全 文 ：基金项目:福建师范大学本科生课外科技计划资助(项目编号:BKL2010-070)。
作者简介:张铭清(1989-),男 ,福建漳州人 ,学生。 　　收稿日期:2010-11-30
中华补血草黄酮抑制白血病细胞增殖的初探
张 铭 清
(福建师范大学生命科学学院 ,福建福州　 350108)
摘　要:应用 MTT法研究中华补血草不同浓度黄酮提取物对体外培养的人类白血病 HL-60细胞株的增殖抑制作
用。结果显示:不同浓度的中华补血草黄酮提取液作用人白血病细胞 HL-60处理 48h后 ,细胞的生长受到不同程度
的抑制 , 并且随着浓度的升高抑制作用逐渐加强 , 呈现明显的量效关系 ,其 IC50值为 11.55μg/mL。
关键词:中华补血草;黄酮类化合物;HL-60细胞;细胞增殖
中图分类号　Q946.91;S-3　　　文献标识码　A　　　文章编号　1007-7731(2011)01-54-02
PreliminaryStudyontheInhibitionEfectofleukemiaCelsfromFalconoidExtractsof(Limoni-
umsinense(Girard)Kuntze)
ZhangMingqing
(ColegeofLifeScience, FujianNormalUniversity, Fuzhou350108, China)
Abstract:Inthisissue, wediscussthefunctionofflavonoids, ahostfortheLimoniumsinense(Girard)Kuntzeextract, on
culturedhumanleukemiacellineHL-60proliferationinhibition.Intheexperiment, theapplicationofMTTmethod, re-
searchflavonoidextractsonHL60celproliferationinhibitoryeffect.Theoutcome:HL60cellhavediferentinhibitoryeffect
afectedbydiferentconcentrationsofflavonoidextractsafter48h, andtheefectisstrongerwiththeconcentrationraise.
Thereexisttheobviousdose-effectrelationship, andtheIC50 is11.55μg/mL.
Keywords:Limoniumsinense(Girard)Kuntze;Falconoid;HL-60 cel;Cellproliferation
　　中华补血草(Limoniumsinense(Girard)Kuntze)是蓝
雪科补血草属中一种经济价值较高的盐生海滨植物 ,在福
建长乐 、惠安 、诏安以及台湾金门等地的沿海都有分布 ,且
有一定的野生资源蕴藏量。李均等采用大孔树脂吸附分
离法从中华补血草根中提取了黄酮类化合物 ,并研究其抗
氧化活性 [ 1] 。
黄酮类化合物(Falconoid),又称生物类黄酮(Bioflavo-
noid),指具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的
总称 ,属于植物的次级代谢产物 ,在植物的叶子和果实中
少部分以游离形式 ,大部分与蔗糖合成甙类 ,以配基形式
存在。目前已有多个黄酮类化合物作为抗肿瘤药进入临
床 ,应是今后新药开发研究中一个值得重视的资源 ,具有
很大的开发利用前景 ,其抗肿瘤作用的筛选工作仍在不断
进行 [ 2] 。
因此 ,有必要对补血草属植物的活性成分及药理作用
进行系统研究 。本实验初步研究了中华补血草黄酮提取
液对体外培养的人类白血病 HL-60细胞株的增殖抑制
作用 ,以期为补血草属植物的开发应用奠定基础。
1　材料与方法
1.1　药品 、试剂及仪器
1.1.1　药品与试剂　中华补血草黄酮提取液用二甲基亚
砜(DMSO)溶解 ,配成 100 mg/mL母液 , -20℃保存备用 、
DMSO(Sigma公司);RPMI1640培养基(Gibco公司);胎牛
血清(杭州四季青公司)。
1.1.2　实验仪器　96孔细胞培养板(Costar)、电子天平
(Olympus公司)、细胞培养箱(HEALFORCE公司)、低温
离心机(J2-21型 , Becman公司)、酶标仪(Stat, Fax-2100
型)、离心机(Thermo公司)、超净工作台(AIRTEC公司)、
倒置显微镜(Olympus)、光学显微镜(Olympus)、微量加样
器(德国 Eppendor)。
1.2　实验方法
1.2.1　细胞株及培养条件　人白血病细胞 HL-60,由福
建医科大学附属协和医院基因工程实验室提供。用含
l0%胎牛血清的 RPMI1640培养液 ,置 37℃, 5%CO2 ,饱和
湿度的培养箱中培养 , 2 ～ 3d换液传代 1次。实验所用细
胞为状况良好的对数生长期细胞。
1.2.2　MTT法绘制细胞增殖曲线 　将 HL-60细胞密度
调整为 1×104 /mL,接种于 96孔培养板 ,每孔 180 μL。实
验设一个阴性空白对照以及 5个不同浓度的中华补血草
黄酮提取液的药物梯度 。实验组中 ,每孔加入不同浓度的
54 安徽农学通报 , AnhuiAgri.Sci.Bul.2011, 17(01)
DOI :10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2011.01.069
中华补血草黄酮提取液(用无血清 RPMI1640培养液配
制)20μL, 使中华补血草黄酮提取液终浓度分别为
3.125μg/mL、 6.25μg/mL、 12.5μg/mL、 25μg/mL、 50μg/
mL。阴性对照组加 180μL细胞 ,再加 20μL同浓度的无血
清 RPMI1640培养液。每组设 4个平行孔 ,置于 37℃、饱
和湿度 、体积分数为 5%的 CO2 培养箱中培养 ,分别孵育
24h、48h、72h后每孔加入 5mg/mL的 MTT溶液 20μL,继
续孵育 4h后 ,小心吸去上清液 ,每孔加入二甲基亚砜
(DMSO)150μL,振荡至结晶溶解后 ,置酶标仪上测定
492nm和 630nm双波长处光度值(OD)。根据吸光值计算
出各实验组细胞存活率和抑制率 ,再计算 IC50值 [ 5] (IC50
值为使细胞存活率下降 50%的药物浓度)。 IC50 =lg-1
[ Xm-i(∑p-0.5)] ,重复 3次 ,取平均值 。其中 Xm:设
计的最大浓度的对数值;i:各浓度倍比数的对数值;∑p:
各组生长抑制率之和;0.5:经验常数 。
细胞增殖抑制率(%)=(1-用药组平均 OD值 /对照
组平均 OD值)×100。
2　结果与分析
表 1　不同浓度黄酮化合物作用 HL-60细胞 48h后
MTT检测结果(x±s)
黄酮提取液浓渡(μg/mL) OD值 抑制率(%)
阴性对照组 0.5755±0.012152
50 0.04925±0.015945＊ 91.44
25 0.18975±0.00877＊ 67.03
12.5 0.3335±0.016703＊ 42.05
6.25 0.4145±0.005745＊ 27.98
3.125 0.452±0.01201＊ 21.46
　　注:＊表示与对照组比较 P<0.01。
图 1　不同浓度黄酮提取液作用后 HL-60细胞的生长曲线
2.1　实验结果　通过比较 ,显微镜下可明显观察到空白
对照组中培养液仍为红色 ,则说明培养液无污染及 96孔
板无污染 。而不同浓度的中华补血草黄酮提取液作用人
白血病细胞 HL-60处理 48h后 , HL-60细胞的生长受到
不同程度的抑制 ,并且随着浓度的升高抑制作用逐渐加
强 ,呈现明显的量效关系 ,其中 50μg/mL浓度的实验组效
果最明显。通过计算 ,可知中华补血草黄酮提取液作用
HL-60细胞 48h的半数抑制浓度(IC50)为 11.55μg/mL,
同一时间里随着浓度的增大其抑制作用越明显 ,呈明显的
量效关系。结果见表 1和图 1。
2.2　结果分析与讨论　MTT比色法是一种检测细胞存活
和生长的方法 [ 4] 。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀
酸脱氢酶能使外源性的 MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶
物 formazan并沉积在细胞中 ,而死细胞无此功能。二甲基
亚砜(DMSO)能溶解细胞中的 formazan。用酶联免疫检测
仪在 490nm波长处测定其光吸收值 ,可间接反映活细胞数
量;在一定的范围内 , MTT结晶物形成的量与细胞数成正
比。其特点是灵敏度高 、重复性好 、操作简便 、经济 、快速 、
自动化 、无放射性污染 、与其他检测细胞活力方法有良好
的相关性。
通过研究结果表明 ,黄酮类化合物可抑制体外培养的
HL-60白血病细胞的生长 ,并且随着黄酮提取液浓度的
升高抑制作用逐渐加强 ,呈现明显的量效关系 ,其中
50μg/mL浓度的实验组效果最明显 ,而补血草黄酮提取物
诱导 HL-60细胞凋亡的研究及其机制探讨有待下一步
研究。
目前 ,对白血病的治疗主要着眼于强效化疗 ,但临床
治疗中随着治疗的多次进行 ,肿瘤对化疗药的敏感性降
低 ,耐药性增加 ,用药效果差 ,副作用明显 ,以致许多患者
不能耐受根治量化疗 。通过中华补血草黄酮类化合物体
外抑制白血病细胞 HL-60的增殖的初探可以发现 ,黄酮
化合物可能具有多方面 、多环节的抗肿瘤综合效应 ,可以
用于白血病患者的辅助治疗 ,具有良好的开发应用前景 ,
值得进一步开展临床研究。
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55　 17卷 01期 张铭清　中华补血草黄酮抑制白血病细胞增殖的初探