全 文 ：华山参中东莨菪内酯的含量测定方法研究
娄玉霞1，聂桂华2，李振国2
*
(1．河南中医学院药学院，郑州 450003;2．河南省食品药品检验所，郑州 450003)
摘要 目的:建立高效液相色谱法测定华山参中东莨菪内酯含量的方法。方法:色谱柱:Agilent ODS C18柱(250 mm ×4. 6 mm，
5 μm) ，流动相:甲醇 － 0. 3%磷酸溶液(30∶ 70) ，柱温:35℃，流速:1. 0 mL·min －1，测定波长:344 nm。结果:东莨菪内酯的线
性范围:9. 84 ～ 1476. 0 ng(r = 0. 99998) ;平均回收率在 97. 2% ～ 100. 7%，RSD为 1. 4%(n = 6)。结论:本方法准确、可靠，重复
性好，可用于华山参药材的质量控制。
关键词: 高效液相色谱;华山参;东莨菪内酯;含量测定;中药材;茄科
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2011)06 － 1137 － 03
HPLC determination of scopoletin in Physochlainae Radix
LOU Yu － xia1，NIE Gui － hua2，LI Zhen － guo2*
(1． College of Pharmacy，Henan College of Traditional Chinese Medicine;Zhengzhou 450008，China;
2． Henan Institute for Food and Drug Control，Zhengzhou 450003，China)
Abstract Objective:To develop a method for the determination of scopoletin in Physochlainae Radix by HPLC．
Methods:The separation was carried out on the Agilent ODS C18 column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)． The mobile
phase was methanol － phosphoric acid buffer (30∶ 70)． The flow rate was 1. 0 mL·min －1 ． The column temperature
was set at 35 ℃ and the detecting wavelength was 344 nm． Results:The linearity range of scopoletin was from 9. 84
to 1476. 0 ng (r = 0. 99998)． the recovery was 97. 19% － 100. 70% with RSD 1. 4% (n = 6)． Conclusion:The
method was accurate，reliable and good reproducibility to control the quality of Physochlainae Radix．
Key words:HPLC;Physochlainae Radix;scopoletin;determination;traditional Chinese medicine;solanaceae
华山参为茄科植物漏斗泡囊草 Physochlaina in-
fundibularis Kuang 的干燥根，具有平喘止咳，安神镇
惊的作用，适用于寒痰咳喘，心悸失眠易惊等症［1］。
文献［2 ～ 4］报道，华山参中含有阿托品、东莨菪碱等生
物碱类成分以及东莨菪内酯、氨基酸、多糖、挥发性
等成分。在评价华山参药材及制剂的内在质量时，
多选用生物碱类成分为含量测定指标［1］，而东莨菪
内酯具有抗炎镇痛［5］、利尿平喘［6］等作用，是华山
参中的重要活性成分，以华山参中东莨菪内酯作为
指标，建立准确可行的定量分析方法，对有效评价华
山参的内在质量具有实际意义和研究价值。本文采
用高效液相色谱法进行了华山参中东莨菪内酯的含
量测定方法研究，为华山参及其制剂的质量控制提
供检验方法和依据。所建立的分析方法操作简便，
重现性好，分析快速准确。
1 仪器及试药
1. 1 仪器 2690 高效液相色谱仪、996 二极管阵列
检测器(美国 Waters 公司) ，1100 系列高效液相色
谱仪(美国 Agilent 公司) ，AE 240 型电子分析天平
(瑞士 Mettler公司) ，KQ － 300 型超声波清洗器(昆
山超声仪器有限公司)。
1. 2 试剂 甲醇为色谱纯(德国 Merck 公司) ，水
为重蒸馏水，其他试剂为分析纯;东莨菪内酯对照品
(批号 110768 － 200504，为含量测定用对照品)购自
中国药品生物制品检定所。
1. 3 样品 供试药材来源见表 1，经河南省食品药
品检验所中药室雷留成副主任药师鉴定均为茄科植
物漏斗泡囊草 Physochlaina infundibularis Kuang 的
干燥根。
—7311—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(6)
* 通讯作者 Te;:(0371)63388168;E － mail:hnyj111@ yahoo． com． cn
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Agilent ODS C18(250 mm × 4. 6 mm，5
μm) ;流动相:甲醇 － 0. 3%磷酸溶液(30 ∶ 70) ，柱
温:35 ℃;检测波长:344 nm;进样量:10 μL。紫外
光谱和 HPLC色谱图见图 1。
图 1 东莨菪内酯的紫外光谱图和高效液相色谱图
Fig 1 UV spectra and HPLC chromatograms of scopoletin
A．样品(sample) B．东莨菪内脂(scopoletin)
1．东莨菪内酯(scopoletin)
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取东莨菪内酯对照品
2. 46 mg，置 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度，制成每 1 mL 含东莨菪内酯 98. 4 μg 的溶液，作
为对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液 精密称取华山参细粉 0. 5 g，
置具塞三角瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定重量，
放置 1 h后超声(功率 300 W，频率 40 kHz)处理 1
h，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，
过滤，续滤液用 0. 45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 3 线性关系考察 精密吸取“2. 2. 1”项下对照
品溶液 0. 1，0. 5，1，5，10，15 μL，分别注入液相色谱
仪，按上述条件测定东莨菪内酯吸收峰峰面积积分
值，并以进样量为横坐标(X) ，峰面积积分值为纵坐
标(Y) ，进行线性回归，绘制标准曲线。东莨菪内酯
的回归方程为:
Y = 4. 190 × 103X + 12. 357 r = 0. 99998
结果表明，东莨菪内酯进样量在 9. 84 ～ 1476. 0 ng
范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，重复进样 6 次，测定峰面积并计算 RSD，结果
RSD为 2. 0%。结果表明，本方法精密度较好。
2. 5 准确度 取已知含量的华山参样品(东莨菪
内酯的含量为 0. 1093%)6 份，每份 0. 25 g，精密加
入东莨菪内酯对照品的甲醇溶液(0. 0114 mg·
mL －1)25 mL，以下按“2. 2. 2”项下平行操作，制得加
样供试品溶液 6 份。吸取加样供试品溶液 10 μL，
注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定东莨菪内酯
的含量，计算加样回收率，结果平均回收率(n = 6)
为 98. 5%，RSD为 1. 4%。
2. 6 耐用性试验
2. 6. 1 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在
0，2，5，7，10，12 h进样，测定峰面积，结果东莨菪内
酯的平均峰面积为 948. 03，RSD = 0. 92%。表明供
试品溶液在 12 h内稳定性较好。
2. 6. 2 不同商品规格的色谱柱试验 取同一供试
品溶液，按上述色谱条件，分别试用 Agilent ODS
C18、Ultimate XB － C18和 Waters SunFire C18等不同品
牌的色谱柱测定其含量，结果测得平均含量为
0. 111 7%，RSD =0. 92%。结果表明，所建立方法在
不同色谱柱上均有良好的适用性，耐用性较好。
2. 7 检测限与定量限
2. 7. 1 检测限 按上述色谱条件，分别进样空白溶
剂和已知浓度的对照品溶液，根据相对应的峰高值，
将对照品稀释至约 3 倍的信噪比浓度，测得东莨菪
内酯的检测限浓度为 0. 492 μg·mL －1。
2. 7. 2 定量限 按上述色谱条件，分别进样空白溶
剂和已知浓度的对照品溶液，根据相对应的峰高值，
将对照品稀释至约 10 倍的信噪比浓度，即为定量限
浓度，为 1. 476 μg·mL －1，重复进样 6 次，RSD 为
0. 8%。
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2. 8 样品测定
取收集到的华山参药材样品按照质量标准正文
含量测定项下的方法进行含量测定，结果见表 1。
表 1 华山参样品含量测定结果
Tab 1 The contents of scopoletin in Physochlainae Radix
产地(或来源)
(resources)
含量
(content)/%
河南天方药业股份有限公司(Henan Topfond Pharma-
ceutical Co． Ltd．)
0. 178
山东省蒙城县(Mengcheng，Shandong Province) 0. 036
河南天方药业股份有限公司(Henan Topfond Pharma-
ceutical Co． Ltd．)
0. 109
河南省舞阳市(Wuyang，Henan Province) 0. 298
河南(Henan Province) 0. 127
湖北(Hubei Province) 0. 104
河南登封嵩山(Song Mountain，Henan Province) 0. 022
河南(Henan Province) 0. 112
贵州(Guizhou Province) 0. 131
3 讨论
3. 1 供试品溶液的制备方法研究
3. 1. 1 提取溶剂的选择 在试验中，分别试用了
50%甲醇溶液、70%甲醇溶液、95%甲醇溶液和甲醇
为提取溶剂，对同一批华山参药材进行提取，结果甲
醇和 95%甲醇溶液的提取率较高，因此，选用甲醇
为提取溶剂，制备供试品溶液。
3. 1. 2 提取方式和时间的选择 在试验中，分别比
较了超声处理、浸泡和加热回流等常用提取方式，并
比较了不同的提取时间对东莨菪内酯提取率的影
响，结果放置 1 h 后，超声(功率 300 W，频率 40
kHz)处理 1 h的方法提取率最高，且方法简单易行，
因此，选择该方法制备供试品溶液。
3. 1. 3 提取溶剂用量的选择 取同一样品 0. 5 g(3
份) ，分别精密加入甲醇 10，25，50，100 mL，放置 1 h
后，超声(功率 300 W，频率 40 kHz)处理 1 h，用甲
醇补足减失的重量，测定东莨菪内酯含量，结果各样
品含量基本一致，无显著性差异，为保证有效成分的
充分提取，选择甲醇用量为 25 mL。
3. 2 色谱条件的优选
3. 2. 1 流动相的选择 在试验中，分别比较了不同
配比的甲醇 － 0. 4%醋酸铵溶液和甲醇 － 0. 3%磷酸
溶液，结果以本文所选用方法，即甲醇 － 0. 3%磷酸
溶液(30∶ 70)最佳，采用该流动相，样品中的东莨菪
内酯峰形对称，保留时间适宜，与杂质峰可达到基线
分离。
3. 2. 2 检测波长的选择 分别吸取东莨菪内酯对
照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，在 200 ～
400 nm进行光谱扫描，东莨菪内酯对照品溶液及供
试品溶液主峰的光谱一致，均在 344 nm处有强紫外
吸收，因此选定 344 nm为测定波长。
3. 3 分析方法的验证研究 按药典有关规定［7］，
进行了检测限与定量限、线性范围、精密度、准确度
和耐用性等相关方法学考察，结果表明，本文所建立
华山参中东莨菪内酯的含量测定方法准确可靠，方
法学考察结果符合有关规定，可用于华山参的定量
控制，并可为今后相关制剂的质量评价提供参考。
3. 4 样品含量测定结果分析 由测定结果可知，不
同来源的华山参中东莨菪内酯含量差异较大，可在
0. 020% ～ 0. 298%之间，考虑到东莨菪内酯为华山
参中的重要活性成分，为保证华山参临床疗效，应对
其进行定量控制。
参考文献
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7 ChP (中国药典). 2005，Vol Ⅰ(一部) :114
(本文于 2011 年 2 月 18 日收到)
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