全 文 ：延边大学医学学报　２０１４年６月　第３７卷　第２期
［收稿日期］　２０１４－０５－１０
［作者简介］　李香善（１９６３—），女（朝鲜族），副研究员，研究
方向为抗肿瘤药物的作用机制．
毛细管气象色谱法测定月见草油纳米乳中γ－亚麻酸的含量
李香善１，魏显苹２，金雪梅３
（１．延边大学附属医院 中心实验室；２．吉林大学第二医院 药剂科，吉林 长春１３００４１；３．延边大学附属医院 药剂科：吉林 延吉
１３３０００）
［摘要］　 ［目的］建立测定月见草油纳米乳中γ－亚麻酸含量的气相色谱方法．［方法］纳米乳破乳后进
行甲酯化，采用毛细管气相色谱法测定γ－亚麻酸甲酯含量，再将其换算为样品中γ－亚麻酸的含量．以水
杨酸甲酯为内标物，色谱柱为ＤＢ－ＷＡＸ毛细管柱，载气为氮气，检测器为ＦＩＤ．［结果］γ－亚麻酸甲酯在
质量浓度０．０４２　９６～０．４２９　６０ｇ／Ｌ范围内时与峰面积比值呈良好的线性关系，Ｒ２＝０．９９９　８（ｎ＝７）；平均
回收率为９６．９９％，ＲＳＤ 为０．９６％．［结论］毛细管气象色谱法可用于月见草油纳米乳中γ－亚麻酸含量
的测定．
［关键词］　月见草油纳米乳；γ－亚麻酸；气相色谱法；内标法
［中图分类号］　Ｒ２８４　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　１０００－１８２４（２０１４）０２－０１２３－０３
Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆγ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｅｖｅｎｉｎｇ　ｐｒｉｍｒｏｓｅ　ｏｉｌ
ｎａｎｏ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｂｙ　ｃａｐｉｌａｒｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＬＩ　Ｘｉａｎｇ－ｓｈａｎ１，ＷＥＩ　Ｘｉａｎ－ｐｉｎｇ２，ＪＩＮ　Ｘｕｅ－ｍｅｉ　３
（１．Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ａｆｆｉｌａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒ－
ｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００４１，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｆｆｉｌａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｙａｎｊｉ　１３３０００，Ｊｉ－
ｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥＴｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ）ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ
γ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｖｅｎｉｎｇ　ｐｒｉｍｒｏｓｅ　ｏｉｌ　ｎａｎｏ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｎａｎｏ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｗａｓ
ｄｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｅｄ　ａｎｄ　ｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆγ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ
ｃａｐｉｌａｒｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄ　ｉｔ　ｗａｓ　ｃｏｎｖｅｒｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆγ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ　ａｃｉｄ．Ｔｈｅ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ
ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｗａｓ　ａｓ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ＤＢ　ＷＡＸ　ｃａｐｉｌａｒｙ　ｃｏｌ－
ｕｍｎ，ｔｈｅ　ｃａｒｒｉｅｒ　ｇａｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ｗａｓ　ＦＩＤ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
γ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｗｉｔｈｉｎ　０．０４２　９６　ｔｏ　０．４２９　６０　ｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｉｎ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ
ｒａｔｉｏｎ（Ｒ２＝０．９９９　８，ｎ＝７），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９６．９９％，ａｎｄ　ＲＳＤ　ｗａｓ　０．９６％．
ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＴｈｅ　ｃａｐｉｌａｒｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆγ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ
ａｃｉｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｅｖｅｎｉｎｇ　ｐｒｉｍｒｏｓｅ　ｏｉｌ　ｎａｎｏ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ；γ－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ　ａｃｉｄ；ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ
ｍｅｔｈｏｄ
　　月见草油是从月见草（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ　ｂｉｅｎｎｉｓ．Ｌ）成
熟的种子中提取的芳香油，具有降血脂、降血糖、抗
氧化及抗炎等作用．它的主要有效成分 !－亚麻酸是
人体内必需的脂肪酸，是合成前列腺素Ｅ１（ＰＧＥ１）
的前体，对多种肿瘤细胞如前列腺癌、乳腺癌、皮肤
癌等有显著的抑制增殖作用［１］．月见草油含有８０％
多的极不饱和脂肪酸（含较多的双键），因此容易与
空气中的氧气作用而氧化变质，为提高在制剂中的
稳定性和生物利用度，已将月见草油制备成纳米乳．
本实验建立了测定月见草油纳米乳中!－亚麻酸含量
的毛细管气相色谱方法，旨在为月见草油纳米乳的
研制和生产过程中的质量控制提供方法学依据．
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Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｊｕｎ．２０１４　Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．２
１　材料
１．１　仪器　ＭＰ－２００Ｂ型电子天平为上海精科天平
公司产品；ＦＡ２００４型分析天平为上海良平仪器仪
表有限公司产品；ＧＣ－１７Ａ气相色谱仪为日本岛津
产品；氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）为日本岛津产品；
ＤＢ－ＷＡＸ毛细管柱为３０ｍ×０．２５ｍｍ，０．２５μｍ；
ＬＧ１６－Ｂ高速台式离心机为北京雷勃尔离心机有限
公司产品；ＰＨＳ－３Ｃ型ｐＨ计为上海精密科学仪器有
限公司产品；ＫＱ２２００ＤＢ型数控超声清洗器为昆山
市超声仪器有限公司产品．
１．２　试剂　月见草油由吉林安图田野药用植物油
有限公司生产，批号为２０１２０３０１；γ－亚麻酸甲酯标
准品（ＵＦＡ－０１５Ｎ）、月见草油纳米乳及空白纳米乳均
为自制；水杨酸甲酯为沈阳市第五化学试剂有限公
司产品，分析纯；氢氧化钾为天津市光复精细化工研
究所产品，分析纯；甲醇为沈阳化学试剂厂产品，分
析纯；三氟化硼为沈阳化学试剂有限公司产品，分析
纯；正己烷为北京化工厂产品，分析纯；氯化钠为北
京化工厂产品，分析纯；实验用水为三次蒸馏水；其
他液体试剂均为分析纯；固体试剂为化学纯．
２　方法与结果
２．１　溶液的配制
２．１．１　标准品溶液　精密称取γ－亚麻酸甲酯标准
品１００　ｍｇ，置于１０　ｍＬ容量瓶中，加正己烷溶解并
稀释至刻度，摇匀．精密吸取２．５　ｍＬ置于２５　ｍＬ容
量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品
溶液．
２．１．２　内标溶液　精密称取内标物水杨酸甲酯
１００ｍｇ，置于５０ｍＬ容量瓶中，加正己烷溶解并稀
释至刻度，摇匀．精密吸取４ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶
中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液．
２．１．３　供试品溶液　精密称取月见草油纳米乳
１ｇ，滴加２，３滴１％（体积分数）盐酸溶液，加入１ｇ
固体氯化钠，置于６５℃水浴中加热数分钟破乳［２］，
冷却至室温，用正己烷提取２次，２ｍＬ／次，合并２
次正己烷提取液于磨口三角瓶中，置于６５℃水浴上
使正己烷完全挥发．残渣中加入０．５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化
钾甲醇溶液３ｍＬ，连接冷凝管，在有氮气通入的状
态下，于６０℃±５℃加热回流１５ｍｉｎ．回流过程中
不断摇动磨口三角瓶，直至油珠消失．撤掉氮气，加
入３ｍＬ三氟化硼乙醚溶液，置于６０℃±５℃水浴
上回流２ｍｉｎ，冷却．准确加入２ｍＬ正己烷，加入３
ｍＬ饱和氯化钠溶液，涡旋振摇［３］．取出，离心，取上
清液用０．４５μｍ 微孔滤膜过滤，准确吸取续滤液
０．５　ｍＬ置于５　ｍＬ容量瓶中，精密加入内标溶液０．５
ｍＬ，用正己烷稀释至刻度，摇匀，即得．
２．１．４　阴性对照溶液　精密称取空白纳米乳１ｇ，
按照２．１．３项下供试品溶液的制备方法进行处理，
即得．
２．２　色谱条件　色谱柱为 ＤＢ－ＷＡＸ 毛细管柱
（３０ｍ×０．２５ｍｍ，０．２５μｍ）；检测器为ＦＩＤ；载气为
高纯氮气．进样口温度为２５０℃，检测器温度为
２６０℃，柱温为２１０℃，柱压为１３２　ｋＰａ，分流体积比
为３０∶１，进 样 量 为 １μＬ，进 柱 氮 气 流 量 为
１　ｍＬ／ｍｉｎ，载气氮气压力为１００　ｋＰａ，Ｈ２ 压力为
５０　ｋＰａ，空气压力为１００　ｋＰａ［４－５］．
２．３　专属性考察　分别精密吸取对照品溶液、内标
溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各１μＬ，在上述
色谱条件下进样，测定，结果见图１．由图１可见，阴
性对照溶液即空白纳米乳对γ－亚麻酸甲酯的测定
无干扰，月见草油纳米乳中γ－亚麻酸甲酯与其他组
分得到基线分离，分离度大于１．５．
２．４　线性关系考察　分别精密吸取质量浓度为
１．０７４ｇ／Ｌ的γ－亚麻酸甲酯对照品溶液０．４，０．６，
０．８，１．０，２．０，３．０，４．０　ｍＬ，分别置于１０　ｍＬ容量瓶
中，各精密加入内标溶液１　ｍＬ，用正己烷稀释至刻
度，摇匀．各吸取１μＬ，进样，测定．以γ－亚麻酸甲酯
与内标物水杨酸甲酯峰面积比（ｙ）为纵坐标，γ－亚麻
酸甲酯质量浓度（ｘ，ｇ／Ｌ）为横坐标进行线性回归，
得标准曲线方程：ｙ＝１４．８９５ｘ－０．０９１　６，Ｒ２ ＝
０．９９９　８（ｎ＝７）．结果表明，γ－亚麻酸甲酯在质量浓
度０．０４２　９６～０．４２９　６０　ｇ／Ｌ范围内与峰面积比值呈
良好的线性关系．
２．５　精密度考察　精密吸取质量浓度为１０７．４
ｍｇ／Ｌ的γ－亚麻酸甲酯对照品溶液１μＬ，连续６次
进样，测定，计算γ－亚麻酸甲酯与水杨酸甲酯峰面
积比值，结果表明ＲＳＤ 为１．８２％．
２．６　样品溶液的稳定性考察　精密称取月见草油
纳米乳１ｇ，按照２．１．３项下方法配制成供试品溶
液，分别于０，２，４，８，１２，２４ｈ进样，测定，计算γ－亚
麻酸甲酯与内标物水杨酸甲酯峰面积比值．结果显
示６个时间点峰面积比值的ＲＳＤ 为１．６６％，表明
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延边大学医学学报　２０１４年６月　第３７卷　第２期
供试品溶液在室温下２４　ｈ内稳定．
２．７　重现性考察　精密称取５份同一批月见草油
纳米乳各１ｇ，按照２．１．３项下方法配制成供试品溶
液，各取１μＬ进样，测定，计算峰面积比值．结果显
示５份样品峰面积比值的 ＲＳＤ 为０．８４％，表明本
法的重现性良好．
Ａ：γ－亚麻酸甲酯对照品溶液；Ｂ：水杨酸甲酯内标溶液；
Ｃ：月见草油纳米乳供试品溶液；Ｄ：阴性对照溶液．
图１　 毛细管气相色谱图
２．８　加样回收率试验　精密称取已知含量的月见
草油纳米乳，分别精密加入高、中、低剂量的γ－亚麻
酸甲酯标准品，按照２．１．３项下方法制备成供试品
溶液，吸取１μＬ进样，测定，计算回收率，结果见表
１．见平均回收率为９６．９９％，ＲＳＤ 为０．９６％，表明
本法准确．
２．９　测定月见草油纳米乳中γ－亚麻酸的含量　取
三批月见草油纳米乳样品，每批取３份，按照２．１．３
项下方法配制成供试品溶液，进样，测定，计算γ－亚
麻酸甲酯含量，再将其换算成γ－亚麻酸含量，即γ－亚
麻酸甲酯含量乘以０．９５２（γ－亚麻酸分子质量对
γ－亚麻酸甲酯分子质量之比），即得月见草油纳米乳
中γ－亚麻酸含量［６］，结果见表２．
表１　加样回收率试验结果（ｎ＝９）
序号
样品量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
实测量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
１　 ７．０５８　 ８．４７　 １５．２４２　 ９６．６２
２　 ７．０５８　 ８．３８　 １５．２１３　 ９７．３２
３　 ７．０５８　 ８．３２　 １５．０６２　 ９６．２０
４　 ７．０５８　 ６．９７　 １３．８４７　 ９７．４１
５　 ７．０５８　 ６．８９　 １３．８３１　 ９８．３０
６　 ７．０５８　 ７．０２　 １３．８１２　 ９６．２１
７　 ７．０５８　 ５．５８　 １２．３９５　 ９５．４８
８　 ７．０５８　 ５．４７　 １２．４２２　 ９８．０５
９　 ７．０５８　 ５．６２　 １２．５２７　 ９７．２９
９６．９９　 ０．９６
表２　样品的含量测定（ｎ＝３）
批号 平均质量分数／％ ＲＳＤ／％
１２０９０２　 ０．６６４　 １．４８
１２０９０３　 ０．６７１　 １．１４
１２０９０４　 ０．６７０　 ０．４８
３　讨论
月见草油纳米乳的破乳曾尝试过加酸、加碱法，
但效果不佳；改用先滴加盐酸溶液，再加入氯化钠方
法，发现效果较好．由于测定前对γ－亚麻酸进行了
甲酯化，实验数据是以γ－亚麻酸甲酯为对照品溶液
而得到的甲酯化后样品中γ－亚麻酸甲酯的含量，故
乘以０．９５２（γ－亚麻酸分子质量和γ－亚麻酸甲酯分
子质量之比），得到月见草油纳米乳中γ－亚麻酸
含量．
［参　考　文　献］
［１］　Ｓａｇａｒ　ＰＳ，Ｄａｓ　ＵＮ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｓ－ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ
ｆａｔｙ　ａｃｄｉｓ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ（ＨｅＬａ）ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ　ｉｎ
ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ　Ｌｅｕｋｏｔ　Ｅｓｅｎｔ　Ｆａｔｙ　Ａｃｉｄｓ，１９９５，
５３（４）：２８７－２９９．
［２］　黄龙娣，郑建明，姚维武，等．油脂中八种脂肪酸的分析
测定［Ｊ］．广州化工，２０１１，３９（４）：１０７－１０９．
［３］　薛红．月见草油微囊的制备与应用［Ｄ］．延边大学，
２００９．
［４］　乔飞．鸦胆子油微乳的处方研究及质量评价［Ｄ］．广东
药学院，２００９．
［５］　刘春静，陈月坤，刘荣荣，等．月见草油γ－亚麻酸绝对含
量的测定［Ｊ］．中国油脂，２０１２，３７（１）：６９－７１．
［６］　魏晓舒．气象色谱内标法测定月见草油软胶囊中γ－亚
麻酸的含量［Ｊ］．现代应用药学，１９９６，１３（１）：５５－５６．?
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