全 文 :2008 年 6 月第 15 卷第 6期 中国中医药信息杂志 ·45·
不同采收期合欢皮与山合欢皮中总皂苷含量比较
李 洁
(山东中医药大学,山东 济南 250014)
摘要:目的 比较不同采收期合欢皮与山合欢皮中总皂苷的含量。方法 采用分光光度法对不同采收期的合欢
皮与山合欢皮中总皂苷含量进行测定。结果 一年生合欢皮与二年生合欢皮总皂苷含量比较,P <0.05;二年生合欢
皮与多年生合欢皮总皂苷含量比较,P >0.05;多年生合欢皮与多年生山合欢皮总皂苷含量比较,P <0.05。结论 不同
采收期合欢皮与山合欢皮中总皂苷的含量差异明显。
关键词:采收期;合欢皮;山合欢皮;总皂苷
中图分类号:R282 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2008)06-0045-01
Comparision of Saponin in Bark of Silktree Albizziae and Bark of Silktree Albizzae Kaldora from
Different Collection Periods LI Jie (Shandong University of TCM, Jinan 250014, China)
Abstract:Objective To compare the content of saponin in Bark of Silktree Albizziae and Bark of Silktree
Albizziae kaldora derived from different collection periods. Method Spectrophotometry was used to
determine the contents of saponin. Result The contents of saponin in one-year Bark of Silktree Albizziae is
different from two-year Bark of Silktree Albizziae (P <0.05). The contents of saponin in two-year Bark of
Silktree Albizziae is the same as multi-year Bark of Silktree Albizziae (P >0.05). The contents of saponin in
multi-year Bark of Silktree Albizziae is different from multi-year Bark of Silktree Albizziae kaldora (P <0.05).
Conclusion The content of saponin in Bark of Silktree Albizziae and Bark of Silktree Albizziae kaldora
derived from different collection periods is quite different.
Key words:collection periods;Bark of Silktree Albizziae;Bark of Silktree Albizziae kaldora;saponin
合欢皮为豆科植物合欢 Albizia julibrissin Durazz.的
干燥树皮,具有解郁安神、活血消肿的功能,用于心神不安、忧
郁失眠、肺痈疮肿、跌扑伤痛等症[1]。据调查,在商品药材中,
以同属植物山合欢 Albizia kalkora (Roxb.) Prain 皮代替合
欢皮应用的现象时有发生,但 2005 年版《中华人民共和国药
典》(一部)只把合欢皮作为正品收载,而山合欢皮属于混淆品。
皂苷类化合物是合欢皮中主要的有效成分,皂苷含量的高低直
接影响着合欢皮药物的疗效。为了解不同采收期合欢皮与山合
欢皮中总皂苷含量的差别,本试验对一年生、二年生与多年生
的合欢皮与山合欢皮中总皂苷进行了测定比较,为新药研究和
充分利用合欢皮药材资源提供一定的参考依据。
1 材料
1.1 药物
合欢 Albizia julibrissin Durazz.与山合欢 Albizia
kalkora (Roxb.) Prain 一年生、二年生与多年生的树皮采自
济南郊区,由山东中医药大学药学院生药系石俊英教授鉴定。
齐墩果酸对照品,中国药品生物制品检定所提供,批号 110709-
200604。
1.2 仪器与试剂
UV-2201 型紫外可见分光光度计(日本岛津),MA110 型电子
天平,DZKW-C 型电子恒温水浴箱。试验所用试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 测定波长的选择
齐墩果酸与香草醛浓硫酸加热反应生成物在 540 nm 处显
示最大吸收波长。由于合欢皮与山合欢皮所含皂苷均为三萜皂
苷,且为齐墩果烷型[2],与香草醛浓硫酸加热反应生成物的最
大吸收波长与齐墩果酸一致,故选定齐墩果酸为标准对照
品,540 nm 为测定波长。
2.2 供试品溶液的制备
合欢皮与山合欢皮粉碎过 40 目筛,60 ℃恒温烘 2 h,置干
燥器中备用。精密称取样品各 2 g,置索氏提取器中,加甲醇适
量,回流提取至无皂苷反应(约 7 h),减压回收甲醇,用适量水
溶解残渣,转移至分液漏斗中,乙醚脱脂,用水饱和的正丁醇萃
取 4 次,合并正丁醇萃取液,减压回收正丁醇,残渣用少量甲醇
溶解,过滤,滤液置 10 mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为
供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备
精密称定干燥至恒重的齐墩果酸适量,用甲醇制成每 1 mL
含 1.22 mg 的溶液,作为对照品溶液。
2.4 标准曲线的制备
精密量取齐墩果酸对照品溶液 20、40、60、80、100 µL,
分别置于试管中,挥干;精密加入 8%香草醛乙醇溶液 0.5 mL
和 72%硫酸溶液 5 mL,摇匀,置恒温水浴 60 ℃加热 10 min,取
出试管,置冰水浴中冷却 15 min。分别于 540 nm 处测吸收光
度值。以吸光度值为纵坐标,取样量为横坐标绘制标准曲线。
其回归方程为:Y=7.52×10-3X-0.024 4,r=0.999 3。
2.5 回收率测定
称取合欢皮样品2份,其中1份加齐墩果酸一定量,并依上
法处理与测定,重复5次,其平均回收率为96.9%,RSD=1.69%,
结果见表1。 (下转第48页)
·48· Chinese Journal of Information on TCM Jun.2008 Vol.15 No.6
提取三七皂苷的基本方法有乙醚除脂、甲醇提取、水饱和的正
丁醇和氨试液萃取[1],此方法提取繁琐,所用试剂较多,耗时。
有大孔树脂的方法[2],但对被测成分有损失,且耗时,不适合此
实验。通过几种方法的比较最后确定:乙醚回流 2 h,甲醇超
声提取。此方法简便快捷,提取有效率高,节省时间,节约试剂。
3.2 流动相的选择
关于 HPLC 测定三七中皂苷类成分的含量方法,文献报道
较多。《中华人民共和国药典》中人参皂苷 Rg1 等含量测定采
用乙腈-0.05%磷酸溶液(99∶400)[3],文献[4]采用甲醇-水
(72∶28)为流动相系统,结果三七皂苷均不能达到基线分离。
在实验的研究过程中通过采用不同比例的乙腈-0.05%磷酸溶
液[5-6]、乙腈-水[7]或甲醇-水[8]梯度洗脱,用乙腈-水[8-9]或乙腈-
0.05%磷酸溶液梯度洗脱[10]等,结果表明,以乙腈-0.05%磷酸
溶液 0 min(20∶80)-20 min(40∶60)-30 min(20∶80)为流动
相,三七皂苷 R1及人参皂苷 Rg1、Rb1 峰的相对保留时间适中,
分离效果较好。
本试验建立了 HPLC 法测定抗瘤丸中三七总皂苷 R1、人参
皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1含量的方法[11],简便、准确、重现性好,
为制定该制剂质量标准提供了依据。
参考文献:
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(收稿日期:2007-10-31)
(修回日期:2007-12-03,编辑:陈静)
(上接第 45 页)
表 1 回收率试验结果
加入齐墩果
酸量(mg)
测得齐墩果
酸量(mg)
回收率测得值
(%)
均值(%) RSD(%)
6.9 6.82 98.80
6.9 6.92 94.60
6.9 6.68 96.87
6.9 6.63 96.09
6.9 6.73 97.97
96.9±1.635 1.69
2.6 样品含量的测定
吸取合欢皮、山合欢皮供试品溶液各 50 µL 和对照品溶液
40 µL,分别置于试管中,挥干,各精密加入 8%香草醛乙醇溶液
0.5 mL,72%硫酸 5 mL,摇匀,置 60 ℃恒温水浴加热 10 min,取
出试管,置冰水浴中冷却 15 min,以溶剂 50 µL 代替供试品溶
液的同样操作制备液为空白对照,在波长540 nm处测定吸收度,
计算,即得。结果见表 2。
表 2 不同采收期合欢皮与山合欢皮中总皂苷含量测定结果
样品 n 总皂苷含量(%)
一年生合欢皮 6 0.715±0.154*
二年生合欢皮 6 1.391±0.216
多年生合欢皮 6 1.529±0.175#
一年生山合欢皮 6 0.504±0.087
二年生山合欢皮 6 0.916±0.104
多年生山合欢皮 6 1.104±0.223
注:与二年生合欢皮比较,*P <0.05;与多年生山合欢皮比较,#P <0.05
3 讨论
本试验含量测定方法的选择是根据文献[2-3],利用合欢
皮总皂苷均为三萜皂苷,且为齐墩果烷型,故采用硫酸-香草醛
比色法测定合欢皮总皂苷的含量,经检测,合欢皮总皂苷的最
大吸收波长与齐墩果酸一致,故选定齐墩果酸为标准对照品。
样品提取方法的选择是根据查阅的文献并结合一定的预试验,
采用提取皂苷的通法,用甲醇提取、乙醚脱脂、正丁醇少量多
次萃取得总皂苷。本试验采用比色法测定合欢皮中总皂苷的含
量,操作简便,且具有较好的稳定性和重现性。
针对目前商品药材中合欢皮与山合欢皮混用的现象,采用
比色法来测定合欢皮、山合欢皮总皂苷的含量。结果山东产二
年生合欢皮与二年生山合欢皮、多年生合欢皮与多年生山合欢
皮比较总皂苷含量均有显著差异(P <0.05)。一年生、二年生与
多年生的合欢皮进行比较,一年生合欢皮与二年生合欢皮有显
著差异(P <0.05),二年生合欢皮与多年生合欢皮无显著差异
(P >0.05)。考虑到保护生态资源,采收合欢皮应以多年生为宜。
参考文献:
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出
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(收稿日期:2007-10-22,编辑:华强)