全 文 ：第 31卷　第 3期
2009 年 6 月
三峡大学学报(自然科学版)
J of China Three Go rges Univ.(Na tural Science s)
Vol.31 No.3
Jun.2009
收稿日期:2009-04-30
基金项目:中国科学院高能物理研究所核分析技术重点实验室基金资助(k115)
通讯作者:邹　坤(1964-),男 ,教授 ,博士生导师 ,主要研究方向为天然药物化学.
筒鞘蛇菰提取物及松柏苷的抗氧化作用研究
王　慧　张红歧　邬昊洋　邹　坤
(三峡大学 天然产物研究与利用湖北省重点实验室 , 湖北 宜昌　443002)
摘要:研究了筒鞘蛇菰提取物及松柏苷的抗氧化作用.采用 DPPH 法对筒鞘蛇菰提取物 、松柏苷进
行了抗氧化活性的研究.结果表明 ,筒鞘蛇菰提取物中浓度为 3mg/mL 时吸光度最小 ,其他浓度在
40min内对 DPPH 自由基具有一定的清除活性 ,并基本达到稳定状态.这说明筒鞘蛇菰提取物及
松柏苷均具有抗氧化作用.
关键词:1 ,1-二苯代苦味酰基自由基(DPPH);　抗氧化;　松柏苷
中图分类号:Q949.72:R284　　　文献标识码:A 　　　文章编号:1672-948X(2009)03-0099-03
Study of Anti-oxidation Effects of Extracts of Balanophora Involucrate
and Trans-Coniferin
Wang Hui　Zhang Hongqi　Wu Haoyang　Zou Kun
(Key Labo rato ry of Research & Exploiting o f Natural Products , China Three Gorges Univ ., Yichang
443002 , China)
Abstract　To study the ant i-oxidat ion ef fect of ext racts o f Balanophora involucrate and trans-Coniferin , using
the methods of DHHP to study the anti-oxidation ef fect of ex t racts of Balanophora involucrate and trans-Co-
niferin.When the concentrat ion of the ex t racts of Balanophora involucrate i s 3 mg/mL , the abso rbency is the
least;o ther concentrat ions can definit ly eliminate the DPPH free radical.The conclusion is that both the ex-
t racts o f the Balanophora involucrate and trans-Coniferin have anti-ox idation effects.
Keywords　DPPH;　anti-oxidation;　t rans-coniferin
　　DPPH(1 , 1-dipheny1-2-picrylhydrazyl)在有机
溶剂中是一种稳定的自由基 ,呈紫色 ,在 517 nm 有强
吸收.有自由基清除剂存在时 , DPPH 的单电子被配
对而使其颜色变浅 ,在最大吸收波长处的吸光度变
小 ,而且这种颜色变浅的程度与配对电子数是成化学
计量关系的.因此 ,在此波长处的吸光度可用以检测
自由基的清除情况 ,从而评价试验样品的抗氧化能
力.近年国外有人利用 DPPH 法研究黄酮 、Tino sp
oracrispa 以及单宁和类黄酮的抗氧化能力.此抗氧化
能力用抑制率来表示 ,抑制率越大 ,抗氧化性越强.其
公式为
S 0 =[ 1-(A i -A j)/ A0] ×100%
式中 ,S 0 为抑制率;A0 为未加抗氧剂时 DPPH 溶液
的吸光度;A i 为加抗氧剂后DPPH 溶液的吸光度;A j
为浸提液在测定波长的吸光度.
蛇菰科为双子叶多年生寄生肉质草本植物.全株
供药用 ,具有补肝益肾 ,止血生肌 ,调经活血 ,清热醒
酒之功效.又为民间补药 ,可作行气止痛剂 ,治痔疮 、
虚劳出血和腰痛等症[ 1] .又据最近有关部门研究 ,本
种对肝炎[ 2] 的疗效颇为显著[ 3] .随着蛇菰应用范围的
扩大 ,它还具有何种功效成为新的研究热点 ,并引起
人们广泛关注.蛇菰具有抗炎镇痛 、抗肿瘤 、解酒毒等
活性 ,但其抗氧化作用尚未见报道.本文研究筒鞘蛇
菰的抗氧化活性 ,以期为开发中药类自由基清除以及
防治与自由基相关的疾病提供相应的实验依据 ,并为
筒鞘蛇菰的开发利用积累有价值的资料.
1　材料与试剂
1.1　药材
蛇菰为 2005年 8 月采自湖北省神农架林区 ,原
植物经三峡大学生物技术研究中心陈发菊副教授鉴
定为筒鞘蛇菰(Balanophora involucrata Hook·f·).
采用 95%乙醇浸提 3次后分别用石油醚 、乙酸乙酯 、
正丁醇萃取后得到正丁醇提取物.松柏苷由本实验室
用溶剂法提取 、色谱法分离得到 , 其结构用 ESI-
MS 、1H NMR 、13C NMR鉴定[ 4] ,结构式如图1所示.
图 1　反式松柏苷
1.2　试剂及配制
称取 19.7 mgDPPH 用无水乙醇溶解 , 定容于
100mL 容量瓶 ,摇匀 ,配制成浓度为 5 ×10-4 mol/
mL 的储备液保存于冰箱中 ,用时逐级稀释.
1.3　实验仪器
UV-2000型紫外/可见分光光度计;显色管;容
量瓶;电子天平;电子恒温干燥箱等.
2　实验方法
2.1　提取液的制备
分别准确称取 300 mg 蛇菰正丁醇提取物和松柏
苷 900μg ,按表 1配成不同浓度的样品溶液.
表 1　样品溶液的制备
样品 质量 溶剂 提取液浓度梯度
蛇菰正丁醇
提取物 300 mg
无水乙醇
30 m L
2.0 、4.0、6.0、
8.0、10.0 mg/m L
蛇菰松柏苷 900μg 无水乙醇
30 m L
60、120、180、
240 、300μg/ mL
2.2　清除 DPPH自由基的活性
吸取 2.0mL DPPH 储备液 ,用无水乙醇定容于
100.0mL 容量瓶中摇匀待测.DPPH 溶液在波长 517
nm 处有特征紫外吸收 ,利用紫外-可见分光光度仪测
定样品溶液与 DPPH 自由基作用前后的吸收值 ,按
表 2制备反应液.
表 2　试验加样表
项目 加样项
A0 1 mL DPPH·溶液+1 m L无水乙醇
A i 1 mL DPPH·溶液+1 m L样品溶液
A j 1 mL 样品溶液+1 mL 无水乙醇
　　用力摇匀 ,样品在室温下加入 DPPH 溶液后静
置 30min ,测定吸光度(A0 、A i 、A j),清除率按式(1)
计算
S A =1-(A i -A j)/ A0 ×100% (1)
式中 , A0 为未加提取液的 DPPH 溶液的吸光度;A i
为加入提取液后的 DPPH 溶液的吸光度;A j 为 DP-
PH 溶液与提取液混合后的吸光度.
2.3　DPPH标准曲线
DPPH 储备液经稀释配制成 5 个浓度的溶液:
1.0×10-5 mo l/L 、5.0×10-5 mo l/L 、1.0×10-4 mol/
L 、1.5×10-4 mol/ L 、2.0×10-4 mol/L.用软件 O rig-
inPro 7.5分析 ,得线性回归方程式
y =-0.402 11+0.447 27x , r =0.998 2
式中 , y 为吸收度 , x 为 DPPH 自由基的浓度.
3　结果与讨论
3.1　提取物清除 DPPH的活性
提取物对 DPPH 清除实验结果见表 3.提取物的
清除活性越大 ,吸光度就越低 ,活性越小吸光度就越
高;吸光度变化越快表明清除反应越快.从表 3可以
看出:蛇菰总提物中浓度为 3mg/mL 的吸光度最小 ,
为 0.103 4.其他浓度在 40min内对 DPPH 自由基具
有一定的清除活性 ,并基本达到稳定状态.
100 三 峡 大 学 学 报(自 然 科 学 版)　　　　　　　　　　　　　　2009 年 6 月
表 3　蛇菰提取物吸光度随时间的变化(mg/ mL)
时间/ min 1 2 3 4 5
1 0.116 6 0.131 4 0.1172 0.125 4 0.213 6
2 0.116 0 0.129 9 0.110 2 0.122 7 0.209 8
5 0.113 4 0.126 5 0.103 4 0.110 3 0.199 9
7 0.115 8 0.125 8 0.102 0 0.109 1 0.197 2
10 0.115 3 0.125 8 0.101 5 0.108 5 0.196 6
15 0.115 8 0.128 2 0.103 2 0.107 4 0.191 9
20 0.116 3 0.127 1 0.102 2 0.107 9 0.190 0
25 0.117 8 0.128 0 0.103 8 0.107 7 0.188 9
30 0.117 3 0.127 3 0.102 3 0.107 6 0.186 6
40 0.119 0 0.128 5 0.103 4 0.107 5 0.182 9
表 4　松柏苷吸光度随时间的变化(μg/ mL)
时间/ min 30 60 90 120 150
1 0.183 7 0.121 4 0.105 4 0.098 4 0.083 6
2 0.165 6 0.120 9 0.103 6 0.097 8 0.080 2
5 0.130 1 0.116 5 0.101 3 0.093 9 0.077 2
7 0.117 7 0.118 2 0.101 2 0.065 1 0.076 8
10 0.110 8 0.118 4 0.099 4 0.093 4 0.076 8
15 0.102 3 0.120 4 0.098 8 0.091 3 0.071 9
20 0.098 4 0.117 3 0.096 5 0.090 6 0.077 2
25 0.094 8 0.116 6 0.097 4 0.089 3 0.077 9
30 0.092 4 0.118 1 0.095 2 0.088 7 0.077 1
40 0.092 6 0.118 7 0.094 3 0.086 6 0.075 3
3.2　提取物对 DPPH的清除率
蛇菰总提物和松柏苷对于 DPPH 均有一定的清
除率 ,其中蛇菰提取物浓度为 4mg/mL 对 DPPH 的
清除率最大 ,达到了 0.943 4 ,松柏苷浓度为 150μg/
mL 时 ,其对 DPPH 的清除率最大 ,达到了 0.915 8.
根据结果可知 ,当蛇菰提取物浓度从 1 mg/mL 上升
至 4mg/mL时 ,其对于 DPPH 的清除率随浓度的增
大而升高 ,大于 4mg/mL 时呈现出降低的趋势.当松
柏苷的浓度大于 60μg/mL 时 ,其对于 DPPH 的清除
率随浓度的增大而升高.
图 4　蛇菰提取物清除率
图 5　松柏苷清除率
表 5　不同样品不同浓度对 DPPH的清除率
终浓度
/(mg ·mL -1)
蛇菰提取物
清除率
终浓度
/(μg·m L-1)
松柏苷
清除率
1 0.878 2 30 0.886 0
2 0.892 7 60 0.858 7
3 0.924 2 90 0.891 3
4 0.943 4 120 0.905 0
5 0.857 0 150 0.915 8
4　结　论
蛇菰的提取物及从蛇菰中分离得到的松柏苷均
具有一定的体外抗氧化作用 ,但其在机体内的抗氧化
作用及机制仍需进一步的研究.
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院等.中药大辞典[ M] .上海:上海科技出版
社 , 1986:2311.
[ 2] 　张绍云 , 宋昆生 ,王海春等.拉祜族药“密都那此”的研究
[ J] .中国民族民间医药杂志 , 1999 , 39:220.
[ 3] 　张绍云.蛇菰属的药用植物资源[ J] .中国民族民间医药
杂志 , 1998 , 31:27.
[ 4] 　罗　兵 , 邹　坤 ,王　慧等.筒鞘蛇菰化学成分研究[ J] .
时珍国医国药 , 2007 , 18(8):1929.
[责任编辑　周文凯]
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