这种方法连续处
理 10 代之后，本实验的所有处理均未达到将病毒完
全脱除的目的。
糙皮侧耳新 831 原生质体再生脱毒后，提取
dsRNA 检测结果表明，在本实验所有处理的菌株
中，有的菌株 dsRNA 带型不变，有的菌株带型明
显减少，有的菌株带型完全消失，从 5－8 号泳道
可以看出，这 4 个菌株 3 条带都完全消失，说明脱
毒比较彻底（图 3）。糙皮侧耳豫 6 经原生质体再生
脱毒后同样得到了 3 个完全脱除病毒的菌株（13－
15 泳道）。

图 3 dsRNA 技术检测 3种脱毒方法 M：Marker；1：新 831 原代菌株；2：新 831 原基组织分离脱毒菌株；3：新 831 菌丝尖端分离脱毒；4-8：
新 831 原生质体再生菌株；9：豫 6 原代菌株；10：豫 6 原基组织分离脱毒菌株；11：豫 6 菌丝尖端分离脱毒；12-15：豫 6 原生质体再生菌株.
Fig. 3 The effect of three virus-eliminating methods detected by dsRNA technique. M: λ-HindⅢ digest DNA Marker; 1: Xin-831 original strain; 2:
Xin-831 PTIVE strain; 3: Xin-831 HTIVE strain; 4-8: Xin-831 PRVE strains; 9: Yu-6 original strain; 10: Yu-6 PTIVE strain; 11: Yu-6 HTIVE strain;
12-15: Yu-6 PRVE strains.
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2.3 不同脱毒处理菌株的菌丝日平均生长速度测定
将同样大小的菌丝体块分别接入 PDA 平板中
放入 25℃培养箱中培养，每 2 天划圈一次，从菌丝
生长速度的计算结果可以看出，脱毒菌株在平板上
的菌丝生长速度都比原代要快，方差分析表明：脱
毒菌株在平板上菌丝生长速度的差异显著性因脱
毒方法的不同而不同。与原代菌株相比，原基组织
分离脱毒菌株菌丝生长速度差异不显著，菌丝尖端
分离脱毒菌株菌丝生长速度差异显著，而原生质体
再生脱毒菌株菌丝生长速度差异达极显著水平。从
菌丝在平板上的培养特征来看，脱毒菌株的菌丝比
原代长的整齐、洁白、粗壮、菌丝浓密，有较强的
生长优势，原生质体再生脱毒的菌株表现最为明显
（表 1）。
2.4 不同脱毒处理菌株摇瓶培养菌丝生物量的测定
不同脱毒处理菌株摇瓶培养菌丝生物量的测
定结果可以看出，与原代菌株相比，脱毒后菌株的
生物量都明显提高。方差分析表明，和原代相比，
原基组织分离脱毒后，生物量之间的差异达显著水
平；菌丝尖端分离脱毒和原生质体再生脱毒后，生
物量之间的差异达极显著水平；原生质体脱毒菌株
菌丝生物量差别更为明显，生物量是原代菌株的 2.2
－2.4 倍（表 1）。
2.5 不同脱毒处理菌株的呼吸强度测定
不同脱毒方法得到的脱毒菌株的呼吸强度测
定结果可以看出，与原代菌株相比，脱毒后菌株的
呼吸强度增强。方差分析显示：与原代菌株相比，
原基组织和菌丝尖端分离脱毒后菌株的呼吸强度
差异不显著，而原生质体再生脱毒后菌种的呼吸强
度差异性显著。说明病毒脱除后，菌种生长旺盛，
生活力强，菌丝呼吸强度增强（表 1）。
2.6 不同脱毒处理菌株的纤维素酶活测定
不同脱毒方法得到的脱毒菌株的滤纸酶活的
测定结果可以看出，原基组织分离脱毒菌株的滤纸
酶活与原代之间差别不大，方差分析显示二者之间
的差异性不显著；菌丝尖端分离脱毒和原生质体再
生脱毒菌株的滤纸酶活与原代之间的差异性显著
（表 1）。
表 1 供试菌株脱毒前后生理生化指标比较
Table 1 Comparison of physiological and biochemical indexes between virus-free strains and original strains
供试菌株
Tested strains
菌丝生长速度
Mycelia growth rate (mm/d)
生物量
Biomass (g)
呼吸强度
Breathe intensity (μg/g·h)
滤纸酶
FP enzyme (U)
羧甲基纤维素酶
CMC enzyme (U)
1 3.87 1.89 0.347 5.91 19.32
2 4.16 2.29* 0.447 6.29 20.71*
3 4.64* 3.63** 0.576 7.95* 24.10**
4 5.10** 4.55** 0.783* 7.85* 26.86**
5 4.98** 4.09** 0.758* 8.27* 24.76**
6 5.01** 4.34** 0.772* 8.12* 24.18**
7 5.08** 4.29** 0.779* 7.93* 26.50*
8 3.72 2.01 0.331 5.46 18.09
9 4.01 2.37* 0.414 5.67 18.86*
10 4.45* 3.88** 0.525 7.20* 22.04**
11 4.86** 4.70** 0.659* 7.11* 23.40**
12 4.93** 4.69** 0.681* 7.67* 25.55**
13 4.80** 4.85** 0.697* 7.45* 26.59**
注：*表示 0.05 显著水平，**表示 0.01 极显著水平. 1：新 831 原代菌株；2：新 831 原基组织分离脱毒菌株；3：新 831 菌丝尖端分离脱毒；4-7：新
831 原生质体再生菌株；8：豫 6 原代菌株；9：豫 6 原基组织分离脱毒菌株；10：豫 6 菌丝尖端分离脱毒；11-13：豫 6 原生质体再生菌株.
Note: “*” indicates significant differences in the 0.05 level, “**” indicates significant differences in the 0.01 level. 1: Xin-831 original strain; 2: Xin-831 PTIVE
strain; 3: Xin-831 HTIVE strain; 4-7: Xin-831 PRVE strains; 8: Yu-6 original strain; 9: Yu-6 PTIVE strain; 10: Yu-6 HTIVE strain; 11-13: Yu-6 PRVE strains.
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不同脱毒方法得到的脱毒菌株的 CMC 酶活的
测定结果可以看出，与原代相比，脱毒菌株的 CMC
酶活都明显提高。方差分析表明，与原代菌株相比，
原基组织分离脱毒菌株的 CMC 酶活达显著水平；
菌丝尖端分离脱毒和原生质体再生脱毒菌株的
CMC 酶活达极显著水平（表 1）。
2.7 栽培试验
2.7.1 不同脱毒处理的新 831 菌株栽培试验：不同
处理得到的新 831 脱毒菌株的栽培试验结果可以
看出，原基组织分离脱毒菌株前两茬菇的产量和
生物学效率都和原代菌株差别不大；菌丝尖端分
离脱毒菌株前两茬菇的生物学效率达到 86.5%，
比原代菌株高 9.4%；原生质体再生脱毒的 4 个菌
株，前两茬菇的生物学效率达到 97.2%－99.1%，
比原代菌株提高 23.0%－25.4%，与原代菌株的相
比都具有极显著差异。菌丝尖端和原生质体再生
脱毒菌株子实体形态也发生了较大的改观，表现
为菌盖明显增大（表 2）。
2.7.2 不同脱毒处理的豫 6 菌株栽培试验：不同处
理得到的豫 6 脱毒菌株的栽培试验结果可以看出，
原基组织分离脱毒菌株前两茬菇的产量和生物学
效率都和原代差别不大；菌丝尖端分离脱毒菌株前
两茬菇生物学效率达到 88.6%，较原代菌株提高
10.2%；原生质体再生脱毒的 3 个菌株，前两茬菇
的生物学效率达到 96.4%－98.2%，比原代菌株提高
19.9%－22.1%，与原代菌株相比差异极显著。菌丝
尖端和原生质体再生脱毒菌株子实体形态也发生
了较大的改观，菌盖明显增大（表 3）。
3 讨论
本试验应用 dsRNA 技术从糙皮侧耳豫 6 和新
831 菌株中均发现含有 8.2kb、2.6kb 和 1.1kb 3 条
dsRNA 条带。类似地，应用 dsRNA 技术从韩国糙
皮侧耳 P. ostreatus var. florida 中提取得到 5 条
dsRNA 条带，大小分别是 8kb、2.4kb、2.1kb、1.9kb
和 1.7kb（vander Lende et al. 1995）；从另一来自韩
国的糙皮侧耳菌株ASI2596中分离得到 2条 dsRNA
条带，大小分别是 2.3kb 和 2.2kb（Lim et al. 2005）；
另一韩国的糙皮侧耳菌株 ASI2504 中含有 3 条
dsRNA 条带，大小分别是 2.0kb、1.84kb 和 1.82kb
（Lee et al. 2006）。这些病毒的同源性如何，有待
对其核酸序列进行进一步的分析。
表 2 糙皮侧耳新 831 菌株脱毒前后栽培试验
Table 2 Fruiting tests of the virus-free strains compared with original strain of Pleurotus ostreatus Xin-831
子实体形态
Morphological characters 供试菌株
Tested strains 菌盖宽度
The width of cap (cm)
菌盖长度
The length of cap (cm)
第一茬菇产量
The yield of first
crop (g)
第二茬菇产量
The yield of
second crop (g)
前两茬菇总产量
Total yield (g)
生物学效率
The rate of
biological
efficiency (%)
原代菌株
Original strain
7.2 10.8 654 550 1204 79.0
原基组织分离脱毒菌株
PTIVE strain
7.5 10.6 663 549 1212 79.5
菌丝尖端分离脱毒菌株
HTIVE strain
8.5 12.0 689 628* 1317* 86.5*
2 9.3 14.0 747** 763** 1510** 99.1**
6 9.0 13.8 729** 770** 1499** 98.4**
8 9.1 14.3 762** 743** 1505** 98.8**
原生质体再生
脱毒菌株
PRVE strain
10 8.7 12.9 733** 748** 1481** 97.2**

注：*表示 0.05 显著水平，**表示 0.01 极显著水平.
Note: “*” indicates significant differences in the 0.05 level, “**” indicates significant differences in the 0.01 level.
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表 3 糙皮侧耳豫 6菌株脱毒前后栽培试验
Table 3 Fruiting tests of the virus-free strains compared with original strain of Pleurotus ostreatus Yu-6
子实体形态
Morphological characters 供试菌株
Test strains 菌盖宽度
The width of cap (cm)
菌盖长度
The length of cap (cm)
第一茬菇产量
The yield of first
crop (g)
第二茬菇产量
The yield of
second crop (g)
总产量
Total yield (g)
生物学效率
The rate of
biological
efficiency (%)
原代菌株
Original strain
6.5 9.7 678 546 1224 80.4
原基组织分离脱毒菌株
PTIVE strain
6.3 9.9 672 565 1237 81.2
菌丝尖端分离脱毒菌株
HTIVE strain
7.6 10.5 703 647* 1350* 88.6*
2 号 No. 2 8.4 12.8 750** 719** 1469** 96.4**
3 号 No. 3 8.7 11.9 763** 729** 1492** 97.9**
原生质体
再生脱毒
PRVE strain 10 号 No. 10 8.5 13.0 771** 726** 1497** 98.2**

注：*表示 0.05 显著水平，**表示 0.01 极显著水平.
Note: “*” indicates significant differences in the 0.05 level, “**” indicates significant differences in the 0.01 level.

本研究对新 831 和豫 6 菌株进行了菌丝尖端分
离脱毒、原基组织分离脱毒和原生质体再生脱毒，
经 dsRNA 技术检测发现，原基组织分离脱毒后
dsRNA 带型只是轻微的减弱，脱毒效果并不明显；
菌丝尖端分离脱毒后 dsRNA 的带型减少并且亮度
减弱，说明病毒的浓度明显减少，但连续 10 次菌
丝尖端分离 34℃继代培养之后，仍然不能达到将病
毒完全脱除的目的；原生质体再生脱毒后得到了病
毒完全脱除的菌株。以上结果表明应用植物中用的
茎尖分生组织脱毒的原理和方法，并不能达到将糙
皮侧耳病毒完全脱除的目的。
对不同脱毒处理得到的脱毒菌株的生理生化
特性以及农艺性状的研究结果表明，菌丝尖端分离
脱毒虽不能完全脱除病毒，但脱毒后平板上菌丝生
长速度、液体培养生物量、呼吸强度、纤维素酶活
都有所提高，说明这种脱毒方法对菌丝生理生化的
变化是有影响的。
原生质体再生脱毒后病毒完全脱除菌株的菌
丝生长速度、液体培养生物量、呼吸强度、纤维素
酶活都大幅度提高。说明糙皮侧耳病毒对菌丝的生
长以及产纤维素酶等生理过程有明显的抑制作用。
栽培结果表明，原生质体再生脱毒菌株的栽培产量
比原代菌株有明显的提高。这都充分表明原生质体
再生脱毒是一种有效脱除糙皮侧耳病毒的方法。对
于这种脱毒方法还有待于进一步研究，以提高其脱
毒效率，并将其推广到其他食用菌病毒的脱除上。
食用菌菌种退化的症状包括菌丝生长速度减
慢、出菇延迟、子实体畸形和大量减产等（Ro et al.
2006；vander Lende et al. 1995；Yu et al. 2004；Go et
al. 1992），与菌种感染病毒的症状类似。Horgen et
al.（1996）认为，双孢蘑菇菌种退化与染色体畸变
有关。Magae et al.（2005）报道，金针菇 Flammulina
velutipes 退化菌种利用乳糖的能力降低。本研究结
果表明，糙皮侧耳菌种脱毒后，病状消除，因此，
食用菌菌种感染病毒可能也是引起菌种退化的原
因之一。
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