全 文 ：2016年5月第22卷第10期 May.2016 Vol.22 No.10
通讯作者：王定勇，E-mail：wdingyong@163.com
蛇菰属植物为寄生肉质草本植物，全球约80种，分布于
亚洲和大洋洲热带和亚热带，我国产19种，其中应用较多的
有12种，为多种民族民间常用药，药效肯定，且无明显的毒副
作用[1]。多蕊蛇菰（balaophora polyandra griff.）为蛇菰属植物，
俗称土苁蓉，分布于我国四川及华南各省，全草入药，具有滋
阴补肾、止痛的功效，民间用于治疗血虚、出血和淋病[2]。国内
对多蕊蛇菰的研究报道较少。吉腾飞2007年报道了多蕊蛇菰
乙醇提取物的降血糖活性[3]，并在2010年报道了该植物地上
部分的化学成分[4]。鉴于该属植物其它种有较好抗癌活性 [5]，
本研究开展多蕊蛇菰体外抗肿瘤活性的初步研究。采用MTT
法检测多蕊蛇菰甲醇提取物对人肝癌细胞Bel-7402和宫颈癌
细胞Hela的生长增殖影响，IC50值分别为 22.77 μg/mL和
28.42 μg/mL。现报告如下。
1 材料与仪器
1.1 细胞株 人肝癌细胞Bel-7402和人宫颈癌细胞Hela从
美国模式培养物研究所购买。
1.2 药物和试剂 多蕊蛇菰2014年11月1日采集于广东省阳
春市，经广东药学院中药学院曾令杰教授鉴定为蛇菰科蛇菰
属植物-多蕊蛇菰（balaophora polyandra griff.）。RPM，1640培
养基(Gibco公司)，胎牛血清（FAA公司），胰蛋白酶（Gibco公
司），四甲基偶氮唑盐（MTT，Sigma公司），二甲基亚砜（DMSO，
Sigma公司）。其它试剂均为分析纯。
1.3 主要仪器 CO2培养箱 (Thermo Electron公司)，SW-CJ-
1FD细胞超净工作台（苏州净化设备有限公司），-80℃超低温
干燥箱(Thermo Electron公司)，移液枪（Eppendorf公司），C3i-
CR3i低温高速离心机(Thermo Electron公司)，SK-1快速均匀
器（江苏国华仪器厂），GZX-6420MBE数显鼓风干燥箱（上海
博讯实业有限公司医疗设备厂），YXQ-LS-30SⅡ立式压力蒸
汽灭菌器（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），680型酶联
检测仪(Bio-Rad公司)，RE-52CS旋转蒸发器（巩义市予华仪
器有限公司）。
2 方 法
2.1 提取方法 取阴燥的多蕊蛇菰50 g粉碎至约30目，用甲
醇100 mL加热回流提取2次，每次1 h，滤过，合并滤液，50℃以
下减压浓缩得甲醇提取物浸膏（8.5 g），80℃恒温干燥后备用。
多蕊蛇菰甲醇提取物体外抗肿瘤活性研究
招丽娟1，方 功2，庞朝海2，刘林生1，王定勇2
（1.佛山市中医院，广东 佛山 528000；2.广东药学院，广东 广州 510006）
[摘要] 目的：研究多蕊蛇菰甲醇提取物的体外抗肿瘤活性。方法：采用MTT法检测多蕊蛇菰甲醇提取物对
人肝癌细胞Bel-7402和宫颈癌细胞Hela生长增殖的影响。结果：多蕊蛇菰甲醇提取物对人肝癌细胞Bel-7402和
宫颈癌细胞Hela的细胞毒性IC50值分别为22.77 μg/mL和28.42 μg/mL。结论：多蕊蛇菰甲醇提取物对人肝癌细胞
Bel-7402和宫颈癌细胞Hela均有抑制作用，并呈现出剂量-效应关系；多蕊蛇菰甲醇提取物具有显著抗肿瘤活
性。
[关键词] 多蕊蛇菰；甲醇提取物；抗肿瘤
[中图分类号] R273 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2016）10-0038-02
Anti-tumor Effects of MeOH Extract from Balaophora Polyandra in Vitro
ZHAO Li-juan1, FANG Gong2, PANG Chao-hai2, LIU Lin-sheng1, WANG Ding-yong2
(1.Foshan Hospital of TCM, Foshan Guangdong 528000, China;
2.Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou Guangdong 510006, China)
[Abstract] Objective: To study anti-tumor activities of MeOH extract from Balaophora polyandra in vitro.
Methods: MTT assay was used to evaluate the inhibitive effects of MeOH extract from Balaophora Polyandra on
inhibited proliferation of human hepatocellular Bel-7402 and human cervical cancer cell line Hela in vitro. Re－
sults: The IC50 values of MeOH extract from Balaophora Polyandra towards Bel-7402 cells and Hela cells were
22.77 μg/mL and 28.42 μg/mL, respectively. Conclusion: MeOH extract from Balaophora Polyandra showed obvi－
ous effects on inhibited proliferation of Bel-7402 cells and Hela cells with a dose-effect relationship, which in－
dicated its powerful anti-tumor activities.
[Key words] balaophora polyandra; MeOH extract; anti-tumor activity
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2016.10.013
2016年5月第22卷第10期 May.2016 Vol.22 No.10
2.2 甲醇提取物溶液制备 称取已干燥至恒重的甲醇提取
物0.5 g，精密称定，用二甲基亚砜（DMSO）溶解于10 mL容量
瓶中，配成质量浓度为50 g/L的提取物供试液，4℃冰箱保存，
临用前用培养基稀释分别配制成不同浓度提取物供试液
（12.5 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL），并使各供试液中所含
DMSO的体积分数小于0.1%。
2.3 细胞培养 分别取人肝癌细胞株Bel-7402和人宫颈癌
细胞株Hela（冻存于-80 ℃冰箱），冻存管置于37 ℃的水浴锅
中解冻复苏后转入15 mL离心管内（含双抗稀释液和10%胎牛
血清的1640培养基），1000 r/min，离心5 min，除去上清液，加入
1640培养基，置于37℃，5%CO2培养箱中培养，常规传代培养。
2.4 指标检测 MTT法测定多蕊蛇菰甲醇提取物对人肝癌
细胞Bel-7402和宫颈癌细胞Hela生长的抑制作用，采用MTT
比色法，分别取对数生长期的Bel-7402细胞和Hela细胞经0.25%
胰酶消化、计数、制成细胞浓度为8×104个/mL的悬液后，按每
孔100 μL接种到96孔培养板中，置于37 ℃，5%CO2培养箱中
培养24 h。待细胞贴壁后换液加药，将 3个不同浓度的
(12.5 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL）提取物供试液分别加
入96孔板中，100 μL/孔，每个浓度设3个复孔。另外设有空白
组，加入1640培养基100 μL。96孔培养板置于37 ℃，5%CO2培
养箱中培养48 h后弃去培养液，加入含0.5 mg/mL MTT的无血
清培养基100 μL，继续培养4 h后弃去培养基，每孔加入100 μL
DMSO，置摇床上震荡10 min使结晶物充分溶解，利用酶标仪
测定每孔在490 nm处的OD值，各组OD值取均值后按以下公
式计算抑制率。实验重复3次。SPSS probit回归分析法计算细
胞半数致死量IC50值。细胞生长抑制率（%）=（1-实验组OD值/
空白组OD值）×100%
2.5 统计学方法 计量资料以“均数±标准差”（x±s）表示，采
用SPSS13.0软件进行统计分析，组间比较采用方差分析，P﹤
0.05为差异有统计学意义。
3 结 果
3.1 多蕊蛇菰甲醇提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影
响 随着质量浓度的增加抑制率增强，抑制作用呈一定的剂
量依赖性，其IC50值为22.77 μg/mL。（见表1）
表 1 多蕊蛇菰甲醇提取物对人肝癌细胞 Bel-7402的抑制
率 （x±s，n=3）
浓度 (μg/mL) 抑制率(%) IC50 (μg/mL)
12.5 25.33±0.0028 22.77
25 57.44±0.0211
50 85.70±0.0139
3.2 多蕊蛇菰甲醇提取物对人宫颈癌细胞Hela增殖的影
响 随着质量浓度的增加抑制率增强，抑制作用呈一定的剂
量依赖性，其IC50值为28.42 μg/mL。（见表2）
表 2 多蕊蛇菰甲醇提取物对人宫颈癌细胞 Hela的抑制率
（x±s，n=3）
浓度(μg/mL) 抑制率(%) IC50(μg/mL)
12.5 1.77±0.0475 28.42
25 21.13±0.0510
50 91.31±0.0439
4 讨 论
蛇菰属植物是一类重要的天然资源，民间应用较多，疗
效肯定。多数品种具有清热解毒、补肾壮阳、止血生肌、镇痛、
解酒等功效，现代药理研究表明该属植物具有镇痛抗炎、解
酒毒、降血糖、抑制HIV与靶细胞融合、抑制荔枝霜疫霉病菌、
抗肿瘤等作用，临床应用于治疗神经衰弱、肝功能受损、消化
道溃疡、肾虚腰痛、阳痿、自汗、哮喘等疾病[6]。该属植物蛇菰
(B. japonica Mark)，又名葛花菜、葛乳，收载于《本草纲目》菜
部，小鼠急性毒性实验显示小鼠对蛇菰提取液的最大耐受
量＞37.5 g/kg，相当于成人用量（0.5 g/kg）的75倍以上，表明蛇
菰安全无毒[7]。蛇菰属其它种在民间大范围的长期临床应用
也预示着该属植物的毒性是可控的。该属植物的化学成分主
要有三萜类、苯丙素类、甾醇类、鞣质类、黄酮类及其苷等[8]。
依据民间用药习惯(水煎煮)，笔者认为该属植物含有的水溶
性鞣质苷类成分在其药理活性中可能扮演重要角色；有文
献 [9-11]报道了这类物质[来源于蛇菰(B. japonica Mark)]，如
1，3，4-三-O-没食子酰基-6-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄
糖、1，2，6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖、1，2，6-三-
O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖、1，3-二-O-咖啡酰基-6-O-
没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖，在抑制肝癌HepG2细胞增殖
和抑制HIV病毒与靶细胞的融合方面表现优良的活性。
本研究报道了该植物的抗癌活性，其甲醇提取物对人肝
癌细胞Bel-7402和宫颈癌细胞Hela有较好抑制作用。多蕊蛇
菰富含水溶性鞣质苷类成分[4]，且广东省内资源丰富，民间临
床应用广泛，疗效确切，因此具有较好研究开发前景。至于其
抗癌活性的物质基础、作用机制、与其中的水溶性鞣质苷类
物质是否有关，有待于进一步研究。
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（收稿日期：2015-05-05 编辑：蒋凯彪）
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