全 文 ：　［收稿日期］　２０１５－０１－２６；２０１５－０９－１１修回
　［基金项目］　贵州省科技厅、遵义市科技局合作专项“地道特色中药材蓼子草野生驯化及栽培技术研究”［省市科合（２０１３）４０］
　［作者简介］　刘　亮（１９８１－），男，副教授，硕士，从事中药、民族药化学成分及质量研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｋｍａｎ１＠１６３．ｃｏｍ
　＊通讯作者：冯　华（１９７７－），男，主管药师，硕士，从事药品检验及新药研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｅｎｇｈｕａ７８１０１４＠１６３．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１５）１０－０５８７－０１９１－０４
黔产辣蓼中槲皮素的薄层鉴别与含量测定
刘 亮，冯 华２＊，刘英波１，潘年松１，周德权３
（１．遵义医药高等专科学校，贵州 遵义５６３０００；２．遵义市食品药品检验所，贵州 遵义５６３００２；
３．遵义绿普森农业有限公司，贵州 遵义５６３００３）
　　［摘　要］为建立黔产辣蓼的薄层鉴别与含量测定方法，采用薄层色谱法，以槲皮素为对照，以甲苯－甲
酸乙酯－甲酸 （１０∶８∶１）为展开剂，建立了其定性鉴别方法；采用高效液相色谱法，以槲皮素为对照，Ｈｙｐｅｒ－
ｓｉｌ　ＯＤＳ２Ｃ１８（５μｍ，２００ｍｍ×４．６ｍｍ）为色谱柱，０．２０％磷酸溶液－乙腈（８０∶２０）作为流动相，二极管矩阵
检测器为检测器，建立了其含量测定方法。结果表明：建立的ＴＬＣ法能很好分离各成分，其方法学考察精密
度、重复性、稳定性和加样回收率的ＲＳＤ分别为０．１８％、０．７１％、１．１０％和２．４４％，能够准确测定辣蓼中槲
皮素的含量。
［关键词］辣蓼；槲皮素；薄层鉴别；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ
ＴＬＣ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ
ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ
ＬＩＵ　Ｌｉａｎｇ１，ＦＥＮＧ　Ｈｕａ　２＊，ＬＩＵ　Ｙｉｎｇ　ｂｏ１，ＰＡＮ　Ｌｉｎｓｏｎｇ１，ＺＨＯＵ　Ｄｅｑｕａｎ３
（１．Ｚｕｎｙｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｕｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５６３０００；２．Ｚｕｎｙｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　＆Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，
Ｚｕｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５６３００２；３．Ｚｕｎｙｉ　Ｌｕｐｕｓｅｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｌｉｍｉｔｅｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｚｕｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５６３００３，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ＴＬＣ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｏｌｕｅｎｅ－ｅｔｈｙｌ　ｆｏｒｍａｔｅ－
ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ（１０∶８∶１）ａｓ　ａ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ａｎｄ　ｔａｋｉｎｇ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ａｓ　ＣＫ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｗａｓ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ　ｏｆ　Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ＯＤＳ２Ｃ１８（５μｍ，
２００ｍｍ×４．６ｍｍ），ｍｏｖｉｎｇ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　０．２％ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（８０∶２０）ａｎｄ　ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ　ａｒｒａｙ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ
ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ＴＬＣ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　ｆｒｏｍ
Ｇｕｉｚｈｏｕ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ＴＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｅａｃｈ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ．Ｔｈｅ　ＲＳＤ
ｏｆ　ａｃｃｕｒａｃｙ，ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　０．１８％，０．７１％，
１．１０％ａｎｄ　２．４４％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ＴＬＣ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
　　辣蓼（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　Ｌ．）又名蓼子
草、水蓼，为蓼科、蓼属植物。收载于２００３年版《贵
州省中药材、民族药材质量标准》［１］，为贵州民族药
材，性辛、苦、温，无毒，具有行滞化湿，散瘀止血，解
毒等功效，用于痢疾，食滞，小儿疳积，痛经等作用。
通过文献查阅可以发现，其有效成分为黄酮类，其中
槲皮素、槲皮苷、金丝桃苷等是辣蓼含量较高的重要
成分［２］。关于辣蓼中槲皮素含量测定的研究有２篇
文献［３－４］，笔者前期根据何立美的报道采用超声法进
行提取发现，提取到的黔产辣蓼槲皮素含量极低，不
能进行定量检测，而回流水解法操作较复杂，且所测
药材主要为广东和广西两省，未涉及贵州产辣蓼，而
辣蓼作为贵州民族药，一直作为董酒生产中酒曲的
重要原料，年需求量极大。为提供优质的辣蓼药材
供董酒酒曲使用，并为提升辣蓼２００３版贵州省地方
标准提供参考，有必要对黔产辣蓼进行 ＧＡＰ种植
（本项目已建成６　６６７ｈｍ２辣蓼 ＧＡＰ种植示范基
地）并制定质量标准，因此，笔者对辣蓼中槲皮素的
薄层鉴别及含量进行研究，以期为辣蓼药材质量和
开发利用提供一定的科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
材料及试剂：辣蓼于２０１４年１０月下旬和１１月
上旬采摘。１号样：贵州遵义市赤水市金沙沟附近
（海拔６００ｍ，东经２８．４４°，北纬１０５．９９°）；２号样：
贵州贵阳市乌当区情人谷风景区（海拔１　１００ｍ，东
经２６．６０°，北纬１０６．８０°）；３号样：贵州安顺市黄果
树风景区（海拔９５０ｍ，东经２５．９９°，北纬１０５．６７°）；
４号样：贵州六盘水市盘县丹霞山风景区（海拔
１　５５０ｍ，东经２５．６７°，北纬１０４．６１°）；５号样：贵州
省遵义市湄潭县复兴镇两河口村潘家院子种植基地
（海拔９５０ｍ，东经２７．９４°，北纬１０７．６０°），经遵义市
食品药品检验所邓顺超副主任中药师鉴定为蓼科植
物辣蓼的干燥地上部分。槲皮素对照品（购自中国
食品药品生物研究院，批号：００８１－９３０４）。乙腈为
　贵州农业科学　２０１５，４３（１０）：１９１～１９４
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），其他均
为分析纯，水为娃哈哈水。
仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＬＣ－１２６０高效液相色谱议（包括
四元泵，ＤＡＤ，柱温箱，自动进样器，工作站），
ＡＢ２０４－Ｓ型梅特勒电子天平，高速万能粉碎机（天津
市泰斯特仪器有限公司），ＤＨＧ　９０ＡＯＡ型电热恒
温鼓风干燥箱（宁波江南仪器厂），ＤＫＳ－２６型电热
恒温水浴锅（宁波江南仪器厂），ＺＦ－２三用紫外仪
（上海安亭仪器有限公司），预制硅胶 Ｇ薄层板（青
岛海洋化工厂分厂）。
１．２ 薄层色谱鉴别
薄层色谱鉴别参照文献［５］～［７］中的方法进
行。
１．２．１ 供试品溶液的制备 称取同一产地辣蓼药
材粉末（过三号筛）２．０ｇ，加甲醇２０ｍＬ水浴回流提
取１ｈ，过滤，滤液浓缩至干，冷却后加甲醇２ｍＬ溶
解，作为供试品溶液 Ａ；将供试液 Ａ中提取溶剂改
为混合溶剂（２５％∶甲醇盐酸＝１∶４）２０ｍＬ，水浴
回流１ｈ，过滤，滤液浓缩至干，冷却后加甲醇２ｍＬ
溶解，作为供试品溶液Ｂ；将供试品溶液Ｂ中滤液浓
缩至干后，立即加水１０ｍＬ溶解，水溶液先用乙酸
乙酯萃取２次，每次２０ｍＬ，乙酸乙酯萃取液再用水
３０ｍＬ萃取１次，将乙酸乙酯萃取液浓缩至干，冷却
后加甲醇２ｍＬ溶解，作为供试品溶液Ｃ。
１．２．２ 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素
１４．８ｍｇ溶解于２５ｍＬ甲醇中，作为对照品溶液。
１．２．３　 ３种提取条件的选择 吸取上述３种供试
品溶液及对照品溶液适量点于预制硅胶板（已活
化），置双槽展开缸中，以甲苯－甲酸乙酯－甲酸 （１０∶
８∶１）上行展开（展距约１３ｃｍ），取出喷雾３％三氯
化铝乙醇液，１０５℃加热显色５ｍｉｎ，于３６６ｎｍ紫外
灯下观察现象。
１．２．４ 不同产地辣蓼的薄层鉴别 将不同产地的
辣蓼药材烘干后，粉碎成粗粉（过三号筛），按１．２．１
项下操作分别制备成供试品溶液Ｃ。用对应的溶剂
制备成阴性对照溶液。分别吸取对照液与供试液适
量，点样于硅胶薄层板上，置于展开缸中，按１．２．３
项操作，展开，显色，于紫外灯下观察。
１．３ 槲皮素含量测定
槲皮素含量测定参照文献［８］～［１０］中的方法
进行。
１．３．１ 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照
品适量，加甲醇配制成浓度为０．０６４ｍｇ／ｍＬ的对照
品溶液。
１．３．２ 检测波长的确定 按照紫外－可见分光光
度法，在２００～４００ｎｍ 的波长范围内对对照品溶
液、供试品溶液进行扫描。
１．３．３ 色谱条件 色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ＯＤＳ２Ｃ１８
（５μｍ，２００ｍｍ×４．６ｍｍ），流动相：乙睛－０．２％磷
酸溶液（２０∶８０），流速为：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温２５℃，
检测波长为３６０ｎｍ。进样量１０μＬ，理论塔板数按
槲皮素峰计，应不低于３　０００。
１．３．４ 提取溶剂浓度考察 精密称取辣蓼药材粉
末（过三号筛）约１．０ｇ，共５份，置于锥形瓶中，分别
加入提取剂为１０％盐酸溶液－甲醇（１∶４，下同）、
１５％盐酸溶液－甲醇、２０％盐酸溶液－甲醇、２５％盐酸
溶液－甲醇和３０％盐酸溶液－甲醇２０ｍＬ，密塞，称定
重量，回流提取１ｈ，取出，放置至室温，再次称定重
量，用相应的提取溶剂补足重量，过滤，取续滤液，过
０．４５μｍ的微孔滤膜滤，即得，分别吸取１０μＬ注入
液相色谱仪测定。
１．３．５ 提取时间考察 精密称取辣蓼药材粉末
（过三号筛）约１．０ｇ，共５份，置于锥形瓶中，加２５％
盐酸溶液－甲醇（１∶４）２０ｍＬ，密塞，称定重量，分别
回流提取２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、８０ｍｉｎ、１００ｍｉｎ，
取出，放置至室温，再次称定重量，用２５％盐酸溶
液－甲醇 （１∶４）补足重量，过滤，取续滤液，过
０．４５μｍ的微孔滤膜滤，即得，分别吸取１０μＬ注入
液相色谱仪测定。
１．３．６ 供试品溶液的制备 精密称取辣蓼药材粉
末（过三号筛）约１．０ｇ，置于锥形瓶中，加２５％盐酸
溶液－甲醇（１∶４）２０ｍＬ，密塞，称定重量，回流提取
１ｈ，取出，放至室温，再次称定重量，用２５％盐酸溶
液－甲醇（１∶４）补足重量，过滤，取续滤液，即得。
１．３．７ 方法学考察
１）标准曲线及线性范围。分别准确吸取上述
槲皮素对照品溶液（０．０６４ｍｇ／ｍＬ），２μＬ、６μＬ、
１０μＬ、１４μＬ、２０μＬ，注入高效液相色谱仪，按
１．３．３项下色谱条件测定峰面积，以槲皮素进样量
（ｘ）为横坐标，峰面积积分值（ｙ）为纵坐标，计算回
归方程。
２）精密度试验。精密吸对照品溶液１０μＬ，注
入高效液相色谱仪中，按１．３．３项下色谱条件连续测
定６次峰面积。
３）重复性试验。准确称取同一批样品，按
１．３．６项下方法制备成供试品溶液，共６份，按１．３．３
项下色谱条件测定峰面积。
４）稳定性试验。准确吸取供试品溶液１０μＬ，
室温下放置，分别于０ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ和１２ｈ进样，
按１．３．３项下色谱条件测定峰面积。
５）加样回收试验。精密称取辣蓼药材粉末约
０．５ｇ（含量为０．９３４ｍｇ／ｇ），共５份，精密加入浓度
０．５０６ｍｇ／ｍＬ槲皮素对照品溶液１ｍＬ，按１．３．３
项下色谱条件项下的方法操作，计算回收率。
１．３．８ 样品含量的测定 分别精密称取不同采集
地辣蓼样品约１．０ｇ，按１．３．６项操作制备成供试品
溶液，按１．３．３ 项下色谱条件测定，并按干燥品计
算槲皮素的含量。
２ 结果与分析
２．１ 薄层色谱鉴别
２．１．１　 ３种提取条件的选择 由图１看出，３种供
试液色谱斑点与对照液色谱斑点位置及颜色均一
·２９１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
　注：１、２为供试品溶液Ａ，３、５为供试品溶液Ｂ，６、７为供试品溶液
Ｃ，４为对照品溶液。
　Ｎｏｔｅ：１ａｎｄ　２，Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ　Ａ；３ａｎｄ　５，Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ　Ｂ；６ａｎｄ　７，Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　Ｃ；４，ＣＫ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．
图１ 辣蓼不同供试液薄层色谱图
　Ｆｉｇ．１　ＴＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ
ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ
　注：１、２、３、５、７为供试品溶液，４为对照品溶液，６为阴性对照溶液
　Ｎｏｔｅ：１，２，３，５ａｎｄ　７，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，４，ＣＫ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ；６，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ＣＫ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．
图２ 不同产地辣蓼薄层色谱图
　Ｆｉｇ．２　ＴＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　Ｌ．ｆｒｏｍ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ａｒｅａ
致。参照２０１０版中国药典中相关黄酮类薄层色谱
鉴别试验，并结合试验过程中供试液的稳定性等因
素，提取条件应为供试品溶液Ｃ的提取条件。
２．１．２ 不同产地辣蓼的薄层鉴别 由图２可见，
各样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显现
相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
２．２ 含量测定
２．２．１ 检测波长确定 结果显示，槲皮素和样品
在３６０ｎｍ波长处有最大吸收，因此选择检测波长
为３６０ｎｍ。
２．２．２ 色谱条件 由图３可见，槲皮素所对应的
峰与其他峰完全分离，峰形对称，满足含量测定的
要求。
　注：Ａ为对照品溶液，Ｂ为供试品溶液。
Ｎｏｔｅ：Ａ，ＣＫ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ；Ｂ，ｔｅｓｔｅｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．
： 图３ 辣蓼ＨＰＬＣ色谱图
Ｆｉｇ．３　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ
２．２．３ 提取溶剂浓度考察 由表１看出，以２５％
盐酸溶液－甲醇（１∶４）为提取溶剂的辣蓼槲皮素含
量最高，故选择其为试验中的提取溶剂。
２．２．４ 提取时间考察 由表 ２ 可看出，提取
６０ｍｉｎ后，槲皮素的含量不再增加，因此提取时间选
择为回流６０ｍｉｎ。
２．２．５ 方法学考察
１）标准曲线及线性范围。经测定，槲皮素与峰
面积的回归方程为ｙ＝１　０９４．２ｘ＋４．０４６　３，ｒ＝
０．９９９　９。槲皮素进样量在０．１２８～１．２８μｇ范围内
线性关系良好。
２）精密度。由结果计算得ＲＳＤ＝０．１８％（ｎ＝
６），表明仪器精密度良好。
３）重复性试验。由结果计算得ＲＳＤ为０．７１％
（ｎ＝６），表明该方法重复性良好。
表１ 不同浓度提取溶剂提取辣蓼的槲皮素含量
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＰ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
编号
Ｎｏ．
取样量／ｇ
Ｓａｍｐｌｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
提取溶剂
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
含量／％
Ｃｏｎｔｅｎｔ
１　 １．０１８　０　 １０％盐酸溶液－甲醇（１∶４） ０．０１８
２　 １．００４　８　 １５％盐酸溶液－甲醇（１∶４） ０．０４０
３　 ０．９９８　９　 ２０％盐酸溶液－甲醇（１∶４） ０．１０４
４　 １．１０２　４　 ２５％盐酸溶液－甲醇（１∶４） ０．１２８
５　 １．０２８　５　 ３０％盐酸溶液－甲醇（１∶４） ０．１３０
·３９１·
　刘　亮 等　黔产辣蓼中槲皮素的薄层鉴别与含量测定
　ＬＩＵ　Ｌｉａｎｇ　ｅｔ　ａｌ　ＴＬＣ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ
　　４）稳定性试验。由结果计算得平均含量为
０．１２１％，ＲＳＤ为１．１０％（ｎ＝６）。结果表明，供试
品溶液在１２ｈ内稳定。
５）加样回收试验。由表３看出，平均回收率为
９８．６２％，ＲＳＤ为２．４４％符合要求，回收率良好。
２．２．６ 样品的槲皮素含量 由表４看出，不同采
集地辣蓼的槲皮素含量具有差异性。其中，贵州六
盘水采集的辣蓼槲皮素含量最高，为０．１４５％；贵州
安顺最低，为０．０７３％，这可能与当地的土质、水分、
光照等有关系，有待进一步的研究。
表２ 不同提取时间的辣蓼槲皮素含量
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＰ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ
ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ
编号
Ｎｏ．
取样量／ｇ
Ｓａｍｐｌｉｎｇ
ａｍｏｕｎｔ
提取时间／ｍｉｎ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ
含量／％
Ｃｏｎｔｅｎｔ
１　 １．０１８　０　 ２０　 ０．０７８
２　 １．１００　８　 ４０　 ０．０９８
３　 １．０９９　１　 ６０　 ０．１２０
４　 ０．９９９　４　 ８０　 ０．１２０
５　 １．０２１　８　 １００　 ０．１１９
表３ 辣蓼槲皮素的ＨＰＬＣ加样回收率
Ｔａｂｌｅ　３　ＨＰＬＣ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ
编号
Ｎｏ．
取样量／ｇ
Ｓａｍｐｌｉｎｇ
ａｍｏｕｎｔ
样品含量／ｍｇ
Ｃｏｎｔｅｎｔ
加入量／ｍｇ
Ａｄｄｉｔｉｏｎ
实测量／ｍｇ
Ａｃｔｕａｌ　ｍｅａｓｕｒｅｄ
ａｍｏｕｎｔ
回收率／％
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ
平均回收率／％
Ａｖｅｒａｇｅ
ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
ＲＳＤ
％
１　 ０．５６６　６　 ０．５２９　 ０．５０６　 １．０２６　 ９８．２２
２　 ０．５５０　３　 ０．５１１　 ０．５０６　 １．０１６　 ９９．８０
３　 ０．５８９　４　 ０．５５０　 ０．５０６　 １．０３２　 ９５．２６　 ９８．６２　 ２．４４
４　 ０．５６６　０　 ０．５２８　 ０．５０６　 １．０２４　 ９８．０２
５　 ０．５５０　７　 ０．５１４　 ０．５０６　 １．０２９　 １０１．７８
表４ 不同采集地辣蓼的槲皮素含量
Ｔａｂｌｅ　４　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐ．ｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ａｒｅａ
编号
Ｎｏ．
采集地
Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ｓｉｔｅｓ
称样量／ｇ
Ｓａｍｐｌｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
含量／％
Ｃｏｎｔｅｎｔ
１ 贵州遵义Ｚｕｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　 １．０１３　１　 ０．１０５
２ 贵州贵阳 Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　 １．０３１　０　 ０．１２７
３ 贵州安顺 Ａｎｓｈｕｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　 １．０２７　３　 ０．０７３
４ 贵州六盘水Ｌｉｕｐａｎｓｈｕｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　 １．０２２　３　 ０．１４５
５ 贵州遵义（基地）Ｚｕｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ（Ｂａｓｅ） １．０１７　７　 ０．１２４
３ 结论与讨论
１）根据文献查阅，尚无辣蓼中槲皮素薄层鉴别
的研究报道，而董酒用辣蓼的质量亟待规范，因此有
必要进行黔产辣蓼的薄层鉴别研究。经前期研究发
现薄层色谱试验中吸附剂为硅胶的效果较好。根据
《贵州省中药材、民族药材质量标准》２００３版中辣蓼
的薄层色谱鉴别要求，薄层色谱试验之初选择以聚
酰胺为吸附材料，以乙醇－水 （７∶３）为展开剂，结果
在相同的比移值处供试液和对照液色谱呈现的斑点
不清晰，分离度较差，有拖尾现象，且相对于硅胶薄
层色谱展开时间较长，故选用硅胶为吸附材料；通过
对以甲苯－甲酸乙酯－甲酸为展开剂的溶剂比例进行
研究发现，展开剂为甲苯－甲酸乙酯－甲酸 （１０∶８∶
１）的薄层色谱图分离较好；试验对供试品溶液的３
种提取条件进行了比较，考虑试验中供试品溶液 Ａ
及Ｂ的稳定性较差，容易沉淀，且点样中易堵塞点
样管，参考２０１０版中国药典相关操作，最终选择供
试液Ｃ的操作条件，即称取同一产地辣蓼药材粉末
（过三号筛）２．０ｇ，加（甲醇∶２５％盐酸＝４∶１）
２０ｍＬ水浴回流提取１ｈ，过滤，滤液浓缩至干，立即
加水１０ｍＬ溶解，水溶液先用乙酸乙酯萃取２次，
每次２０ｍＬ，将乙酸乙酯萃取液再用水３０ｍＬ萃取
１次后液浓缩至干，冷却后加甲醇２ｍＬ溶解，即得。
２）选择２５％盐酸溶液－甲醇（１∶４）２０ｍＬ回流
提取６０ｍｉｎ，药材中槲皮素提取完全；对流动相甲
醇－水、０．２％磷酸溶液－甲醇、乙腈－水、０．２％磷酸溶
液－乙腈进行选择，以０．２％磷酸溶液－乙腈（８０∶
２０），流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温２５℃；检测波长为
３６０ｎｍ，各组分峰达到完全分离。试验前期还进行
了耐用性试验，包括不同生产厂家柱子考察（Ｈｙ－
ｐｅｒｓｉｌ　ＯＤＳ２Ｃ１８柱、Ｄｉｍａｏｎｓｉｌ　Ｃ１８柱及Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ
Ｃ１８柱），结果不同色谱柱保留时间有差异（分别为
１９．１ｍｉｎ、４７．１ｍｉｎ、５３．２ｍｉｎ），但均能获得良好的
分离效果；不同柱温考察（２５℃、３０℃及４０℃），结果
表明，柱温变化对结果没有影响。通过测量野生及
人工种植辣蓼中槲皮素的含量，可以看出因环境差
异，其含量也有一定的不同，为其后期野生驯化种植
提供了参考。
３）本法简便、快速，准确度高，重复性好，可用
于辣蓼药材的质量控制，对提升辣蓼２００３版的贵州
省地方标准具有参考价值。
［参 考 文 献］
［１］ 贵州省食品药品监督管理局．贵州省中药材、民族药
材质量标准［Ｓ］．贵州：贵州科技出版社，２００３：４０６．
（下转第１９９页）
·４９１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
［３］ 晏 妮．贵州两种类型喀斯特水库浮游植物分布与富
营养化特征比较研究［Ｄ］．贵州师范大学，２００６．
［４］ 胡春香，张德禄，刘永定．干旱区微小生物结皮中藻类
研究的新进展［Ｊ］．自然科学进展，２００３（８）：９－１３．
［５］ 张丙昌，张元明，赵建成．古尔班通古特沙漠生物结皮
藻类的组成和生态分布研究［Ｊ］．西北植物学报，２００５
（１０）：２０４８－２０５５．
［６］ Ｊａｙｎｅ　Ｂｅｌｎａｐ．Ｓｕｒｆａｃｅ　ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｓ：Ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ａｃ－
ｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ　ｄｅｓｅｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｏｎｉｔｏ－
ｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，１９９５，３７（１）：３９－５７．
［７］ 关秀清，阮学军．地耳生物固氮特性及其在内蒙古草
原氮素循环中的作用［Ｊ］．草地学报，２０００（１）：１３－１７．
［８］ 向 刚，陈 椽，刘 宁．荔波小七孔钙华藻类多样性
初步研究［Ｊ］．贵州师范大学学报：自然科学版，２００２，
２０（２）：３５－４０．
［９］ 刘红敏．贵州兴义马岭河峡谷藻类植物区系、生态及
生物岩溶作用的研究［Ｄ］．贵州师范大学，２００７．
［１０］ 杨鸿雁．贵州雷公山自然保护区藻类植物区系及生态
分布［Ｄ］．贵州师范大学，２００８．
［１１］ 何 林，吴安琴，张仁波，等．赤水四洞沟景区岩生苔
藓植物种类调查［Ｊ］．湖北农业科学，２０１３（２０）：４８９３－
４８９７．
［１２］ 周崇军．赤水桫椤保护区桫椤种群特征［Ｊ］．贵州师范
大学学报：自然科学版，２００５（２）：１０－１４．
［１３］ 孙亚莉，屠玉麟．赤水桫椤自然保护区受危物种现状
及保护［Ｊ］．贵州师范大学学报：自然科学版，２００４
（４）：２２－２６．
［１４］ 熊康宁．赤水丹霞地貌生态过程与生物多样性［Ｍ］．
贵阳：贵州科学技术出版社，２００９．
［１５］ 邱兴春，屠玉麟．赤水桫椤保护区生物多样性的经济
价值评估［Ｊ］．贵州师范大学学报：自然科学版，２００５
（１）：２３－２７．
［１６］ 王 密，屠玉麟，何谋军．赤水桫椤自然保护区植物和
植被多样性现状及特点分析［Ｊ］．贵州师范大学学报：
自然科学版，２００５（１）：１９－２２．
［１７］ 杨鸿雁，罗绪强，杨 帆．贵州雷公山国家级自然保护
区藻类植物 区 系 研 究 ［Ｊ］．广 西 植 物，２０１４（４）：
５７０－５７４．
［１８］ 张云会，王章训，王新谱，等．宁夏三大林区蝶类多样
性及其区系 特 征 ［Ｊ］．西 部 林 业 科 学，２０１４（５）：
７６－８０，８６．
［１９］ 丁 强，雷永松，高 嵩，等．孝感市鸟类多样性调查
与分析［Ｊ］．湖北林业科技，２０１４（３）：４７－５１．
［２０］ 龚大洁，李晓军，万丽霞，等．岐山县南北两山鸟类调
查与Ｇ－Ｆ 指数分析［Ｊ］．西北师范大学学报：自然科学
版，２０１３（５）：８４－９０．
［２１］ 程松林，袁荣斌，毛夷仙．武夷山脉爬行动物地理分布
及其Ｇ－Ｆ 指数分析［Ｊ］．长江流域资源与环境，２０１１
（Ｓ１）：２２－２９．
［２２］ 蒋志刚，纪力强．鸟兽物种多样性测度的Ｇ－Ｆ指数方
法［Ｊ］．生物多样性，１９９９（３）：６１－６６．
（责任编辑：杨　林
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁
）
（上接第１９４页）
［２］ 黄 健，候朋艺，吴立军，等．辣蓼化学成分的分离与
鉴定［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２０１２，１（２９）：２２－２５．
［３］ 何立美，陈玉婷，刘洪梅，等．高效液相色谱法同时测
定水辣蓼提取物中６种黄酮成分的含量［Ｊ］．广东农
业科学，２０１４，５０（１３）：９４－９８．
［４］ 高 雅，张可锋，朱 华．ＨＰＬＣ测定不同产地辣蓼中
槲皮素的含量［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２，１８
（２１）：８９－９１．
［５］ 陈 燕，德 吉，黄志芳，等．藏药全缘绿绒蒿的薄层
色谱鉴别与含量测定［Ｊ］．中药材，２００９，３２（８）：１２１８－
１２２０．
［６］ 程 静，侯小涛，戴 航，等．鸡骨草肝炎颗粒的薄层
鉴别和绿原酸、槲皮素的测定［Ｊ］．华西药学杂志，
２００９，２４（４）：４０９－４１１．
［７］ 杨天寿，肖新月，安 瑜，等．金莲花的薄层鉴别与含
量测定 研 究 ［Ｊ］．药 物 分 析 杂 志，２０１４，３４（１０）：
１８７８－１８８２．
［８］ 王祥培，许士娜，吴红梅，等．天胡荽药材中槲皮素的
薄层鉴别与含量测定［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１
（１）：４４－４５．
［９］ 郭力城，腾红丽，梅之南。铁包金药材中槲皮素的薄
层鉴别与含量测定研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１２，２３
（１２）：２９８３－２９８５．
［１０］ 李 旻，王 砚，余 弦，等．竹叶柴胡根中皂苷类成
分的薄层鉴别及含量测定［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，
２０１４，２０（４）：７４－７７．
（责任编辑：孙小岚）
·９９１·
　郭丁力 等　赤水市四洞沟景区藻类植物的多样性及区系特征
　ＧＵＯ　Ｄｉｎｇｌｉ　ｅｔ　ａｌ　Ｓｐｅｃｉｅｓ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　Ｆｌｏｒａ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ａｌｇａｅ　ｉｎ　Ｓｉｄｏｎｇｇｏｕ　Ｓｃｅｎｉｃ　Ｓｐｏｔ　ｏｆ　Ｃｈｉｓｈｕｉ　Ｃｉｔｙ