全 文 ：表 1　共有峰相对保留时间
Tab 1　Relative retention time of common peaks
峰号 相对保留时间/min样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 样品 6 样品 7 样品 8 样品 9 样品 10 RSD/ %
1 0.3291 0.3272 0.3263 0.3275 0.3164 0.3262 0.3171 0.3123 0.3110 0.3254 0.021
2 0.3489 0.3279 0.3274 0.3382 0.3272 0.3491 0.3382 0.3448 0.3481 0.3490 0.028
3 0.4913 0.4872 0.4895 0.4876 0.4897 0.4847 0.4852 0.4824 0.4892 0.4891 0.006
4 0.5543 0.5532 0.5526 0.5561 0.5417 0.5637 0.5562 0.5457 0.5219 0.5453 0.021
5 0.6223 0.6231 0.6263 0.6233 0.6224 0.6267 0.6230 0.6361 0.6225 0.6365 0.009
6 0.7463 0.7486 0.7474 0.7445 0.7437 0.7318 0.7441 0.7493 0.7421 0.7931 0.007
7 0.8547 0.8169 0.8421 0.8403 0.8024 0.8263 0.8127 0.8197 0.8163 0.8594 0.023
8(S) 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 0
9 1.0364 1.0371 1.0421 1.0384 1.0473 1.0213 1.0198 1.0168 1.0257 1.0136 0.011
10 1.3862 1.3876 1.3947 1.3847 1.3873 1.3854 1.3881 1.3917 1.3848 1.3821 0.003
11 2.3836 2.3857 2.3712 2.3673 2.3727 2.3768 2.3648 2.3625 2.3583 2.3526 0.004
12 2.6835 2.5473 2.6012 2.5864 2.5833 2.5927 2.5896 2.5821 2.5726 2.5783 0.014
表 2　共有峰相对峰面积
Tab 2　Relative a rea of common peaks
峰号 相对峰面积样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 样品 6 样品 7 样品 8 样品 9 样品 10
1 0.3117 0.3324 0.3312 0.3176 0.3244 0.3365 0.3285 0.3168 0.3328 0.3264
2 0.4013 0.4124 0.4202 0.4046 0.4187 0.4534 0.4437 0.4387 0.4432 0.4325
3 0.1554 0.1422 0.1146 0.1486 0.1124 0.1398 0.1602 0.1453 0.1286 0.1542
4 0.1326 0.1314 0.1301 0.1307 0.1282 0.1826 0.1524 0.1326 0.1312 0.1863
5 0.1427 0.1423 0.1221 0.1416 0.1526 0.1381 0.1409 0.1618 0.1573 0.1552
6 0.1451 0.1521 0.1412 0.2107 0.1821 0.1624 0.2068 0.1446 0.1973 0.1984
7 0.3526 0.3537 0.3528 0.3211 0.3531 0.3928 0.3426 0.3413 0.3208 0.3452
8(S) 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
9 0.4813 0.4281 0.4376 0.4253 0.4184 0.4517 0.4431 0.4456 0.4523 0.4647
10 0.1571 0.1556 0.1564 0.1587 0.1557 0.1624 0.1573 0.1581 0.1568 0.1583
11 0.3215 0.2713 0.3112 0.2832 0.3854 0.3632 0.3417 0.3824 0.3367 0.3381
12 0.1823 0.1711 0.1762 0.1922 0.1981 0.1934 0.1972 0.1612 0.1763 0.1748
效 、实现中药现代化的关键[ 4] 。长期以来 ,中药及其
复方因质量难以控制 、成分较为复杂 、客观指标不
明 、重现性差等原因而难以在国际市场上流通 。美
国 FDA(食品药品监督管理局)已经明确表示 ,如果
中药有了特征图谱 ,达到了质量可控的基本要求 ,美
国就将为中药及中成药敞开大门[ 5] 。因此 ,本实验
建立的特征图谱 ,专属性强 ,重复性好 ,可有效地鉴
别和评价舒咳糖浆的质量优劣 ,显示产品质量稳定
和批间产品质量的一致 ,增强舒咳糖浆的市场竞争
力 ,为其进入国际市场打下基础。
参考文献:
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制标准研究[ J] .医药导报 , 2006 , 25(9):955-957.
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[ 4] 　陈怡 ,罗顺德 ,宋金春 ,等.莲子心中酚性生物碱 3种主要成分
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[收稿日期] 2008-03-06
[ 基金项目] 湖北省自然科学基金课题(编号:2004ABA242)　[ 作者简介] 卢金清 ,男 ,学士 , 教授 ,电话:027-68890109 , 13871312439, E-m ail:
l jq59169@sohu.com
神农香菊药材的高效液相色谱特征图谱
卢金清 ,詹晓莲 ,徐玉婷 ,万威 ,曹儒宾 ,吴丹慧 ,何雪峰 ,胡晓燕　(湖北中医学院 , 湖北 武汉 430061)
[ 摘要] 　目的:建立神农香菊药材黄酮类成分 HPLC 特征图谱。方法:采用高效液相色谱法 , 色谱柱为 Dionex-Acclaim 120
C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH 2.5)-甲醇(梯度洗脱);流速 0.5 m L·min -1 ;柱温 35 ℃;检测波
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长 350 nm。结果:建立了神农香菊药材黄酮类成分 H PLC 特征图谱 ,标定了 17 个共有特征峰 ,方法学考察符合特征图谱技术
要求。结论:本方法稳定 , 可靠 ,精密度高 , 重复性好 ,可为神农香菊药材质量标准的制定提供科学依据。
[ 关键词] 　神农香菊;高效液相色谱;特征图谱
[中图分类号] R931.5 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2009)03-0182-04
Study on the HPLC specific chromatogram of flavonoids in dendranthema indicum
LU Jin-qing ,ZHAN Xiao-lian ,XU Yu-ting ,WAN Wei ,CAO Ru-bin ,WU Dan-hui , HE Xue-feng , HU Xiao-
yan (Hubei Co lleg e of T raditiona l Chinese Medicine , H ubei Wuhan 430061 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish the HPLC specific chromatog ram o f flavonoids f rom Dendranthema indicum .METH-
ODS　The HPLC conditions w ith Dionex-Acclaim 120 C18 co lumn(250 mm×4.6 mm , 5 μm)was used , the mobile phase w as
composed of me thanol and PBS(2.5)w ith g r adient elution;flow rate was 0.5 mL·min -1 ;column tempera ture wa s 35 ℃;the
detectiv e w aveleng th was 350 nm;recording time w as 140 min.RESULTS　17 common cha racteristic peaks we re taken as spe-
cific peaks , the precision w as in acco rdance with the requirement.CONCLUSION　The method is stable , reliable , precision and
provides a scientific basis for the quality standard of Dend ranthema indicum .
KEY WORDS:Dendranthema indicum;H PLC;specific chromatog ram
　　神农香菊为菊科植物神农香菊[ Dendranthema
indicum(L.)Des M on1.var.aromaticum Q .H .Liu
e t S.F.Zhang]的干燥头状花序 。具有疏风清热 、平
肝明目 、散风降压的功效[ 1-2] ,其主要成分为黄酮类
化合物[ 3] 。文献报道尚未见神农香菊化学成分的特
征图谱研究。本实验采用高效液相色谱法 ,建立了
神农香菊药材黄酮类成分的特征图谱。经过系统适
用性试验和方法学考察 ,发现神农香菊的特征图谱
具有系统性 、全面性和特征性的特点 ,可以有效地鉴
别神农香菊药材 ,为全面评价和控制神农香菊的质
量提供了科学依据。
1　材料
Dionex-Ultimate 3000 液相色谱仪;木犀草素
对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号 111520-
200201);甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 ,水为
注射用水;神农香菊共计 10个样品 ,其采集时间或
采集地点均有不同 ,由湖北中医学院中药鉴定教研
室陈科力教授鉴定 ,见表 1。图 3中药材来源于表 1
中的 1号样品。
表 1　不同来源的神农香菊样品
Tab 1　The list of Dendranthema indicum
样品 产地 采集时间 编号
1 神农架板仓 2007年 11月 070001
2 神农架板仓 2007年 12月 070002
3 神农架八角庙 2007年 11月 070003
4 神农架八角庙 2007年 12月 070004
5 巴东绿葱坡 2007年 11月 070005
6 巴东绿葱坡 2007年 12月 070006
7 神农架燕子垭 2002年 10月 021001
8 神农架燕子垭 2003年 11月 031102
9 神农架天门垭 2004年 10月 041001
10 神农架天门垭 2005年 11月 051102
2　方法
2.1　色谱条件的选择　梯度洗脱程序:以磷酸缓冲
盐水溶液(pH 2.5)为流动相 A ,以甲醇为流动相 B ,
线性梯度洗脱程序为:0 ～ 20 min , 38% B;20 ～ 35
min ,38%～ 48%B;35 ～ 90 min , 48% B;90 ～ 120
min , 48%～ 100%B;120 ～ 140 min , 100%B。流
速:0.5 mL·min-1 ;柱温:35 ℃;检测波长:350 nm 。
2.2　对照品溶液的制备　精密称取木犀草素对照
品适量 ,加甲醇制成每 1 ml含1.0 mg 的溶液 ,即得
对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　取各样品粉末(过 2 号
筛)1.0 g ,精密称定 ,精密加入甲醇 20 mL ,称定质
量 ,超声提取 30 min ,放冷 ,再称定 ,用甲醇补足减
失的质量 ,过滤 ,滤液置蒸发皿中蒸干 ,残渣用甲醇
溶解并转移至 50 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,
滤过 ,取续滤液 ,即得供试品溶液 。
2.4　测定方法　分别精密吸取对照品溶液和供试
品溶液各 5μL ,注入液相色谱仪 ,按“2.1”项下色谱
条件记录 140 min的色谱图 ,供试品色谱图中 ,以木
犀草素色谱峰(S)的保留时间和峰面积为 1 ,计算各
特征峰的相对保留时间和相对峰面积比值 。图 1为
对照品木犀草素的特征图谱 ,图 2为 10批神农香菊
的特征图谱。
3　方法学考察
3.1　空白试验　吸取空白溶液和供试品溶液各 5
μL ,注入液相色谱仪 ,记录运行 160 min的色谱图。
发现 140 min后均无峰出现 ,因此运行时间与分析
时间都定为 140 min。
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3.2　精密度试验　精密吸取同一批供试品溶液 5
μL ,按“2.1”项下色谱条件连续进样 5次 ,分别对共
有峰的相对保留时间和峰面积比值进行考察 。结果
表明 ,各共有峰的相对保留时间 RSD<3%;峰面积
比值 RSD<3%,表明仪器精密度良好。
3.3　稳定性试验　取同一供试品溶液按“2.1”项下
色谱条件 ,分别于 0 ,3 ,6 ,9 , 12 ,24 h进行检测 ,考察
共有峰的相对保留时间和峰面积比值 ,结果表明 ,各
共有峰的相对保留时间 RSD <3%;峰面积比值
RSD<3%,表明供试品溶液在 24 h内基本稳定 。
3.4　重复性试验　取同一批次供试品粉末(过二号
筛)5份 ,按“ 2.3”项下的方法制备供试品溶液 , 按
“2.1”项下色谱条件进行测定 ,结果表明 ,各共有峰
的相对保留时间 RSD <3%;峰面积比值 RSD <
3%,符合特征图谱分析要求。
4　样品的测定和对照特征图谱的建立
按供试品溶液的测定方法操作 ,测定图谱 ,结果
见表 2 ,3。
通过对 10批神农香菊药材的 HPLC-FPS的比
较 ,建立神农香菊药材对照特征图谱 ,各样品特征图
谱特征峰与对照特征图谱特征峰有良好的重复性 ,
神农香菊特征图谱应有 17 个特征峰 。以木犀草素
峰作为参照 ,指定其α值为1.000 ,各特征峰相对保
留时间和特征峰峰面积自然对数相对比值 ,见表 2 ,
3。建立的神农香菊图谱系统性好 、特征性强 ,见图
3。
图 3　神农香菊对照药材图谱
Fig 3　HPLC chromatogram of Dendran thema ind icum
　　根据药典委员会颁布的“中药色谱特征图谱相
似度评价系统 2004A 版”计算了 10 批药材的相似
度 ,结果分别为0.972 , 0.938 , 0.980 , 0.966 , 0.942 ,
0.973 ,0.991 ,0.995 ,0.979 ,0.958。
5　讨论
5.1　色谱柱的选择　曾使用过 Diamasil(200 mm
×4.6 mm , 5 μm)、A gilent Zobax SB-C18(250 mm
×3.0 mm , 5 μm)、Turner KromasilTM(250 mm ×
4.6 mm ,5 μm)及 Dionex-Acclaim 120 C18(250 mm
×4.6 mm , 5 μm)最后根据色谱峰的分离效果及稳
定性等因素综合考虑 , 选择使用 Dionex-A cclaim
120 C18(250 mm×4.6 mm ,5 μm)色谱柱 。
5.2　流动相的选择　流动相的选择曾使用过甲醇-
水 、乙腈-水 、甲醇-0.4%磷酸流动相进行等度及梯
度洗脱 ,结果木犀草素的色谱峰对称性差且各色谱
峰分离度不好 ,最后根据分离情况和色谱峰的对称
表 2　神农香菊共有特征指纹峰相对保留时间
Tab 2　Relative retention value o f common peaks of Dend ranthema indicum
编号 相对保留时间/min峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6(S) 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 峰 11 峰 12 峰 13 峰 14 峰 15 峰 16 峰 17
1 0.130 0.330 0.355 0.417 0.536 1.000 1.406 1.484 1.519 1.699 1.732 1.773 1.818 1.853 1.885 1.909 2.008
2 0.134 0.348 0.373 0.431 0.543 1.000 1.407 1.484 1.515 1.688 1.720 1.761 1.805 1.840 1.872 1.895 1.994
3 0.130 0.337 0.363 0.423 0.538 1.000 1.411 1.487 1.514 1.677 1.709 1.749 1.792 1.827 1.858 1.882 1.980
4 0.130 0.335 0.361 0.421 0.537 1.000 1.408 1.484 1.511 1.676 1.707 1.748 1.791 1.826 1.857 1.881 1.978
5 0.132 0.341 0.368 0.425 0.541 1.000 1.409 1.485 1.512 1.680 1.712 1.753 1.796 1.830 1.862 1.886 1.984
6 0.133 0.349 0.376 0.432 0.543 1.000 1.409 1.484 1.508 1.667 1.699 1.739 1.781 1.816 1.847 1.870 1.968
7 0.133 0.348 0.375 0.432 0.544 1.000 1.408 1.483 1.510 1.677 1.709 1.749 1.792 1.827 1.858 1.882 1.980
8 0.133 0.347 0.374 0.430 0.543 1.000 1.409 1.484 1.509 1.672 1.703 1.743 1.786 1.821 1.852 1.875 1.973
9 0.130 0.336 0.362 0.421 0.539 1.000 1.410 1.487 1.515 1.683 1.715 1.755 1.798 1.833 1.865 1.889 1.987
10 0.132 0.339 0.366 0.425 0.541 1.000 1.406 1.481 1.512 1.686 1.718 1.759 1.803 1.838 1.870 1.894 1.992
x 0.132 0.341 0.367 0.426 0.541 1.000 1.408 1.484 1.513 1.681 1.712 1.753 1.796 1.831 1.863 1.886 1.986
RSD/ % 1.1 1.9 1.8 1.2 0.5 0 0.1 0.1 0.2 0.5 0.5 0.5 0.6 0.5 0.6 0.6 0.5
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表 3　神农香菊共有特征峰相对峰面积
Tab 3　Relative peak areas of common peaks o f Dendranthema ind icum
编号 相对峰峰面积峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6(s) 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 峰 11 峰 12 峰 13 峰 14 峰 15 峰 16 峰 17
1 0.030 0.118 0.070 0.077 0.034 1.000 0.130 0.089 0.196 0.040 0.033 0.176 0.036 0.042 0.091 0.036 0.057
2 0.032 0.119 0.071 0.077 0.032 1.000 0.129 0.087 0.197 0.041 0.033 0.179 0.037 0.042 0.093 0.036 0.058
3 0.029 0.111 0.069 0.081 0.033 1.000 0.133 0.085 0.197 0.040 0.032 0.176 0.035 0.040 0.088 0.034 0.056
4 0.029 0.115 0.069 0.080 0.031 1.000 0.139 0.085 0.191 0.041 0.033 0.178 0.036 0.040 0.089 0.035 0.058
5 0.030 0.119 0.070 0.082 0.032 1.000 0.138 0.089 0.198 0.041 0.034 0.180 0.036 0.039 0.092 0.035 0.057
6 0.030 0.114 0.065 0.082 0.033 1.000 0.136 0.090 0.203 0.041 0.034 0.178 0.036 0.040 0.090 0.034 0.057
7 0.030 0.120 0.072 0.083 0.034 1.000 0.129 0.088 0.197 0.041 0.034 0.179 0.037 0.041 0.095 0.036 0.059
8 0.029 0.115 0.069 0.083 0.033 1.000 0.134 0.092 0.202 0.040 0.034 0.181 0.037 0.042 0.093 0.036 0.060
9 0.030 0.117 0.070 0.081 0.032 1.000 0.135 0.092 0.205 0.042 0.034 0.178 0.037 0.041 0.094 0.036 0.059
10 0.030 0.119 0.070 0.084 0.033 1.000 0.130 0.085 0.201 0.041 0.034 0.180 0.037 0.042 0.092 0.036 0.057
x 0.03 0.117 0.070 0.081 0.033 1.000 0.133 0.088 0.199 0.041 0.034 0.179 0.036 0.041 0.092 0.035 0.058
RSD/ % 2.8 2.3 2.5 2.8 2.8 0 2.6 2.9 1.9 1.5 2.0 0.9 1.8 2.6 2.3 2.3 2.0
性选择以磷酸缓冲盐水溶液(pH 2.5)为流动相 A ,
以甲醇为流动相 B ,进行梯度洗脱效果最佳。
5.3　10批药材特征图谱相似度评价　10批不同产
地神农香菊药材样品的特征图谱面貌基本一致 ,其
共有峰面积总面积大于总峰面积的 90%, 10批样品
共有特征指纹峰相对保留时间和相对峰面积的
RSD值均小于 3 ,且由各产地神农香菊特征图谱相
似度性良好(r>0.90),反映了药材的同源性 ,可以
用来作定性鉴别。本方法稳定 、可靠 、重现性好 ,可
为神农香菊原药材及其制剂质量标准的拟定提供参
考依据 ,也为含神农香菊原药材的中药方剂物质基
础研究与配伍规律提供分析方法 。
参考文献:
[ 1] 　刘启宏 , 张树藩 , 神农架菊属一新变种[ J] .武汉植物研究 ,
1983 , 1(2):237-237.
[ 2] 　石世贵 ,药用植物新资源—神农香菊[ J] .植物杂志 , 1994 , 3:
20-21.
[ 3] 　袭复俊 ,王国亮 ,袁晓 ,等.神农香菊花的化学成分研究[ J] .天
然产物研究与开发 , 1994 , 3:35-37.
[收稿日期] 2008-06-24
[ 基金项目] 河南省教育厅自然科学基金资助项目(编号:2007150009)　[ 作者简介] 郝巧艳 ,女 ,硕士研究生 　[ 通讯作者] 王金中 ,男 ,副教
授 ,电话:13683786455 , E-mai l:w jz@henu.edu.cn
阻抑动力学荧光法测定头孢哌酮钠的含量
郝巧艳 ,王金中 ,张远馥 ,王淑敏　(河南大学化学化工学院 , 河南 开封 475001)
[ 摘要] 　目的:建立测定药物制剂中头孢哌酮钠含量的新方法。方法:在弱酸性介质中 , 头孢哌酮钠能够阻抑过硫酸钾氧化
荧光桃红的荧光淬灭反应。结果:头孢哌酮钠的质量浓度与荧光强度的变化在1.0×10-6 ～ 1.3×10-5 g·mL -1范围内呈良好
线性关系(r=0.995 0), 对1.0×10-5 g·m L-1的头孢哌酮钠进行 11 次平行测定 , RSD 为2.32%, 方法的检出限为7.0×10-8 g·
mL-1 。结论:该法简便 、快速 , 结果可靠 ,可应用于药物制剂中头孢哌酮钠含量的测定。
[ 关键词] 　阻抑;动力学荧光法;头孢哌酮钠;荧光桃红
[中图分类号] O657.39;R971.1　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2009)03-0185-03
Inhibitory kinetic fluorimetric determination of cefoperazone sodium
HAO Qiao-yan , WANG Jin-zhong , ZHANG Yuan-fu ,WANG Shu-min (Co lleg e of Chemistry and Chemical En-
g ineering , H enan Unive rsity , H enan Kaifeng 475001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a method to determine cefoper azone sodium in tro ches w ith fluo rescence spect ropho-
tometry.METHODS　It w as based on the inhibito ry effec t o f cefope razone sodium on the r eac tion of K2 S2O8 ox idation o f be r-
berine in acid buffe r solution.RESULTS　The linear r ange o f the de te rmination w as 1.0×10-6 ～ 1.3×10 -5 g·mL-1 .The de-
tection limit for cefope razone sodium w as 7.0×10 -8 g·mL -1 and the relative standard deviation w as 2.32%.CONCLUSION　
This method is simple , rapid , sensitive and can be used fo r the determination of cefoperazone sodium in pharmaceutical fo rmu-
·185·中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 3期 Chin H osp Pharm J , 2009 Feb , Vol 29 , No.03