全 文 ：d ib le fu n g i2010（3）
高 压 均 质 法 提 取 云 芝 胞 内 糖 肽
钱 强 1 陆震鸣 2 许泓瑜 2*
（1 江苏苏中药业集团股份有限公司，江苏姜堰，225500；2 江南大学医药学院制药工程研究室，江苏无锡 214122）
摘 要 采用高压均质法破碎液态发酵法生产的云芝菌丝体，
分析其对产品含量及得率的影响。 以云芝胞内糖肽多糖含量为
指标，采用 L9（33）正交试验法，确定了提取云芝胞内糖肽最佳工
艺为均质压力 120 MPa，料液比 1∶20，均质次数 1 次。 与传统水
提法比较，高压均质法能明显提高云芝胞内糖肽的得率。
关键词 云芝 深层发酵 胞内糖肽 高压均质法
文章编号 1000-8357（2010）03-0067-02
云芝（Coriolus versicolor（L）Fr）味甘、淡，性微寒，有健脾
利湿，止咳平喘，清热解毒，抗肿瘤的功效[1]。 现代药理研究表
明云芝胞内糖肽为该菌的主要有效组分，具有抑制肿瘤、抗溃
疡、保肝、抗病毒、降血脂、抗衰老等多种药理作用 [2]。
据报道， 高压破碎提取可以大大提高有效成分的提取得
率，具有操作步骤简单、自动化程度高、节省水、电、煤的消耗
等特点。该技术利用高压条件下的混悬液，通过调节限流缝隙
过程中失压、膨胀、爆炸、剪切和高速撞击等综合效应，将在液
体中的颗粒粉碎至直径 0.1~2 μm，平均直径<1 μm，这个过程
集超声波粉碎、胶体磨、球磨功能于一体，颗粒面积的增大及
高压带来的综合效应，极大地加速了可溶物的渗透和扩散 [3]。
目前，高压均质机已经广泛用于食品，药品，化妆品等行业 [4]，
但国内外采用高压均质法提取云芝包内糖肽尚属空白。 试验
采用高压均质技术对云芝胞内糖肽进行提取， 并对相关均质
条件进行了优化。
1 材料和方法
1.1 菌 种 云芝斜面菌种购自上海农业科学院， 于 PDA
斜面常规传代。
1.2 培养基 种子培养基：麸皮 1%，葡萄糖 2%，磷酸二氢钾
0.1%，硫酸镁 0.05%等。
发酵培养基：葡萄糖 2.5%，豆饼粉 1%，酵母粉 0.2%，磷
酸二氢钾 0.1%，硫酸镁 0.05%，消沫剂 0.1%等。
1.3 仪器与试剂 GYB40-10S 型高压均质机 （上海东华高
压均质机厂）、5 L 全自动发酵罐 （上海保兴生物设备工程有
限公司）；高效液相色谱（WATERSTM600），旋转式摇床（上海
离心机研究所），立式灭菌锅（上海博讯实业有限公司），UV-
2000 型紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），分
析天平（梅特勒公司），云芝糖肽标准品和牛血清白蛋白购自
中国药品生物制品检定所，其余试剂为国产分析纯。
1.4 云芝菌丝体的液体发酵 取活化的斜面种子接种于 350mL
液体种子培养基中，28℃，160 r/min，培养 5 d 后，接种 3.5 L 发
酵培养基内，接种量为 10%，搅拌转速 150~500 r/min，通风比
l∶0.6，温度 28℃，培养 4 d，装液量 3.5 L，罐压 0.2 MPa。 发酵液
过滤获得菌丝体，去离子水洗涤后用于制备云芝胞内糖肽。
1.5 水提取法提取云芝胞内糖肽 云芝菌丝体以料液比
1∶50 加入去离子水（pH 7.0），煮沸 2 h，滤液经减压浓缩至原
体积 l/3。 浓缩液中加入 3 倍体积无水乙醇进行沉淀，沉淀过
滤烘干得云芝胞内糖肽 [5]，[6]。
1.6 高压均质法制备云芝胞内糖肽 云芝菌丝体以料液比
1∶20 加入去离子水（pH 7.0）。 采用高压均质机进行破碎，均质
压力 120 MPa，均质次数为 1 次。 均质液中加入 3 倍体积无水
乙醇进行沉淀，沉淀过滤烘干得云芝胞内糖肽。
1.7 质量指标的测定
1.7.1 总糖、 还原糖和多糖含量测定 总糖含量测定采用苯
酚-硫酸法，还原糖含量测定采用 DNS 法。 多糖含量/%=总糖
含量/%-还原糖含量/%， 均为国家药品标准 （WS-XG-021-
2002）所提供的方法。
1.7.2 云芝糖肽含量测定 福林酚试剂法， 国家药品标准
（WS-XG-021-2002）所提供的方法。
1.7.3 相对分子质量的测定 采用高效凝胶渗透色谱法
（HPGPC）进行测定，液相色谱仪为 WATERSTM600，凝胶色谱
柱为 UltrahudrgelTM Linear 7.8mm×300mm。
2 结果与分析
2.1 正交法优化高压均质条件 根据预试验结果，确定均质压
力、料液比（湿菌体：水）、均质次数为影响胞内糖肽得率的显著因
素。进一步设计 3因素 3水平的 L9（33）正交试验方案[7]，对高压均
质条件进行优化，正交设计表见表 1，正交试验结果见表 2。
以多糖含量为考察指标， 各因素作用主次为均质压力>
料液比>均质次数。 极差分析结果表明，A 因素对结果有显著
性影响，直观分析结果，并结合实际生产成本，选择云芝菌体
破碎的的最佳提取工艺为 A1B2C1，即均质压力 120 MPa，料液
比 1∶20，高压破碎 1 次。
2.2 云芝糖肽分子量分析 高压均质法制备的云芝胞内糖
肽的 HPGPC分析图谱见图 1。 与云芝糖肽标准品（图 1A）相比，
采用高压均质法所得云芝糖肽（图 1B）的分子量与标准品相同。
2.3 提取方法比较 试验采用最优高压均质条件提取 3 批
表 1 正交试验因素水平表
水平 A均质压力/MPa B 料液比 C 均质次数
1 120 1∶10 1
2 100 1∶20 2
3 80 1∶30 3
贮 藏 加 工
收稿日期：2009-06-03 一稿；2009-11-27 修改稿。
基金项目：国家“863”重点项目资助（2007AA021506）。
* 通讯作者。 0510-85918206，e-mail：xhyhyhy@163.com
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试验观察到，金汇新强基地中无病发生，一般其它试验点
发病率都在 0.5%～1%， 表现为一只菇房只有几只发病菇，对
产量基本不受影响，而对照仍有不同程度褐腐病发生。四个基
地的平均产量达到 10.9 kg/m2，而对照只有 7.3 kg/m2。
试验结果表明，通过对床架及种植环境消毒、培养料经过
后发酵综合预防措施，能抑制双孢蘑菇褐腐病的发生。
3 结 论
覆土曝晒对双孢蘑菇褐腐病发生有一定防效， 且以曝晒
5 h 为最佳；甲醛熏蒸覆土可抑制褐腐病发生；综合防治双孢蘑
菇褐腐病， 以 111m2栽培面积用覆土用 3.5 kg甲醛兑水 15 kg，
72 h 熏蒸处理、覆土后用施保功 200 g，兑水 125 kg 防治效果
好，可在栽培生产中推广应用。
要防治好双孢蘑菇褐腐病，提高产量，还要与科学的管理
及环境消毒相结合。
参考文献
[1] 孔祥君.蘑菇栽培新技术[M].上海：上海科技教育出版社，1990.
[2] 陈得明.食用菌生产技术手册 [M].上海：上海科技技术出版社，2001.
表 4 综合防治试验发病情况
基地名称 试验面积/m2 发病率/% 单产/（kg·m-2）
奉浦园艺场 200 1 12
金汇新强 190 0 11.3
金汇姚堂 210 1 9.8
柘林骑塘 200 0.5 10
奉城小刘 190 1 11.5
CK（平均） 200 35 7.3
（上接 P63）
云芝胞内糖肽，并与传统水提法提取的云芝糖肽进行比较。经
检验， 两种方法所提取的云芝胞内糖肽的总糖≥35％， 还原
糖≤10％， 肽≥20％， 均符合国家药品标准 （WS-XG-021-
2002）的要求 （表 3）。 高压均质法所提取得云芝糖肽的得
率（2.54 g/L）和糖肽中多糖的含量（50.41%）显著高于传统水
提法所得云芝糖肽（表 3）。
3 讨论与结论
通过试验确定了云芝胞内糖肽的最佳高压均质工艺为：
均质压力 120 MPa，料液比 1∶20，均质次数 1 次。 云芝菌丝体
高压均质后，胞内糖肽产率达 2.54 g/L，总糖含量 50.41%，肽
含量 29.75%，单糖 2.13%。 经 HPGPC 检测其有效成分的相对
分子质量和标准品出峰时间一致，符合国家药品标准的要求，
因此通过高压均质机破碎菌体在生产上是可行的。 与传统水
提方法比较，高压均质法所得云芝糖肽的提取率明显增加，且
提取时间缩短 4 倍，成本大幅度降低；提取全过程避免了高温
加热，从而减少了高温对多糖的破坏；所用仪器简单，操作方
便，高压均质机自动化程度较高，便于大规模生产。 但是高压
均质机也有一些缺点，就是噪音比较大，产热比较多，需要混
合罐不断搅拌料液。 试验仅仅是以多糖含量为指标探讨高压
均质工艺， 高压破碎是否会对云芝胞内糖肽结构及药理作用
产生一定影响有待进一步研究。
参考文献
[1] 《中华本草》编委会. 中华本草[M]. 上海： 上海科学技术出版社，
1987.
[2] 鲁晓燕 ， 孟凡振 . 云芝糖肽药理作用进展 [J]. 中国药师 ，
1999，2（3）： 148-149.
[3] 钟汉左，梁 勇，胡江涌，等.高压均质提取山楂叶有效成分 [J].
精细化工，2007，24： 890-894，904.
[4] 李宏伟，张守勤，窦建鹏，等.超高压提取山楂叶中黄酮类化合物[J].
吉林大学学报，2006，36（3）： 438-443.
[5] 张培玉，杨 革，郑恒河. 云芝菌丝体生长的营养需求及液体发
酵研究[J]. 曲阜师范大学学报，1998，24（3）： 65-66.
[6] 潘继红，王 登，查晓红，等.云芝深层培养及发酵液的应用研究[J].
中国野生植物资源，2000，19（1）：19-21.
[7] 姬振豫. 正交设计的方法与理论 [M]. 香港： 世界科技出版社，
2001：7.
表 2 正交试验结果
序号 A B C 多糖含量/%
1 1 1 1 49.57
2 1 2 2 51.43
3 1 3 3 47.62
4 2 1 2 42.64
5 2 2 3 44.75
6 2 3 1 42.11
7 3 1 3 45.14
8 3 2 1 46.52
9 3 3 2 43.55
K1 148.62 137.35 138.20
K2 129.50 142.70 137.62
K3 135.21 133.28 137.51
K1 49.54 45.78 45.07
K2 43.17 47.57 45.87
K3 45.07 44.43 45.84
R 6.37 3.14 0.80
贮 藏 加 工
≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤
表 3 不同提取方法下成品检验结果
提取方法 多糖得率/（g·L-1） 总糖/% 还原糖/% 多糖/% 肽/%
水提法 3.47 42.65 2.36 40.29 26.62
高压均质法 2.54 50.41 2.13 48.28 29.75
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