全 文 ：[ 基金项目] 内蒙古医学院蒙药现代化研究重大项目资助(MX2005ZB010)
紫外-可见分光光度法测定
紫花高乌头中乌头碱的含量
任文栓1 ,马　佳2 ,常福厚2
(1.内蒙古自治区医院医务科 ,内蒙古　呼和浩特　010017;
2.内蒙古医学院药学院 ,内蒙古　呼和浩特　010059)
[摘要] 目的:测定紫花高乌头中乌头碱的含量 ,为蒙药紫花高乌头中乌头碱的含量的测定提供方法 ,制
定质控标准 。方法:采用紫外-可见分光光度法 ,在 520 nm 的波长处测定吸光度 ,从标准曲线上读出供试
品溶液中酯型生物碱的重量。结果:乌头碱浓度在 15.1 ～ 75.5μg/ml范围内呈良好的线性关系。回归方程
为Y=0.0086 X+0.13 , r=0.9993 ,本品每克含酯型生物碱不得超过5 mg 。结论:采用紫外-可见分光光度
法测定紫花高乌头中乌头碱的含量 ,具有操作简便 、结果准确的特点 。
[关键词] 紫花高乌头;乌头碱;紫外-可见分光光度法;含量测定
　　[ 中图分类号] R734.2　[ 文献标识码] A　[ 论文编号] 1004-0951(2010)02-0136-04
Ultraviolet - visible Spectrophotometry Determine Content of
Aconitine in Aconitum Excelsum Rrichb
REN Wen-shuan1 ,MA Ja2 ,CHANG Fu-hou 2
(1.Department of Medicine , Inner Mongolia Hospital , Huhhot 010017 China ;
2.Department of Pharmacology , Inner Mongolia Medical College , Huhhot 010059 China)
[ Abstract]Objective:To determine the content of aconitine in Aconitum excelsum Rrichb.Methods:Ultra-
violet - visible spect rophotometry w as to used to measure absorbance in the w avelength of 520nm and to com-
pute the weight of the ester-ty pe alkaloids.Results:Concentration of aconi tine wi thin 15.1 ～ 75.5 μg/ml ap-
pears the favorable linear relationship.The reg ression equation w as Y = 0.0086X+0.13 r = 0.9993 , this
product contains ester-type alkaloids per g ram may no t be over 5 mg .Conclusion:The ultraviolet - visible
spectrophotometry w as the simple and accurate method to determine the content of aconitine in Aconitum excel-
sum Rrichb.
[ Key words]Aconitum excelsum rrichb;Aconitine;Ultraviolet - visible spectrophotometry ;Determination
of content
　　紫花高乌头为毛茛科植物紫花高乌头 Aconi-
tum excelsum Rrichb.的全草 。蒙药名为宝日-泵
嘎 ,收载于《中华医学百科全书》(蒙医分卷)、《认药
白晶鉴》 、《无误蒙药鉴》中 。具有止咳 、清肺之功效 ,
主治流感 、肺感 、肺热 、瘟疫等作用[ 1] 。其中乌头碱
既是其有效成分 ,也是其毒性成分 ,中国药典[ 2] 采
用紫外 -可见分光光度法(《中国药典》2005年版
一部 附录 V A)检查乌头碱的含量 ,以控制蒙药材
紫花高乌头的质量 。
1　实验材料及仪器设备
1.1　仪　器
UV-1601紫外分光光度计(SHMADZU COR-
PO.RAT ION)。
1.2　实验材料
紫花高乌头采自内蒙古赤峰市克什克腾旗大局
136 内蒙古医学杂志 Inner Mongolia Med J 2010年第 42卷第 2期
DOI :10.16096/j.cnki.nmgyxzz.2010.02.001
子林场 、赤峰市克什克腾旗红山子乡 、赤峰市宁城
县 ,经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞秀生教
授鉴定为毛茛科植物紫花高乌头 Aconi tum excel-
sum Rrichb的全草 。方法学考察中均采用赤峰市克
什克腾旗大局子林场所采集到的样品。乌头碱对照
品(中国药品生物制品检定所提供 ,批号:110720-
200308);乙醚 、氨试液 、三氯甲烷 、0.05 mol/ L 硫酸
溶液 、无水乙醇 、碱性盐酸羟胺试液 、高氯酸铁试液 、
高氯酸试液。
2　实验方法
2.1　试剂及溶液的配置
试剂的制备 。 ①碱性盐酸羟胺试液:取氢氧化
钠12.5 g ,加无水甲醇使溶解成 100 ml。取盐酸羟
胺 12.5 g ,加无水甲醇 100 ml加热回流使溶解。临
用时将两液等量混合 ,滤过即得。 ②高氯酸铁试液:
取 70%高氯酸 10 ml ,缓缓分次加入铁粉 0.8 g ,微
热使之溶解 ,放冷 。加无水乙醇稀释至 100 ml 即
得。用时临时取上液 20 m l ,加 70%高氯酸 6 m l ,用
无水乙醇稀释至 500 ml。
对照品溶液的配制 。精密称取乌头碱对照品
7.5 mg ,置 10 ml容量瓶中 ,用无水乙醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得(每1 ml中含乌头碱0.752 mg)。
供试品溶液的制备 。取本品粗粉 1 g ,精密称
定 ,置具塞锥形瓶中 ,加乙醚 25 ml与氨试液 2 ml ,
密塞 ,摇匀 ,放置过夜 ,滤过 ,药渣加乙醚 25 ml ,连
续振摇 1 h ,滤过 ,药渣再用乙醚洗涤 3 次 ,每次 10
ml ,滤过 ,洗液与滤液合并 ,低温蒸干。残渣加三氯
甲烷 2 ml ,使溶解 ,转入分液漏斗中 ,用三氯甲烷 3
ml分次洗涤容器 ,洗液并入分液漏斗中 , 用 0.05
mol/L 硫酸溶液萃取 3次 ,每次 5 ml ,酸液依次用同
一三氯甲烷 10 ml振摇洗涤 ,合并酸液 ,加氨试液调
pH值至 9 ,再用三氯甲烷萃取 3次 ,每次 10 ml ,三
氯甲烷液依次用同一水 20 ml振摇洗涤 ,合并三氯
甲烷液 ,低温蒸干 ,残渣加无水乙醇适量使溶解 ,转
入 5 ml量瓶中 ,用无水乙醇分次洗涤容器 ,洗涤液
并入量瓶中 ,再加无水乙醇至刻度 ,摇匀 。精密量取
上述溶液及无水乙醇空白溶液各 2.5 ml ,分别置 25
ml量瓶中 ,各精密加入碱性盐酸羟胺试液 1.5 ml ,
摇匀 ,在 60℃～ 65℃水浴中保温 10 min ,放冷 ,加高
氯酸铁试液 13 ml ,摇匀 ,放置 5 min ,精密加入高氯
酸试液 8 ml ,用高氯酸铁试液稀释至刻度 ,摇匀 ,放
置15 min ,以相应试剂为空白。照紫外-可见分光
光度法(《中国药典》2005年版 一部 附录 V A)在
520 nm 的波长处测定吸光度 ,从标准曲线上读出供
试品溶液中酯型生物碱的重量 ,计算 ,即得。
2.2　测定方法的选择
采用分光光度法对酯型生物碱进行含量测定。
取紫花高乌头供试品溶液 ,在 49 ～ 550 nm 波长范
围内测定吸光度 ,供试品溶液在波长 520 nm 处有
最大吸收 ,故选择 520 nm 波长为测定波长。
2.3　标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 0.50 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5
ml分别置 25 ml量瓶中 ,均加无水乙醇使成 2.5
ml ,各精密加入碱性盐酸羟胺试液 1.5 ml ,摇匀 ,在
60 ～ 65℃水浴中保温 10 min ,放冷 ,加高氯酸铁试
液 13 ml ,摇匀 ,放置 5 min ,精密加入高氯酸试液 8
ml ,用高氯酸铁试液稀释至刻度 , 摇匀 , 放置 15
min ,以相应试剂为空白 ,照紫外-可见分光光度法
(附录 V A)在 520 nm 的波长处测定吸光度 ,以吸光
度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 。
2.4　提取次数的考察
为保证被测成分在三氯甲烷萃取过程中能全部
提净 ,实验研究中对三氯甲烷萃取程度作了考察 ,并
按正文测定方法进行检查 , 提取 3次 ,酯型生物碱
含量已基本不变 ,故将提取此时定为 3次 。
2.5　线性关系的考察
精密称取乌头碱对照品 7.52 mg ,置 10 ml容量
瓶中 ,用无水乙醇溶解并稀释至刻度 。精密量取对
照品溶液 0.50 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5 ml分别置 25 ml
量瓶中 ,均加无水乙醇使成 2.5 ml ,各精密加入碱
性盐酸羟胺试液 1.5 ml ,摇匀 ,在 60 ～ 65℃水浴中
保温 10 min ,放冷 ,加高氯酸铁试液 13 ml ,摇匀 ,放
置 5 min ,精密加入高氯酸试液 8 ml ,用高氯酸铁试
液稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min ,以相应试剂为空
白 ,照紫外-可见分光光度法(附录 V A)在 520 nm
的波长处测定吸光度 ,以吸光度为纵坐标 ,浓度为横
坐标 ,绘制标准曲线。
2.6　稳定性试验
取同一份供试品溶液 ,按含量测定法操作 ,分别
于 0 、10 、20 、30 、40 、50 、60 min测定 ,酯型生物碱在1
h内较为稳定 。
2.7　重复性试验
赤峰市克什克腾旗大局子林场(7月 25日),各
约 1 g ,精密称定 ,分别按含量测定方法项下操作 ,测
定每份含量 ,样品中酯型生物碱含量重现性良好 。
2.8　精密度试验
取同一份供试品溶液 ,按含量测定法操作 ,一份
样品 5次测得的含量 ,样品中酯型生物碱含量精密
度实验结果良好。
2.9　加样回收试验
取赤峰市克什克腾旗大局子林场(7月 25 日),
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各约 0.5 g , 精密称定 ,分别加入酯型生物碱标准品
溶液(0.2 mg/ml)1.5 ml ,分别按含量测定方法项下
操作 ,测定每份含量 。
3　结　果
实验结果表明浓度在 15.1 ～ 75.5 μg/ml范围
内呈良好的线性关系 。回归方程为 Y=0.0086X+
0.13 , r=0.9993 ,标准曲线见表 1。
样品中酯型生物碱含量加样回收结果见表 2 。
表 1　标准曲线数值表
对照品浓度
(μg/ml) 15.1 30.2 45.3 60.4 75.5
吸光度(A) 0.125 0.262 0.381 0.524 0.645
表 2　样品中酯型生物碱含量加样回收实验结果
样品号 取样量(g) 样品含量(mg/g) 加入量(mg) 实测含量(mg/ g) 回收率(%) 平均(%) RSD(%)
1 0.5073 0.2961 0.3 0.5902 98.043
2 0.5017 0.2928 0.3 0.5873 98.164
3 0.4998 0.2917 0.3 0.5786 95.627 97.36 1.82
4 0.4997 0.2917 0.3 0.5902 99.522
5 0.5008 0.2923 0.3 0.5786 95.432
　　取本品按含量测定项下的方法处理并测定 ,三 产地 10批样品的测定结果见表 3。
表 3　样品中含量测定结果
供试品来源 取样量(g) 吸光度(A) 含量(mg/g) 平均含量(mg/ g)
赤峰市克什克腾旗大局子林场(7月 25日) 1.0037 0.909 4.512 4.521
1.0042 0.913 4.533
赤峰市克什克腾旗大局子林场(7月 29日) 1.0086 0.921 4.560 4.557
1.0074 0.919 4.553
赤峰市克什克腾旗大局子林场(8月 3日) 1.0035 0.907 4.501 4.496
1.0021 0.904 4.491
赤峰市克什克腾旗大局子林场(8月 17日) 1.0057 0.915 4.538 4.524
1.0042 0.909 4.510
赤峰市克什克腾旗红山子乡(7月 27日) 1.0057 0.913 4.527 4.524
1.0044 0.911 4.521
赤峰市克什克腾旗红山子乡(8月 19日) 1.0020 0.908 4.514 4.523
1.0031 0.912 4.532
赤峰市克什克腾旗红山子乡(8月 25日) 1.0036 0.914 4.542 4.533
1.0027 0.910 4.523
赤峰市宁城县(7月 24日) 1.0041 0.921 4.580 4.571
1.0033 0.917 4.561
赤峰市宁城县(8月 3日) 1.0035 0.919 4.571 4.540
1.0022 0.907 4.508
赤峰市宁城县(8月 15日) 1.0045 0.912 4.526 4.542
1.0052 0.918 4.558
138 内蒙古医学杂志 Inner Mongolia Med J 2010年第 42卷第 2期
　　从表中数据可见 ,三产地 10批紫花高乌头中酯
型生物碱的含量在 4.571 mg/g 以下 ,考虑到各地
药材质量的差异 ,暂定本品每克含酯型生物碱 ,不得
超过 5 mg 。
4　讨　论
中药成分的提取多采用冷浸渗流法[ 3] 、煎煮
法[ 4] 、有机溶剂加热回流提取法[ 5] ,但提取的效果
不尽相同。曾采用苯加氨试液浸泡 ,放置过夜的方
法 ,对紫花高乌头进行提取 ,但效果不甚理想 。本实
验采用在碱性条件下用乙醚提取 ,提取液滤过后低
温挥干 。本法与上述其它方法比较提取较完全 ,而
且操作简便。有作者曾对紫花高乌头根中的二萜生
物碱进行了提取与鉴定[ 6 ,7] 。本研究同时建立了蒙
药材紫花高乌头的质量控制标准。实验结果显示 ,
采用紫外-可见分光光度法测定乌头碱的含量 ,结
果准确 ,重现性好 ,为蒙医药的临床应用提供了更为
有效的检测方法 。
[参 考 文 献]
[ 1] 　王晋 ,乔俊缠 ,任常胜 ,等.蒙药紫花高乌头微量元素的含量测
定[ J] .中国民族医药杂志 , 2001 , 7(3):34.
[ 2] 　中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典
[ M] .一部.北京:化学工业出版社 , 2005:189.
[ 3] 　宁红梅 ,吴刚 ,赵树忠.蒙药地格达伊苏的微量元素分析[ J] .中
国民族医药杂志 ,2004 ,(1):26-27.
[ 4] 　张晓文 ,刁景丽 ,邬林祥.薄层扫描法测定蒙药沙日嘎-4汤中
盐酸小檗碱的含量[ J] .中国民族医药杂志 , 1999 , 5(2):42.
[ 5] 　王焕云 ,高磊 ,杨树青.薄层扫描法测定蒙药查干汤中异土木香
内酯的含量[ J] .内蒙古医学院学报 , 2001 , 23(4):240-242.
[ 6] 　张树祥 ,贾世山.蒙药紫花高乌头根中二萜生物碱的分离与鉴
定[ J] .中草药 , 1999 , 30(9):641-643.
[ 7] 　张树祥 ,贾世山.蒙药紫花高乌头根中新二萜生物碱的分离和
鉴定[ J] .药学学报 , 1999, 34(10):762-76.
[ 收稿日期] 2009-11-16
[作者简介] 任文栓(1963-), 男 , 内蒙古土左默特旗人 。主
管药师。
[ 基金项目] 国家自然科学基金项目(No:30660206)
人乳腺癌Her-2癌基因蛋白分离纯化的研究
高艳伟1 ,高维实1 ,刘惠荣2 ,郭慧军1 ,曹天泽1 ,施晓辉3 ,马虎林3 ,汤明忠3
(1.内蒙古自治区医院肿瘤外科 ,内蒙古 呼和浩特　010017;
2.内蒙古农业大学 ,内蒙古 呼和浩特　010018;
3.内蒙古医学院 ,内蒙古 呼和浩特　010059)
[摘要] 目的:研究乳腺癌细胞中癌基因蛋白 Her-2的分离纯化方法。方法:采用裂解液裂解 、超声破
碎 、高速离心 、ConA Sepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析方法 ,从热休克处理后的乳腺癌细胞株中
分离纯化出癌基因蛋白 Her-2 ,通过 SDS-PAGE电泳及免疫印迹法检测进行蛋白分子质量及性质鉴定。
结果:检测结果证明纯化后获得的蛋白复合物中包含相对分子质量为 185 KD的蛋白 ,且能与抗 Her-2特
异单抗结合。结论:采用本方法可以获得相对纯度较高的 Her-2蛋白。
[关键词] 乳腺癌细胞株 ;Her-2 ;分离纯化
　　[ 中图分类号] R734.2　[ 文献标识码] A　[ 论文编号] 1004-0951(2010)02-0139-04
　　原癌基因Her-2/neu(C-erbB-2)是人类表皮生
长因子受体(EGFR)家族的第 2个成员 ,编码相对分子
质量 185 KD 的具有酪氨酸激酶的跨膜糖蛋白
(p185)[ 1] 。该基因在胎盘 、胚胎上皮组织及许多肿瘤细
胞中呈高表达 ,而在正常组织中为阴性或微量表达。
研究表明乳腺癌病人中 20%～ 30%Her-2癌基因呈
高表达[ 2] 。目前针对Her-2癌基因的乳腺癌靶向治
疗越来越受到人们重视。本次研究我们从乳腺癌
SKBR-3细胞株中分离纯化出Her-2癌基因蛋白 ,并
进行鉴定分析 ,为今后以Her-2癌基因为靶点的乳腺
癌靶向治疗研究奠定基础。
1　材　料
1.1　乳腺癌细胞株
139内蒙古医学杂志 Inner Mongolia Med J 2010年第 42卷第 2期