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小叶丁香的组织培养



全 文 :收稿日期:2011-09-30
小叶丁香的组织培养
冷强1,张竹2
(1.海林市园林管理站,黑龙江 海林 157100;2.大庆医学高等专科学校)
摘 要:以小叶丁香的茎段和叶片为外植体进行植物组织培养。分别以0.1%的升汞和65% 的次氯酸
钠对外植体进行灭菌,将灭菌的小叶丁香叶片接于不同的培养基中进行脱分化培养;将灭菌的小叶丁香
茎段接于不同培养基中,观察腋芽的促生情况;将促生出的小叶丁香的腋芽进行生根培养。结果表明:
在0.1%的升汞中,小叶丁香的茎段和叶片最佳灭菌时间均为30s;在65%的次氯酸钠中小叶丁香的茎
段和叶片最佳灭菌时间分别为2min和1min;最佳脱分化培养基为:MS+NAA2mg/L+6-BA2mg/L;最
佳腋芽促生的培养基为:MS+6-BA2mg/L;最佳生根最适培养基为:MS+NAA0.5mg/L。
关键词:小叶丁香;组织培养
Tissue Culture of Sytinga microphyla
Leng Qiang1,Zhang Zhu2
(1.Hailin City Landscape Management center,Hailin,Heilongjiang 157100;2.Journal of Daqing Medical Colege)
Abstract:Took the stem and leaf of Sytinga microphylaas explants for tissue culture.The explants were
sterilized with 0.1% Mercuric chloride and 65%sodium hypochlorite respectively.Then the sterilized ex-
plants were subjected to different culture media for dedifferentiation to observe different effects on promo-
ting axilary bud growth.Then root growth cultivation was carried out on the axilary buds.The results
showed as below:in 0.1% Mercuric chloride the optimum time for sterilization of stem and leaf were both
30s;But in 65%sodium hypochlorite the best time for sterilization were 2min and 1min separately.The
best media for dedifferentiation is MS+NAA2mg/L+6-BA2mg/L.The best media to promote the
growth of axilary bud is MS+6-BA2mg/L.The best media for root growth is MS+NAA0.5mg/L.
Key words:Sytinga microphyla;Tissue culture
  丁香常用的繁殖方法有播种、嫁接和扦插等,但由
于播种繁殖发芽率低,嫁接繁殖成活率较低,扦插繁殖
的繁殖系数小、周期长,均难以满足市场对种苗的需
求。本文旨在探讨通过植物组织培养方法获得小叶丁
香的种苗以供园林绿化使用,也为同种植物的组织培
养提供一定的理论和实践依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
取小叶丁香的茎段、叶片为外植体进行组织培养,
小叶丁香母株取于牡丹江师范学院植物园。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体的灭菌
取小叶丁香的茎和叶片流水冲洗1h,在0.1%升
汞中灭菌30s、1min、2min,或在65%次氯酸钠中灭菌
1min、2min、3min,灭菌后将小叶丁香的茎(带腋芽部
分)剪成1~2cm的段状插入不同的培养基中,将叶片
剪成(1×1)cm2 大小,平放于不同的脱分化 MS培养
基中培养。
1.2.2 外植体的脱分化培养
小叶丁香的叶片消毒后,用无菌水冲洗5~6次,
无菌吸水纸吸干表面水分,切成(1×1)cm2,分别接入
以下培养基中,每种培养基接外植体50个。
A:MS+6-BA4mg/L+NAA2mg/L
B:MS+6-BA3mg/L+NAA2mg/L
C:MS+6-BA2.5mg/L+NAA2mg/L
D:MS+6-BA2mg/L+NAA2mg/L
E:MS+6-BA1.5mg/L+NAA2mg/L
F:MS+6-BA1mg/L+NAA2mg/L
G:MS+6-BA0.5mg/L+NAA2mg/L
1.2.3 小叶丁香腋芽的促生
取小叶丁香的茎段在65%的次氯酸钠中浸泡
2min灭菌之后,用无菌水冲洗5~6次,然后用无菌吸
水纸吸干表面水分,切成1~2cm的茎段然后分别接入
含有不同浓度6-BA的 MS培养基中(具体浓度见表
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第1期(总第116期) 中 国 林 副 特 产 No.1(GSNO.116)
2012年2月 Forest By-Product and Speciality in China  Feb.2012
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DOI:10.13268/j.cnki.fbsic.2012.01.025
4),并定时观察。
1.2.4 生根培养
在无菌实验台上将上一步小叶丁香茎段所促生出
的腋芽切下,分别接入含有不同浓度NAA的 MS培养
基中进行生根培养(具体浓度见表5),并定时观察。
1.2.5 培养条件
光培养25℃﹑6000lx、14h光照/10h黑暗。
2 结果与分析
2.1 不同消毒液及不同消毒时间对小叶丁香外植体
的影响
为筛选出最佳的灭菌方法,我们采用不同灭菌剂
及不同灭菌时间对小叶丁香外植体进行灭菌。试验结
果表明:茎和叶片在0.1%的升汞中灭菌30s时其生长
情况最佳,长菌率为0,灭菌1min和2min时,虽然长菌
率也为0,但是会引起外植体的死亡;茎在65%的次氯
酸钠中灭菌2min时,外植体的灭菌效果最好,叶片在
次氯酸钠中的最佳灭菌时间为1min。因为升汞对外
植体的毒害情况比次氯酸钠更严重(见表1、表2),因
此茎段的最佳灭菌条件为次氯酸钠灭菌2min,叶片最
佳灭菌条件为次氯酸钠灭菌1min。
表1 以0.1%升汞为消毒液对小叶丁香
外植体最佳消毒时间的筛选
灭菌时间
茎段总数
/个
茎段生长情况
叶片总数
/个
叶片生长状况
30s 50 未长菌 50 未长菌
1min  50 未长菌但54%死亡 50 未长菌但60%死亡
2min  50 未长菌但全部死亡 50 未长菌但全部死亡
表2 以65%的次氯酸钠为消毒液对小叶丁香
外植体最佳消毒时间的筛选
消毒时间
茎段总数
/个
茎段生长情况
叶片总数
/个
叶片生长状况
1min  50 全部长菌 50 未长菌,生长良好
2min  50 未长菌,生长良好 50 未长菌但34%死亡
3min  50 未长菌但20%死亡 50 全部死亡
2.2 最佳脱分化培养基的筛选
取小叶丁香的叶片在65%次氯酸钠中灭菌1min,
无菌水冲洗5~6次,然后用无菌吸水纸吸干表面水
分,切成(1×1)cm2 大小,分别接入不同的脱分化培养
基中培养,每种培养基接种30片。试验结果表明:随
着6-BA的浓度递减,脱分化率有先增加后减少的趋
势,其中A、F、G号培养基中,外植体均没有脱分化,说
明6-BA浓度过高或过低都会影响外植体的脱分化;在
D号培养基中 (MS+6-BA2mg/L+NAA2mg/L)外植
体的脱分化率最高为13.3%。总体来看外植体的脱
分化率较低,而且出现了褐化现象。褐化现象受很多
因素的影响,例如:外植体的基因型、生理状态、大小、
种类,光照等等[1-2]。由表3可见,不同的激素浓度对
外植体褐化的影响程度不同,其中A、F、G号培养基上
外植体褐化最严重,全部外植体均发生褐化。
表3 培养基对小叶丁香叶片脱分化的影响
培养基
类型
叶片总数
/个
脱分化数
/个
未脱分化数
/个
生长情况
脱分化率
/%
A  30  0  30 全部褐化 0
B  30  1  29 部分褐化 3.3
C  30  3  27 部分褐化 10
D  30  4  26 部分褐化 13.3
E  30  2  28 部分褐化 6.6
F  30  0  30 全部褐化 0
G  30  0  30 全部褐化 0
2.3 小叶丁香茎段最佳腋芽促生培养基的筛选
取小叶丁香的茎在65%的次氯酸钠中浸泡2min
灭菌后,用无菌水冲洗5~6次,然后用无菌吸水纸吸
干表面水分,切成带腋芽的约1~2cm长的茎段,分别
接入以下培养基中培养,试验结果表明:随着6-BA浓
度的增加,不仅促生的腋芽数有所增加而且促生腋芽
的时间有所缩短,说明6-BA有诱导促生腋芽的良好作
用,但这一浓度高于2mg/L时出现下降趋势,确定以
茎段促生腋芽的最适培养基为 MS+6-BA2mg/L。
表4 不同培养基对茎段生腋芽的影响
培养
基号
6-BA浓度/
(mg·L-1)
生芽时间
/d
接种株数
/株
生芽株数
/株
生芽率
/%
1  0.5  22  30  6  20.0
2  1.0  20  30  7  23.3
3  1.5  18  30  9  30.0
4  2.0  15  30  15  50.0
5  2.5  16  30  10  33.3
2.4 最适生根培养基的筛选
在超净工作台上将由小叶丁香茎段促生得到腋芽
切下,接入含有不同浓度NAA的 MS培养基中进行生
根培养,并定时观察。试验结果如下:随着 NAA浓度
的增加,腋芽生根率增加而且发根时间缩短,说明
NAA的确有诱导生根的良好作用,当 NAA浓度高于
0.5mg/L时,生根率呈现下降趋势。试验确定腋芽生
根最适培养基为 MS+NAA0.5mg/L。
表5 不同浓度NAA的 MS培养基对腋芽生根的影响
培养
基号
NAA浓度
/(mg·L-1)
发根时间
/d
接种株数
/株
生根株数
/株
生根率
/%
1  0.1  13  30  10  33.3
2  0.3  12  30  11  36.7
3  0.5  10  30  18  60.0
4  1.0  15  30  14  46.7
5  1.5  15  30  7  23.3
3 结论
3.1 试验结果表明:茎段在0.1%的升汞中浸泡30s后
生长情况最佳,长菌率为0%如果时间太长会发生组织
的损伤从而引起褐化,而在65%的次氯酸钠中浸泡
2min其灭菌最彻底;叶片在0.1%的升汞中浸泡30s后
生长情况最佳,在65%的次氯酸钠中浸泡1min生长情
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2012年 冷强等:小叶丁香的组织培养 第1期
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新型五色草选育及应用技术研究初报
贾兰虹,张雪岩
(黑龙江省农科院园艺分院,哈尔滨 150069)
摘 要:新型五色草花坛从景天科植物中选出,在自然低温条件下和干旱季节中试验,比老五色草抗寒
抗旱,更具有应用价值。用于花坛造型显现出红、绿、黄、粉和紫粉五种色颜动态变化,不同于老五色草
的静态拼色,而且,整体越冬完好。母株冬储和繁殖均在露地进行,改变了老五色草在加温温室内越冬
和需要在保护地繁殖的传统方式,花坛模纹时间提前1个月,观赏期延长60d,一年建植多年享用。新
型五色草可取代现行的老五色草,在寒冷地区广泛应用。
关键词:新型五色草;越冬;抗旱;变色;多年享用
Preliminary Study on Latest Type of Five Colors Grass Flowerplot
Jia Lanhong,Zhang Xueyan
(Horticaltural Sub-Academy,Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150069)
Abstract:The latest type of five colors grass flowerplot was selected from the varieties of Crassulaceae.
The drought resistance of latest type of five colors grass flowerplot is better than the five colors grass
flowerplot in the low temperature condition and the dry season.There are better application value.It is
different from the static color matching of the five colors grass flowerplot.It could be showed dynamic
changes of five colors grass flowerplot which are red,green,yelow,pink and purple-pink.It could be o-
ver winter comepletely.Stock plants are stored in winter and cultivated in open field.It changes the tra-
ditional way which need heat to be over winter in the greenhouse and cultivate in protected field.The mo-
saic flowerplot could plant one month ahead of time compared with the five colors grass flowerplot.The
ornamental period could be extended 60days.The latest type five colors grass flowerplot could replace
the five colors grass flowerplot and apply in cold area widely.
Key words:The latest type of five colors grass flowerplot;Over-winter;Drought resistance;Discolora-
tion;Application for years
  五色草花坛多样的造型和艺术雕塑作为特色园艺 在园林绿化中有着极高的地位,常作为大型庆典、
櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐
世博
况最佳;由于升汞对外植体的毒害比次氯酸钠更严重,
所以我们在对外植体灭菌时一般使用次氯酸钠;
3.2 小叶丁香叶片脱分化最佳培养基为 MS+
NAA2mg/L+6-BA2mg/L;
3.3 小叶丁香茎段生腋芽最佳培养基为 MS+6-
BA2mg/L;
3.4 小叶丁香腋芽生根最佳培养基为 MS+NAA 0.5
mg/L。
图1 小叶丁香叶片愈伤组织的发生情况图
图2 小叶丁香腋芽的生根情况
参 考 文 献
[1] 曾镭,刘燕.植物组织培养中褐化问题的研究进展[J].
安徽农学通报,2007,13(14):49-50.
[2] 王栋,买合木提·克衣木,玉永雄,等.植物组织培养
中的褐化现象及其防止措施[J].黑龙江农业科学,
2008(1):7-10.
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第1期(总第116期) 中 国 林 副 特 产 No.1(GSNO.116)
2012年2月 Forest By-Product and Speciality in China  Feb.2012
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