全 文 ：延边大学医学学报　2010 年 6 月　第 33卷　第 2期
及脑复康阳性对照组小鼠 400 mL/L 乙醇 10
mL/kg ,30 min后行水迷宫测验 ,记录 2 min内错误
次数和到达时间.采用 SPSS 11.0统计软件对所得
数据进行统计学处理 ,数据以均数±标准偏差( x ±
SD)表示 ,计量资料比较采用 t检验进行.
2.3　结果　由表 2 可见 ,化合物 5 a 大 、小剂量组
小鼠错误次数明显少于乙醇对照组 ,相比较有显著
性差异(P<0.05 , P <0.01).
表 2　化合物 5 a 对小鼠记忆能力的影响( x±SD , n=10)
　组别　　 剂量/(mg/ kg) 到达时间/ s 错误次数/次
正常对照组 32.89±23.25 1.78±1.86
乙醇对照组 94.44±38.02 7.00±5.00
化合物 5 a
大剂量组 80 80.50±45.43 2.20±1.55 ＊＊
化合物 5 a
小剂量组 40 73.20±47.34 2.60±2.67 ＊
脑复康
阳性对照组 3 000 71.00±17.29 2.75±2.30 ＊
与乙醇对照组比较 , ＊ P<0.05 , ＊＊ P<0.01.
3　讨论
本实验结果表明 ,所合成的 2-[ 1-(2-吡啶)乙氧
基]乙酸 2-(苯氨基)乙酯(5 a)对 400 mL/L 乙醇所
致小鼠记忆能力降低具有明显的改善作用 ,其机理
及深入的构效关系有待于进一步研究阐明.
[参　考　文　献]
[ 1] 　张均田.近年来国内关于学习与记忆药理研究概况
[ J] .药学学报 , 1986 , 21(8):636.
[ 2] 　宋妍 ,李明洙.2-[ 1-(2-吡啶)乙氧基] 乙酸酯的合成及
其对小鼠记忆力的影响[ J] .延边大学医学学报 , 2008 ,
29(4):266.
[ 3] 　宋哲洙 , 李明洙.90-80 对小鼠学习记忆的促进作用
[ J] .新药研究基金会报 , 1992 , 2:109
[ 4] 　李明洙 ,陈月仙 , 李莲姬 ,等.(2-吡嗪甲氧基)乙酸 2-二
甲氨基乙酯盐酸盐的合成及其对小鼠慢性中毒所致记
忆障碍的对抗作用[ J] .延边大学学报:自然科学版 ,
1997 , 23(4):35.
[ 5] 　夏玉明 , 罗惠善 ,李明洙 ,等.苄氧乙酸 2-二烷氨基乙酸
盐酸盐合成及其对小鼠学习记忆的促进作用[ J] .中国
医药工业杂志 , 1999 , 30(8):357.
[ 6] 　宋明霞 ,刘鹤 , 李明洙 .2-[ 1-(2-吡啶)乙氧基] 乙酸 2-
取代乙酯类化合物的合成及其对小鼠记忆力的影响
[ J] .延边大学医学学报 , 2010 , 33(1):24.
[ 7] 　韩广甸 , 范如霖 , 李述文.有机制备化学手册[ M ] .北
京:化学工业出版社 , 1985:310.　
[ 基金项目] 　吉林省中医药管理局中医药科技资助项目 08SYS-
102;吉林省教育厅资助项目 No.2005-105
[ 收稿日期] 　2010-03-18
＊[ 通信作者] 　李志勇(1975—),男 ,讲师 ,硕士 ,研究方向为
中药提取分离.
老鹳草酶解法提取工艺优化
郑玲玲1 ,苗春雷2 ,李志勇1＊
(1.延边大学药学院 , 吉林 延吉 133000;2.吉林敖东延边药业股份有限公司 产品开发部 , 吉林 敦化 133700)
[ 摘要] 　 [目的] 优化老鹳草酶解法提取工艺.[ 方法] 以鞣质含量为指标 , 通过正交设计试验进行优
选.[ 结果] 确定最佳提取工艺条件为纤维素酶用量为 10 U/ g ,酶解温度为 60 ℃,酶解时间为 60 min.
[ 结论] 优化的提取工艺简单 、稳定且提取率高.
[ 关键词] 　老鹳草;酶解;正交试验
[ 中图分类号] 　R 284.2　　　[ 文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　1000-1824(2010)02-0111-03
Optimization of extracting enzymolysis technology for the Geranium
ZHENG Ling-l ing1 , MIAO Chun-lei2 , LI Zhi-yong1＊
(1.Yanbian University College o f Pharmacy , Yanji 133000 , J ilin , China;2.Department o f Product Development Div ision ,
J ilin Aodong Yanbian Pharmaceutical Co., L td., Dunhua
133700 , J ilin , China)
ABSTRACT: OBJECTIVE To optimize the
ex t racting enzymo ly sis technolo gy fo r the Gerani-
um.METHODS The content o f tannin w as as the
index , or thogonal design method w as used fo r
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Journal of Medical Science Yanbian University　Jun.2010　Vo l.33 No.2
optimiza tion.RESULTS The opt imum ex tracting enzymolysis techno logy fo r the Geranium was as follow s:
the cellulase amount w as 10 U/g , the enzymolysis temperature w as 60 ℃, and enzymoly sis time w as 60
minutes.CONCLUSION The optimized ex tracting enzymoly sis technology for the Geranium is simple ,
steady and high ex tracting rate.
Key words:geranium w ilfordii;enzymoly sis;orthogonal test
　　老鹳草是传统中药 ,来源于牻牛儿苗科植物牻
牛儿苗(E rodium step hanianum Willd)、老鹳草
(Geranium wil f ordi i Max im.)或野老鹳草(Gera-
nium carol inianum)的干燥地上部分[ 1] , 主要化学
成分包括鞣质 、黄酮类 、有机酸和挥发油等 ,其中鞣
质含量最为丰富[ 2-3] ,是主要药效成分.本研究通过
正交试验优选了酶解法提取老鹳草鞣质的工艺条
件 ,为酶解法在老鹳草提取中的应用提供了实验
依据.
1　材料
老鹳草采集于吉林省延吉市三道镇 ,经延边大
学药学院生药学教研部刘永镇教授鉴定为老鹳草
(Geranium wil f ordii Maxim);纤维素酶(0.5
U/mg)为美国 Sigma 公司产品 ,批号为 20071015;
没食子酸对照品为中国药品生物制品鉴定所产品 ,
批号为 110831-200803;干酪素为北京奥博星生物
技术责任有限公司产品 ,批号为 20061022;其他试
剂均为分析纯.D-1900型紫外分光光度计为日本日
立公司产品;HH-W420 型数字显示三角恒温水箱
为金坛市科析仪器有限公司产品.
2　方法与结果
2.1　鞣质含量测定方法考察　采用比色法测定鞣
质含量 ,鞣质含量以吸光度值表示[ 1] .
2.1.1　溶液的制备　磷钼钨酸试液:取钨酸钠 100
g 、钼酸钠 25 g ,加入 700 mL 水溶解 ,加入 100 mL
盐酸及 50 mL 磷酸 ,加热回流 10 h ,加入 150 g 硫酸
锂 、50 mL 水及数滴溴 ,煮沸除去过多的溴 ,放冷 ,加
水稀释至 1 L ,滤过 ,即得.碳酸钠试液:取 145 g 碳
酸钠 ,加水溶解 ,定容至 500 mL ,即得.对照品溶液:
精密称取没食子酸对照品 50 mg ,置于 100 mL 棕色
容量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 ,精密量取 5 mL ,
置于 50 mL 棕色量瓶中 ,用水稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得.供试品溶液:取样品液滤过 ,精密量取续滤液
5 mL置于 100 mL 棕色量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇
匀 ,即得.
2.1.2　线性关系考察　精密量取对照品溶液 0.5 ,
1.0 ,2.0 ,3.0 , 4.0 , 5.0 , 6.0 , 8.0 , 10.0 mL , 分别置
于 25 mL 棕色容量瓶中 , 各加入磷钼钨酸试液
1 mL ,再分别加入 11.5 , 11.0 , 10.0 ,9.0 , 8.0 , 7.0 ,
6.0 ,4.0 ,2.0mL 水 ,用碳酸钠试液稀释至刻度 ,摇
匀 ,放置 30 min ,以随行剂为空白 ,在波长为 760 nm
处测定吸光度.以检测浓度(C)为横坐标 ,吸光度
(A)为纵坐标 ,进行线性回归 ,得回归方程为 A =
109.77 C+0.0704(r=0.999 6).结果表明 ,没食子
酸质量浓度在 0.001 ～ 0.008 g/L 范围内时质量浓
度与吸光度呈良好的线性关系.
2.1.3　供试品含量测定　总酚量测定:精密吸取供
试品溶液 2 mL ,置于 25 mL 棕色瓶中 ,按照 2.1.2
项下方法中自加入 1 mL 磷钼钨酸试液起操作 ,加
入 10 mL水 ,依法测定吸光度 ,即得 A1 .不被吸附的
多酚量测定:精密量取供试品溶液 25 mL ,加入到盛
有 0.6 g 干酪素的 100 mL 具塞锥形瓶中 ,密塞 ,置
于 30 ℃水浴中保温 1 h ,时时振摇 ,取出 ,放冷 ,摇
匀 ,滤过 ,精密吸取续滤液 2mL ,置于 25 mL 棕色量
瓶中 ,按照 2.1.2 项下方法中自加入 1 mL 磷钼钨
酸试液起操作 ,加入 10 mL 水 ,依法测定吸光度 ,即
得 A2 .含量计算公式:鞣质含量=总酚量-不被吸
附的多酚量 ,即 A=A1 -A2 .
2.2　工艺优化　采用纤维素酶酶解法提取老鹳草 ,
以样品中鞣质含量为评价指标 ,通过正交设计试验
考察纤维素酶用量 、酶解温度和酶解时间等 3个因
素 ,优选最佳工艺.各因素水平见表 1 ,正交试验安
排与结果见表 2.
2.2.1　样品的制备　取 50 g 老鹳草 ,剪成 1 cm 左
右 ,加水浸泡 2 h后加热煮沸 5 m in ,冷却 ,降温至约
40 ℃,置于恒温水浴锅中 ,加入新鲜配制的50 g/L
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延边大学医学学报　2010 年 6 月　第 33卷　第 2期
纤维素酶溶液 ,按照表 2条件酶解 ,结束后于 60 ℃
温浸 2次 ,每次 30 min ,收集提取液 ,滤过 ,定容至
1 L ,为样品溶液.
2.2.2　结果分析　以鞣质含量为指标 ,采用统计软
件对正交设计试验结果进行方差分析和多水平均值
检验 ,结果见表 3及表 4.结果表明 ,在所选水平范
围内 3个因素对鞣质含量影响程度一致 ,均无显著
性差异.A 因素中 A 1 和 A 2水平之间无显著性差
异 ,A 1 ,A 2 , A 3水平间有显著性差异 ,各水平影响
为A 1>A 2>A 3 ,确定选择 A1;B因素中B1与B2 ,
B1与 B3水平间无显著性差异 ,B2与 B3水平间有
显著性差异 ,各水平影响为 B3>B1>B2 ,故确定选
择 B3;C因素中各水平间均无显著性差异 ,确定选
择 C1.最佳工艺条件为 A 1 B 3 C 1 , 即酶用量为
10 U/g ,酶解温度为 60 ℃,酶解时间为 60 min.
2.2.3　验证实验　取老鹳草 15 g ,按照上述优化工
艺进行提取 ,重复进行 3次平行试验 ,测得鞣质吸光
度值为 0.443±0.012 ,高于正交设计试验中最大吸
光度值 ,表明优化试验成功 ,该工艺稳定 、可行.
2.2.4　对比试验　在不加酶的情况下 ,按照上述优
化工艺条件进行水提取 ,结果见样品的吸光度值为
0.115±0.013 ,与验证实验所得结果进行比较见有
显著性差异(P<0.05),提示酶解法优于水提法.
表 1　正交设计因素水平
水平
因素
A
酶用量
/(U/ g)
B
酶解温度
/ ℃
C
酶解时间
/min
1 10 40 60
2 20 50 90
3 30 60 120
表 2　正交设计试验安排及结果
组号
A
酶用量/(U/ g)
B
酶解温度/ ℃
C
酶解时间/min
吸光
度
1 30 60 60 0.298
2 10 50 120 0.265
3 30 40 120 0.208
4 10 60 90 0.415
5 20 60 120 0.363
6 30 50 90 0.166
7 20 50 60 0.240
8 20 40 90 0.371
9 10 40 60 0.317
表 3　方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方差 F 值 P值
A 0.22 2 0.011 15.095 0.062
B 0.27 2 0.014 18.896 0.050
C 0.03 2 0.001 1.777 0.360
误差 0.01 2 0.001
表 4　各因素多水平均值检验结果
因素(I) 因素(J) 均数差(I-J) 标准偏差 P 值
A1 A 2 0.008 0.022 0.761
A 3 0.108 0.022 0.039
A2 A 3 -0.108 0.022 0.045
B 1 B2 0.075 0.022 0.076
B3 -0.060 0.022 0.112
B 2 B3 -0.135 0.022 0.026
C 1 C 2 -0.032 0.022 0.280
C 3 0.006 0.022 0.801
C 2 C 3 0.039 0.022 0.220
3　讨论
酶解法提取中药成分具有工艺简单及提取率高
等优点 ,与有机溶剂提取相比较 ,成本较低 ,且对设
备无特殊要求 ,适用于工业化大生产[ 4-5] .本实验结
果表明 ,酶解法提取老鹳草中鞣质类成分的最佳工
艺条件为酶用量为 10 U/g ,酶解温度为 60 ℃,酶解
时间 60 min.该工艺简单 、稳定且提取率高 ,认为可
应用于老鹳草中鞣质类成分的提取.
[参　考　文　献]
[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典 一部[ M] .北
京:化学工业出版社 , 2005:80.
[ 2] 　雷海民 ,魏露雪 , 林文翰.粗根老鹳草化学成分的研究
[ J] .药学学报 , 2000 , 35(1):67.
[ 3] 　杜树山 , 张文生 , 吴晨 , 等.毛蕊老鹳草化学成分研究
[ J] .中国中药杂志 , 2003 , 28(7):625.
[ 4] 　罗宏 , 尹海波.中药老鹳草的研究[ J] .长春中医药大学
学报 , 2010 , 26(2):285.
[ 5] 　杜列勇 ,陈兴 , 刘文山 ,等.老鹳草总黄酮提取工艺研究
[ J] .中国现代药物应用 , 2008 , 2(21):10.　
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