全 文 ：2014 年 6 月 陕西理工学院学报( 自然科学版) June． 2014
第 30 卷第 3 期 Journal of Shaanxi University of Technology (Natural Science Edition)
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Vol． 30 No． 3
［文章编号］1673 － 2944(2014)03 － 0059 － 04
高效液相色谱法测定开口箭药材中绿原酸含量
王 星， 张 娜， 赵 桦
(陕西理工学院 陕西省资源生物重点实验室，陕西 汉中 723000)
［摘 要］ 以体积分数 50%的甲醇溶液为溶剂，用超声提取法从开口箭药材中提取绿原酸，
用高效液相色谱法检测提取液中绿原酸含量。提取条件为: 超声功率 240 W，超声频率
40 kHz，提取温度 60 ℃，超声提取 30 min。色谱条件为:色谱柱为 Inertsil ODS-3C18 ( 4． 6 mm ×
150 mm，5 μm) 柱，以乙腈-0． 4%磷酸水溶液( 体积比 9 ∶ 91 ) 为流动相，流速 1． 0 mL /min，检测
波长 327 nm，柱温30 ℃。绿原酸在 0． 255 ～ 3． 06 μg /mL 范围内与峰面积呈现良好的线性关
系，y = 31 388x + 152． 43( Ｒ2 = 0． 999 9) ，平均加样回收率 99． 4%，ＲSD为 2． 12% ( n = 3) 。检
测结果表明，不同产地开口箭药材中绿原酸的含量有一定的差异，其变化范围在 32． 84 ～
6． 62 μg /g。该方法简便、准确、重复性好，可用于开口箭药材的质量控制。
［关 键 词］ 开口箭; 绿原酸; HPLC; 含量测定
［中图分类号］ Q946． 91 + 9 ［文献标识码］ A
收稿日期:2014-03-03
基金项目::陕西省教育厅重点实验室科学研究计划项目(14JS);陕西理工学院研究生创新基金资助项目
(SLGYCX1312)
作者简介:王星(1987—)，男，陕西省商洛市人，陕西理工学院硕士研究生，主要研究方向为植物资源开发利用;［通讯作
者］赵桦(1957—)，男，陕西省汉中市人，陕西理工学院教授，硕士研究生导师，主要研究方向为植物资源开发利用。
0 引 言
开口箭属(Tupistra)隶属于百合科铃兰族。该属植物主要分布于亚洲，约 20 种，我国约 12 种，主产
于长江以南各省区。在陕西开口箭主要生长于秦岭、巴山海拔 800 ～ 2 000 m 林下阴湿处、溪边和路
旁［1-2］。本属植物多为少数民族民间用药，多以根状茎及全株入药，具有清热解毒、散瘀止痛等功效［3］。
目前，国内外学者的研究发现，开口箭植物含有多种甾体皂苷类化合物，在体内具有较强的抗炎作
用［4-5］。此外，研究还发现开口箭植物多糖也具有一定的生物活性［6-9］。但对开口箭中绿原酸成分的分
析研究尚未见报道。
绿原酸(chlorogenic acid)又名 3-咖啡酰奎宁酸，是许多中草药如金银花、杜仲、茵陈等的主要有效
成分之一。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血
压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用和多种药理活性。绿原酸应用非常广泛，主要为医
药、日用化工和食品等行业，近年来受到人们的广泛关注［10-12］。
目前，绿原酸及其他酚酸的测定方法主要有紫外-可见光分光光度法、高效液相色谱(HPLC)法、气
相色谱-质谱联用(GC-MS)法、液相色谱-质谱联用(HPLC-MSn)法等［11-13］。分光光度法测定有相同发色
团物质的总含量，而不是单一成分的含量。HPLC-MSn 法虽然快速、准确，但预处理复杂，分析成本高。
相比之下，HPLC法具有操作简单、准确可靠、重复性好的特点，是目前检测绿原酸及其主要代谢产物含
量的常用方法［13-15］，《中国药典》2010 版中许多药材的含量测定标准也规定采用 HPLC法测定［16-17］。
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本文采用 HPLC法，对开口箭药材中绿原酸成分进行分析研究，建立开口箭中绿原酸 HPLC 分析测
定方法，以便于对该药材有效成分分析研究和质量控制。
1 仪器与试剂
Waters e2695 高效液相色谱仪、Empower 色谱工作站(美国 Waters);UV-2550 紫外分光光度计(日
本岛津);AB204-S电子分析天平(瑞士 Mettler Toledo);KQ-300DE型数控超声波清洗机(昆山市超声仪
器有限公司);IKAＲV 10D型旋转蒸发仪(德国 IKA公司);SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科
工贸有限公司);101-2 型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴有限公司) ;FW-177 型中药粉碎机、DK98-11A
型数显恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。
绿原酸对照品由中国食品药品检定研究院提供(批号:110753-201314)，乙腈、甲醇均为色谱纯，磷
酸为分析纯，水为超纯水，开口箭药材购自陕西省汉中市药材市场。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
Waters e2695 高效液相色谱仪;Inertsil ODS-3C18(4． 6 mm ×150 mm，5 μm)柱;2489 紫外检测器;流
动相为乙腈-0． 4%磷酸水溶液(体积比 9 ∶ 91 )，流速 1 mL /min，检测波长 327 nm，柱温 30 ℃，进样
量 10 μL。
2． 2 检测波长的选择
利用适当浓度的绿原酸对照品溶液，以超纯水做空白，在 200 ～ 400 nm范围内扫描，在 327 nm处有
最大吸收，因此选择 327 nm作为检测波长。
2． 3 样品溶液的配制
取开口箭药材，在 60 ℃条件下烘干，粉碎过四号筛。称取约 2 g，精密称定，置于具塞 100 mL 锥形
瓶中，加 20 mL体积分数 50%的甲醇溶液，浸泡 30 min，在超声功率为 240 W，超声频率为 40 kHz，温度
为 60 ℃条件下，超声提取 30 min，过滤，药渣用 20 mL 体积分数 50%的甲醇溶液在相同条件下再提取
一次，过滤，合并两次滤液并定容至 50 mL容量瓶中。进样前用 0． 45 μm滤膜过滤。
2． 4 对照品溶液的配制
精密称取绿原酸对照品 5． 1 mg，用体积分数 50%的甲醇溶液定容至 100 mL 的棕色容量瓶中，得
51 μg /mL绿原酸对照品溶液，备用。
图 1 绿原酸工作曲线图
2． 5 线性关系考察
取 51 μg /mL绿原酸对照品溶液各 0． 5、1、2、4、
6 mL，用体积分数 50%的甲醇溶液定容至 100 mL的
棕色容量瓶中，制成 0． 255、0． 51、1． 02、2． 04、
3． 06 μg /mL的绿原酸对照品溶液，分别进样，每次平
行进样 5 次，进样量 10 μL，进样前用 0． 45 μm 的滤
膜过滤，测定峰面积，以绿原酸对照品的浓度为横坐
标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得绿原酸的回归
方程为 y = 31 388x + 152． 43(Ｒ2 = 0． 999 9)，在
0． 255 ～ 3． 06 μg /mL范围内呈良好的线性关系。绿
原酸曲线图见图 1，色谱图见图 2。
2． 6 精密度试验
用绿原酸对照品溶液重复进样 5 次，每次进样 10 μL，绿原酸峰面积分别为 96 376、95 793、95 350、
96 036、96 157，ＲSD为 0． 41%。
2． 7 重复性试验
称取开口箭样品 5 份，每份约 2 g，均精密称定。按本文方法提取和测定，每份进样 5 次，每次进样
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陕西理工学院学报(自然科学版) 第 30 卷
10 μL。5 份样品中绿原酸的峰面积分别为 40 655． 7、40 256． 7、39 579． 3、39 304． 7、39 082． 3，ＲSD 为
1． 66%。
图 2 标准品色谱图
2． 8 稳定性试验
用某产地开口箭样品提取液为供试液，分别于提取后 0、1、2、4、8、12、24 h 进样。绿原酸的峰面积
分别为39 971、40 608、40 581、40 224、40 018、39 803、38 953，ＲSD为 1． 4%。
2． 9 加样回收率试验
精密称取开口箭样品 3 份，其质量分别为 0． 999 7、0． 999 8、1． 000 1 g。向这 3 份样品中分别加入一
定量的绿原酸对照品，按本文方法提取和测定，并计算回收率，结果见表 1。
表 1 绿原酸加样回收率实验
样品中绿原酸含量 /μg 添加标品量 /μg 应测值 /μg 实测值 /μg 回收率 平均值 ＲSD
31． 54 25． 50 57． 04 56． 55 98． 08%
31． 54 30． 60 62． 14 62． 70 101． 83% 99． 4% 2． 12%
31． 55 38． 25 69． 80 69． 15 98． 30%
2． 10 样品含量测定
取秦巴山区陕西省略阳县、陕西省留坝县、陕西省南郑县、甘肃省康县 4 个产地的开口箭药材，按
2． 3 项下样品制备方法制备开口箭药材供试液，按 2． 5 项下测定供试液中绿原酸含量，进样前用
0． 45 μm滤膜过滤，进样量 10 μL，绿原酸含量分别为(每个产地样品各取 3 份):陕西省略阳县
32． 84 μg /g，ＲSD = 1． 26%;甘肃省康县 16． 98 μg /g，ＲSD = 1． 07%;陕西省留坝县 8． 18 μg /g，ＲSD =
1． 11%;陕西省南郑县 6． 62 μg /g，ＲSD = 1． 17%。样品中绿原酸含量测定色谱图见图 3。
3 讨 论
HPLC法测定不同植物中绿原酸含量时所用流动相不尽相同，多为乙腈-0． 4%磷酸混合溶液，两种
溶液的比例有一定的变化。《中国药典》在分析金银花中绿原酸含量时采用的流动相为乙腈-0． 4%磷酸
混合溶液(体积比 13 ∶ 87 )［16］。本实验用乙腈-0． 4%磷酸混合溶液作为流动相，对两种溶液的配比情
况与绿原酸色谱峰的变化进行了比较分析。在乙腈与 0． 4%磷酸的体积比为 13 ∶ 87时不能将供试液中
绿原酸色谱峰和其相邻杂质的色谱峰分开;在减少乙腈、增加磷酸比例时绿原酸色谱峰分离效果渐渐好
转;当将流动相中乙腈与 0． 4%磷酸的体积比调至 9 ∶ 91 时，绿原酸和其相邻组分达到了很好的分离效
果，分离度大于 1． 5，符合定量分析要求;若再继续减少乙腈比例时，分离效果又变的较差。故本实验在
分析开口箭药材中绿原酸使用的流动相最终确定为乙腈-0． 4%磷酸(体积比 9 ∶ 91 )，在此条件下供试
液中绿原酸的色谱峰较为理想。
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第 3 期 王星，张娜，赵桦 高效液相色谱法测定开口箭药材中绿原酸含量
图 3 陕西省略阳县产开口箭药材供试品色谱图
通过实验，建立了开口箭药材中绿原酸成分的提取方法及 HPLC 检测方法。开口箭药材中绿原酸
的提取方法为:以体积分数 50%的甲醇溶液为溶剂，超声提取功率 240 W，超声频率 40 kHz，提取温度
60 ℃，超声提取 30 min。高效液相色谱法检条件为:Inertsil ODS-3C18(4． 6 mm ×150 mm，5 μm)色谱柱，
乙腈-0． 4%磷酸水溶液(体积比 9 ∶ 91 )为流动相，流速 1． 0 mL /min，检测波长 327 nm，柱温 30 ℃。
本研究首次报道了秦巴山区产开口箭药材中绿原酸的含量，最高可达 32． 84 μg /g，相比与其他富
含绿原酸的中药材其含量较低。研究结果还表明，秦巴山区不同产地开口箭中绿原酸含量相差较大，在
所检测的 4 个产地样品中最高为 32． 84 μg /g，最低为 6． 62 μg /g，说明开口箭药材中绿原酸含量受产地、
环境、气候等因素的影响较大。
［ 参 考 文 献 ］
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［责任编辑:魏 强］
(下转第 73 页)
·26·
陕西理工学院学报(自然科学版) 第 30 卷
［5］ 余芳，姜云飞．一种基于朴素贝叶斯分类的特征选择方法［J］．中山大学学报:自然科学版，2004，43(5):118-120．
［6］ 冯现坤，刘羽，蒋细芳．朴素贝叶斯分类算法在数据预测中的应用［J］．软件导刊，2011，10(5):65-66．
［7］ 田志伟．贝叶斯神经网络在股票预测中的应用［D］．无锡:江南大学，2011:10-12．
［责任编辑:李 莉］
On stock index prediction based on native Bayes classification algorithm
ＲEN Min-hong， XIAO Hai-rong
(School of Mathematics and Computer Science，Shaanxi University of Technology，Hanzhong 723000，China)
Abstract: Margin prediction for the broader market index is of great significance in stock investment．
Broader market index is not only related to national macroeconomic policies，but also related to the broader in-
dex operation itself． Based on native Bayes classification algorithm and influence factors of stock market index，
a classification prediction model is established about market index，and followed by an experiment of Shanghai
stock index as a case study． The experiment results prove that the classification prediction model is effective
with higher accuracy．
Key words: native Bayes classification algorithm; market index; prediction model
(上接第 62 页)
Determination of chlorogenic acid in Tupistra chinensis by HPLC
WANG Xing， ZHANG Na， ZHAO Hua
(Bio-Ｒesources Key Laboratory of Shaanxi Province，Shaanxi University of Tecnology，
Hanzhong 723000，China)
Abstract: The chlorogenic acid is extracted from Tupistra chinensis using 50% methanol，and the con-
ditions of the ultrasonic wave are as follows:extraction ultrasonic power of 240 W，ultrasonic frequency of
40 kHz，temperature of 60 ℃ and ultrasonic treatment time of 30 min． Samples are analyzed on an Inertsil
ODS-3C18 column(4． 6 mm × 150 mm，5 μm)using acetonitrile-0． 4% phosphoric acid as mobile phase，and
speed of flow is 1． 0 mL /min，the examination wave length is 327 nm and the column temperature is 30 ℃ ．
The chlorogenic acid shows a good linearity in the range of 0． 255 ～ 3． 06 μg /mL，egression equation being
y = 31 388x +152． 43(Ｒ2 = 0． 999 9)and the average recovery being 99． 4%(ＲSD = 2． 12%)． The result
shows that there are some differences in the content of chlorogenic acid in Tupistra chinensis among different or-
igins． The established method is simple，credible，accurate，repeatable and can be used for the quality control
of Tupistra chinensis．
Key words: Tupistra chinensis; chlorogenic acid; HPLC; determination of the content
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第 3 期 任民宏，肖海蓉 基于朴素贝叶斯分类算法的股指预测研究