全 文 ：第2 2 卷 第 1 期
2 0 0 4 年 1 1 月
中 医 药 学 刊
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1 1
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2 0 0 4
大叶按黄酮类化合物的分析及抑菌活性的研究
王岳峰‘ 余延春2 杨国军 3 魏柏桂“ 马超英‘
(1
. 西南交通大学药学院 , 61 42 02 , 四川峨眉山 ; 2 . 番禺何贤纪念医院 , 5 1 140 , 广东广州 ;
3
. 厦门中药厂有限公司 , 861 0 9 , 福建厦门 ;4 . 南康市潭口中学 , 341 4 01 , 江西南康刀
第一作者男 , 195 7 年生 , 副教授 )
摘 要 : 目的 : 分析大叶按 Eu ca 加 tus ro bus ta . Sln 干燥叶中黄酮类化合物 的含量 , 并研究其杭菌的生物
活性 。 方法 :采用紫外分光光度法测定含量 , 粗提物通过聚醚胺柱分离总黄酮 Fl o oi n ds , 在平板培养基上比
较黄酮类化合物与土霉素 口叼嘴etra cy li、 抑制大肠杆菌 Es ch eri ch ia 一 co il 、 金黄 色菊萄球菌 st aP划oc c us
au re。 、 蜡样芽袍杆菌Ba ct eri “In ca ct 。 的活性 。 结果 : 总黄酮含量为 0 . 90 3 % , 提取率为 4 . 30 6 % , 抑菌活性
明显优于土霉素。 结论 : 该植物叶作为类抗生素饲料添加剂的开发具有较高的实用及经济价值。
关 键 词 : 大叶按 ; 黄酮类化合物 ; 杭菌活性
中图分类号 : R9 31 文献标识码 : A 文章编号 : 10() 9 一 52 76( 2 〔冷4 )1 , 2 135 一 02
中医药
大叶按 E. ro b琳ta . sm 为桃金娘科屿7 名a ce ae 植物 ,
原产澳大利亚 ,多数为高大乔木 。 常见的有大叶按 、窿缘
按 E u ca 加to ex e血 . F. 犷 二u ell、 细 叶按 E u e a加 t。
te ret uo rn 衍. 。等〔‘〕。 按树植物是重要的经济植物 , 又是
我国民间常见的药源植物之一 , 具有杀菌 、祛痰 、健胃、收
敛、祛风和抗肠道寄生虫作用 (z1 。 本研究旨在以江西赣
南地区引种栽培的大叶按干燥叶为原料 , 探索有效成份
的含量及提取物的收率 ,并对其进行与土霉素比较的抑
菌活性试验 ,为开发类抗生素饲料添加剂奠定良好的应
用基础。
1 材料与仪器
材 料 采集了江西赣南地区引种栽培的大叶按鲜
叶 , 在自然环境下风千后使用 。 植物经江西农业大学植
物学博士霍光华副教授鉴定 。
对照品 芦丁 (总黄酮 ) , 色谱纯 , 上海生化试剂厂
生产 ;土霉素 ,购自中国药品生物制品检定所 。
菌 株 大肠杆菌 Es e he rie hia 。0 11 ; 金黄色葡萄球
StaP 勺lo co c 韶 a o re us 菌 ; 蜡样 芽 抱 杆 菌 Bac teri “m
ca ct us
,由江西农业大学生物工程系应用微生物实验室
提供 。
培养墓咙牛肉膏 0 . 3 % ,蛋白陈 0 . 5 % , 氯化钠0 . 5 % ,
潮旨1 , 8% ,水 l似〕耐 PH 7 . 0 。
仪器与设备 D U一7 紫外一可见分光光度计 , 美国
贝克曼公司生产。
2 实验方法与结果
标准曲线的制备 精密称取在 120 ℃减压干燥至恒
重的对照品芦丁 0 . 100 4 9 , 置 5 0动 的容量瓶中 , 加甲醇
35 耐 , 置水浴微热至溶解 , 放冷 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇
匀 , 即得每 l耐含芦丁 0 . Z m g 。 精密吸取配制的标准溶
液 2 . 0 , 2 . 0 , 3 . 0 , 4 . 0 和 5 . 0撇 ,分别加人 2 5ml 容量瓶中 ,
各加水 6耐 加 5 % 亚硝酸钠溶液 1妞 ,使混匀 ,放置 6 m in ,
加 10 % 硝酸铝溶液 ld , 摇匀 , 放置 6 mi n , 加氢氧化钠
10 d
,再加水至刻度 , 摇匀 ,放置 15 而n ,在 SO0n m 波长处
测定吸光值 A 。
样品的制备与测定 取大叶按干燥叶粗粉 , 于 60 ℃
进一步干燥 6h 至恒重 , 精密称定 1 、 佣9 4 9 置索氏提取器
中 , 加无水乙醇 120 而 ,加热回流至提取液无色 , 放置冷
却 , 弃去 乙醚 , 再加甲醇 90 d , 加热回流至提取液无色 ,
移至 100 ml 容量瓶中定容。 再精密量取 10 耐 , 置 lo d
容量瓶中加水 6耐 , 加 5 % 亚硝酸钠溶液 1耐 ,使混匀 ,放
置 6 m in , 加 10 % 硝酸铝溶液 1耐 , 摇匀 , 放置 6 m in , 加氢
氧化钠 20耐 , 再加水至刻度 , 摇匀 , 放置 15 m in , 在 5 0on m
波长处测定吸光值 A 。
表 1 对照品与样品的测定结果 {m g)
对照品编号 1 2 3 4 5 6
对照品含芦丁的量 0 2 0 ‘ 4 0 . 6 0 . 8 1 · 0 s a n lp le
吸 光 值 A 0 . 06 5 0 . 13 4 0 . 2 05 0 . 2 86 0 . 3砧 0 3 2 8
注 :相关系数 r 二 0 . 9 99 4 , 具有较好的线性关系 ;根据曲线方
程人 二 0 . 37 6 x 一 0 . 01 46 , 样品总黄酮含量为 x( % ) 二 A + D . 01 46 /
0
.
3 7 6 * 10() / 10
* 1/ 1
.
(X) 94
* 10 0
二 0 . 9 03
。
粗提物的收率 称取干燥按叶 25 . 0 13 59 置回流装
置中 ,分 2 次加人 150 d 80 % 的乙醇在水浴上提取 90 m in
回收乙醇。 残液静置 , 过滤 , 滤液加人装有聚酞胺的层析
柱中 ,依次用水 、 80 % 乙醇洗脱 , 且分别用烧杯接收 , 直至
80 % 乙醇洗脱液与盐酸镁粉反应不显樱红色为止。 乙醇
洗脱液在水浴上蒸发 ,再在烘箱中干燥至恒重 ,精密称定
为 1 . 0 77 9 ,其收率为 1 . 07 7 / 25 . 0 135 * z0() % 二 4 . 30 6 % 。
粗提物的抗菌棒性 依照粗提物收率的实验方法 ,
将乙醇洗脱液定容至 10 时 , 即每 1血 含粗提物约为
1
.
omg
,再将洗脱液稀释 10 倍 , 配成每 1而 含粗提物约为
0 lmg 的乙醇溶液 , 同时用土霉素做对照品 , 配成与粗提
物浓度相同的乙醇溶液 , 即每 1而 含 1 . 0毗 的土霉素溶
液 , 分别在接种了大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、蜡样芽抱
杆菌的牛肉膏蛋白陈平板培养基上作抑菌活性试验 , 其
抑菌活性的大小有明显的差异。 (下转第21 43 页)
2135
学刊
DOI：10.13193/j.archtcm.2004.11.169.wangyf.085
第 n 期 唐莉珍 : 小 儿食积发病及治疗
的便秘。 再比如 , 笔者多年诊治的复感儿 、顽固性咳嗽 ,
证属外感挟滞 、食积咳嗽者 , 以及因食积而引起的其他病
症 , 能占到就诊病例数的一半以上 。 临床上往往是多食
之小儿来看发热 、咳嗽等病 , 而食欲差的小儿则是厌食来
就诊 , 很少患呼吸道疾病。
食积发病的特点 当前小儿食积发病的特点之一是
以幼儿及儿童居多 , 且多伤于肉食 , 为食滞 。 而婴幼儿的
乳滞目前则比较少见 。 之二是口中臭秽 ,大便干结或便
秘 , 舌苔黄腻是临床必见之症 。 此乃食积化热而导致的
脾胃湿热证 , 重者引发他病。 而脾 胃虚弱 、虚中挟实引起
的食积发病只占临床很少部分。 小儿 “脾常不足 ”是中
医一贯的理论 , 而目前脾实证比脾虚证多见 , 这也是当前
儿科临床疾病的特点 。
食积发病的治疗 食积形成后 ,伤及脾胃 , 致脾胃功
能失调 , 可出现一系列消化系统病证。 而停留于胃肠的
食积 , 又成为新的致病因素 , 可诱发多种小儿疾病 。 如临
床最常见的小儿感冒 , 特别是反复易感儿 , 往往脾胃素有
食积 , 致外邪即发病。 此种感冒 ,若积滞不去 ,脾胃功能
得不到调整 ,单纯解表是不易治愈的。 往往迁延 日久 , 反
反复复 , 更伤正气。 如《内经》所云 : “客垢不除 , 则真元
难复 ” 。 又如小儿咳嗽一证 , 食积咳嗽多伴便秘 , 根据中
医 “肺与大肠相表里 ” 的理论 , 在方中加人消食通便之
品 , 大便一通 , 食积得化 , 肺热即消 , 发热咳嗽很快好转 。
如例一 、例二 , 均在方中加人莱服子 、焦山植 、焦槟榔等 ,
病症很快解除 。 例三水痘 , 清热凉营 、化食导滞同治 ; 例
五尿路感染 , 以消食清热利湿并治 , 重用焦三仙 、鸡内金
消食 ,均很快获愈 。 故笔者认为在儿科临床中 , 不论是先
有食滞 , 后由他证 ,还是先由他证后有食滞 , 都应注重消
食导滞法的应用 。 在食滞兼有他证时 , 应食滞与他证同
时治疗 , 方能取效迅速 。
名‘弓含屯召毯公屯‘名‘健后忍公召公召召召台召么召玄忿公召召召公召宙番舒欢冲淆弓g 召公召含召公、匆召宙忍召召官健公毯公召‘屯召刁‘名公忍公名食屯召召宫忍公忿‘忍‘忿公习召
(上接第 2 135 页 )
图 l 接种大肠杆菌 图 2 接种金黄色葡萄球菌 图 3 接种蜡样芽抱杆菌
表 2 粗提物与土霉素的抑菌活性比较 (m m ) 粗提物在低浓度 1 % 的情况下抑菌效果明显的重要原因
菌株 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 蜡样芽抱杆菌
粗提物 23 . 9 23 . 8 24 , O
稀释粗提物 14 . 5 14 . 4 14 . 8
土霉素 2 0 . 9 0 16 , 4 0 19 . 7 0
3 讨 论
大叶按干燥叶总黄酮含量仅为 0 . 903 % , 但抑菌活
性较强 ,在抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 、蜡样芽抱杆
菌方面明显优于土霉素。 尽管粗提物稀释液的抑菌效果
不及土霉素 , 但原液中含粗提物的浓度较低 , 仅为
0
.
01 岁ml , 即为 1 % , 加之粗提物的得率较高 , 达4 . 306 % ,
所以该提取物作为类抗生素何料添加剂的开发既有一定
的实用价值又有较好的经济价值。
大叶按干燥叶粗提物经聚酞胺柱分离后去除了较多
的水溶性杂质 ,其总黄酮的纯度无疑会明显提高 , 这也是
之一。
按树叶不仅有明显的抗菌活性 , 中国科学院曾进行
过从福建采集的柠檬按 、窿缘按干燥叶抗菌活性的研
究川 , 而且可以提取芳香油 ,该植物还是高级造纸原料 ,
是蜜源植物和观赏树种。 加之我国南方各省引种栽培较
广 ,繁殖较快 , 品种较多 ,资源丰富 ,所以具有广阔的开发
前景。
参考文献
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版社 , 1 98 5 , 2 4
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中医药
2 143
学刊
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