全 文 ：表 4 所示的实验现象验证了上述推断，提高
反应体系中可溶性淀粉的浓度和用量，并延长反
应时间 ，也能得到与预期一致的实验结果 ，即在
一定的酸、碱条件下，α-淀粉酶的活性受到了影
响 。 因此 ，对反应体系做出适当调整 ，用斐林试
剂作为检测试剂探究 pH 对 α-淀粉酶活性的影
响也是可行的。
综上所述， 在探究 pH 对 α-淀粉酶活性影响
时，可将 0.01 mol/L HCl 溶液和 0.01 mol/L NaOH
溶液设定为影响酶活性的酸碱环境条件， 检测试
剂为碘液时的反应体系为 ：3%淀粉溶液与 0.1%
α-淀粉酶溶液各 1 mL，25℃室温反应 5 min； 检测
试剂为斐林试剂时的反应体系为 ：6%淀粉溶液
2 mL、0.1% α-淀粉酶溶液 1 mL，25℃室温反应
10 min。 上述反应体系操作简便，实验现象均可达
到预期效果，学生能很快得出“pH 对 α-淀粉酶的
活性有影响”的正确结论，尤其是将反应温度设定
在 25℃室温条件下进行，省去了“水浴保温”的操
作环节，简化了实验装置。 因此，采用上述反应体
系实施“pH 对 α-淀粉酶活性的影响”的探究活动
是可行的。
主要参考文献
1 朱正威 ,赵占良 .生物·必修1·分子与细胞.第 2 版.北京 :人民
教育出版社 ,2007,83—84.
2 吴举宏 .关于“pH 对酶活性的影响”3 种实验方案的比较分
析 .生物学通报 ,2008,43(5):43—44.
3 王雯斌 ,解金辉 . “不同 pH 对酶活性的影响”实验方法的讨
论及改进 .中学生物教学 ,2008,(6):50.
4 章青.牛津版教材中探究 pH 对酶活性影响实验方法的启示 .
生物学教学 ,2010,35(12):45—46.
5 岳良举 . 关于淀粉酶催化淀粉的探讨 . 科学教育 ,2002,8(5):
57—58.
（E-mail：fzgzyyj@126.com）
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46 生 物 学 通 报 2014 年 第 49 卷 第 12 期
甘肃瑞香（Daphne tangutica Maxim）为瑞香科
（Daphnegenus）常绿灌木 ，别名陕甘瑞香 、唐古特
瑞香、小冬青等，高 0.6～1 m。 花外面浅紫色或紫
红色 ，内白色 ，芳香 ，常数朵成顶生头状花序 ，核
果卵状，红色，花期 4 月，果期 7 月 ［1］。 生于海拔
1 500～3 000 m 林缘山地，产于甘肃省的迭部、舟
曲、卓尼、天水、武都、文县等地， 青海、四川、陕西
等省区也有分布， 其干燥茎皮及根皮入药叫祖师
麻 ［2，3］，有镇痛、活血、消肿、袪风湿之用，甘肃瑞香
除作为民间草药用外，还有毒鱼、杀鼠和杀虫的作
用 ［4］，对植物病原菌也具有较强的抑制作用 ［5］。 本
种开花早 ，花期长 ，花大而美 ，且常绿 ，因此是园
林绿化的良好材料。
对甘肃瑞香组织培养与快速繁殖的实验研究，
目前国内外尚未见报道。 本文论述了利用野生甘肃
瑞香的顶芽为材料，进行组织培养的实验研究。
1 材料与方法
1.1 材料 甘肃瑞香，采自甘肃省小陇山实验局
麦积林场。
1.2 外植体灭菌 春季采摘甘肃瑞香幼嫩顶芽，
去掉叶片， 在加有少量洗洁精的清水中摇荡冲洗
10 min 后 ，再用流水冲洗干净 ，放入 70%的酒精
中 30 s 后，无菌水冲洗 3 遍，转入饱和漂白粉上
清液中加入 2 滴吐温-80 ，灭菌 20 min 后 ，无菌
水冲洗 6 遍，放在铺有滤纸的接种盘中备用。
1.3 培养基 愈伤诱导培养基 ：①MS +2，4 -
甘肃瑞香组织培养技术研究
雷 颖 （甘肃林业职业技术学院园林工程系 甘肃天水 741020）
摘要 以野生甘肃瑞香顶芽为外植体进行组织培养实验研究。 结果表明：甘肃瑞香愈伤组
织诱导的培养基为 MS+2，4-D3.0 mg/L+6-BA3.0 mg/L； 愈伤分化培养基为 MS +ZT2.0 mg/L+
NAA0.5 mg/L；不定芽增殖培养基为 MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L，平均增殖倍数为
7.8；生根培养基为 1/2MS+NAA0.5 mg/L,生根数平均为 3 条左右，生根率为 85%以上。
关键词 甘肃瑞香 组织培养 植株再生
中国图书分类号：Q－33 文献标识码：B
2014年 第 49 卷 第 12 期 生 物 学 通 报 47
D5.0 mg/L，②MS+2,4-D3.0 mg/L+6-BA3.0 mg/L，③
MS+6-BA5.0 mg/L+NAA2.0 mg/L；愈伤分化培养
基 ：④MS+ZT2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L，⑤MS+6-
BA2.0 mg/L+NAA0.3 mg/L；不定芽增殖培养基 ：
⑥MS+2，4-D0.2 mg/L+6-BA1.0 mg/L ，⑦MS+
NAA0.2 mg/L+6-BA1.0 mg/L;生根培养基:⑧1/2MS+
NAA0.5 mg/L。 以上培养基均附加 3%蔗糖（生根
1%）、0.6%琼脂，pH5.8。
1.4 培养条件 温度（22±2）℃，光照强度 1 500～
2 000 lx，光照时间 12 h/d。 生根阶段光照强度增
加至 3 000 lx 左右。
2 结果
2.1 愈伤诱导及分化增殖 在超净工作台上将
灭过菌的幼嫩顶芽切去顶叶和芽基 ， 保留芽段
0.5～1.0 cm，然后接种到培养基①、②、③中，遮光
培养，2 周后芽基部出现明显的愈伤组织，30 d 后
愈伤组织增大且表面出现疣突 （图 1）；将增大的
愈伤组织块切割后转入分化培养基④、⑤中，20 d
后有大量不定芽产生（图 2），当芽苗长到 2 cm 左
右时，将其切下转接到增殖培养基⑥、⑦中，进行
增殖培养， 在培养基⑦中芽苗平均增殖倍数可达
7.8 倍以上（图 3）。
图 1 愈伤组织诱导 图 2 不定芽的分化
图 3 继代增殖培养
2.2 生根 当增殖培养的丛生芽长到 2～3 cm 左
右时，切下嫩茎转接到培养基⑧中进行生根培养，
图 4 生根培养 图 5 幼根生长情况
20 d 左右开始生根，30 d 时根长 1～2 cm，根较粗
壮，呈淡绿色，平均根数 2～5 条，生根率为 85%以
上（图 4、图 5）。
2.3 炼苗与移栽 将生根后的瓶苗置炼苗室不
开盖 2～3 d 后，开盖置 2～3 d，2 h 喷水 1 次，取出
后洗净根部培养基 ，移栽到珍珠岩的基质上 （图
6）， 保持环境温度 20℃左右 ， 相对湿度 90%～
100%，适当遮荫，后期逐渐通风，增施营养液，加
强光照。 1 个月后即可移栽到苗床，成活率 90%。
图 6 试管苗出瓶移栽
3 讨论
初代培养阶段，当外植体接入培养基时，基部
立即发现黄色物质渗出 ，连续转瓶 3～5 次 ，渗出
物将逐渐消失 ［6，7］。
在愈伤诱导过程中， 培养基②中诱导效果较
好，生长较快，结构致密且表面有均匀小疣突（图
1）； 芽苗分化过程中， 培养基④中分化效果较为
理想，分化率较高且芽苗生长健壮（图 2）。
继代增殖阶段， 培养基⑦中增殖倍数较高，嫩
茎生长旺盛（图 3）。 甘肃瑞香组培苗较难生根，培
养基⑧是较理想的组合，平均根数为 2～5 条，较粗
壮（图 4、图 5）。但培养基中糖的含量要降到 1%［6］，
光照强度增至 3 000 lx 左右［8］较为合适。
主要参考文献
1 中国科学院植物研究所 . 中国高等植物图鉴 .第 2 册 .北京：
科学出版社，1972：953.
2 李书慧，吴立军，殷红英 .祖师麻化学和药理活性研究进展 .
中国中药杂志，2002,27(6)：401—403.
3 张薇，苏娟，扈晓隹等 . 中药祖师麻的 3 种基源植物化学及
药理活性 .中国医药工业杂志 ，2007,38(3)：233—235.
4 杨航宇 . 甘肃瑞香对菜青虫杀虫活性及对常见植物病原菌
的抑菌作用研究 .甘肃农业大学硕士论文 ，2009.
5 张振刚 . 甘肃瑞香提取物对 8 种常见植物病原菌抑菌作用
的研究 .甘肃农业大学学报 ，2011，(2)：80—82.
6 刘敏 .花卉组织培养与工厂化生产 .北京 :地质出版社，2002.
7 王清连 .植物组织培养 .北京：中国农业出版社，2002：25.
8 谭文澄 ,戴策刚 .观赏植物组织培养 .北京：中国林业出版社 ,
1997:103.
（E-mail: leiyinggl@163.com）