全 文 ：新疆展毛多根乌头中乌头碱分离及含量测定
闫晋晋1，王信隆2，廖国珍3，杨薪正4 (1．西安医学高等专科学校基础医学部，陕西西安 710309;2．西安交通大学医学院，陕西西安
710061;3．西安市第二人民医院，陕西西安 710003;4．西安医学高等专科学校药学系，陕西西安 710309)
摘要 ［目的］研究展毛多根乌头有效成分乌头碱的分离及定量测定技术，为展毛多根乌头的开发利用提供试验依据。［方法］以乙醚
为提取溶剂，从展毛多根乌头中分离其主要生物碱成分乌头碱(aconitine);采用改良异羟肟酸法，在波长 512． 6 nm波长处测定展毛多根
乌头中乌头碱的含量。［结果］展毛多根乌头中乌头碱的含量为 0． 360 6%，平均回收率为 97． 40 %。［结论］该定量分析方法简便、实
用，显色稳定性好，为展毛多根乌头的开发利用提供了科学依据。
关键词 展毛多根乌头(Aconitum karakolicum var． patentipilum W． T． Wang);乌头碱;含量测定
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2013)19 －08134 －02
Separation and Quantitative Determination of Aconitine in Aconitum karakolicum var． patentipilum W． T． Wang
YAN Jin-jin et al (Department of Basic Medicine，Xi’an Medical College，Xi’an，Shaanxi 710309)
Abstract ［Objective］Study on the effective component separation and quantitative determination technologies of aconitine in Aconitum kara-
kolicum var． patentipilum W． T． Wang，，which lays an experimental basis for the development and utilization of A． karakolicum． ［Method］
With ethyl ether as extraction solvent，and aconitine isolated from A． karakolicum，using modified hydroxyl oxime acid method，the content of
aconitine in A． karakolicum at 512． 6 nm wavelength was determined． ［Ｒesult］The content of aconitine is 0． 360 6%，the average recovery
rate is 97． 40% ． ［Conclusion］The quantitative analysis method is simple，practical，color stability，and provide scientific basis for the devel-
opment and utilization of A． karakolicum．
Key words Aconitum karakolicum var． patentipilum W． T． Wang;Aconitine;Content determination
基金项目 西安医学高等专科学校自然科学研究资金资助项目(No．
12072056)。
作者简介 闫晋晋(1983 －)，男，山西泽州人，硕士，从事中药化学与天然产
物化学成分研究工作，E-mail:yjj19841@ nwsuaf． edu． cn。
收稿日期 2013-04-12
展毛多根乌头(Aconitum karakolicum var． patentipilum
W． T． Wang)为毛茛科乌头属(Aconitum)植物［1］，主产于新疆
北部山区，资源丰富，是新疆民间常用草药之一，主要用于治
疗神经痛、牙痛和关节炎等［2］。展毛多根乌头中含有的生物
碱主要成分为乌头碱，此外还含有脱氧乌头碱、新乌头碱、准
噶 尔 乌 头 碱、欧 乌 碱、karakomine、karasamine 和 1-
benzoylkarasamine等。目前，对其主要成分乌头碱(aconitine)
的开发利用研究鲜有报道。为了合理开发利用展毛多根乌
头资源，笔者采用乙醚作为提取溶剂，用改良异羟肟酸法对
我国新疆展毛多根乌头中的主要生物碱成分乌头碱进行分
离及定量测定，以期为为临床使用展毛多根乌头提供科学
依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。试验材料于 2012年 9月采自新疆伊犁，
并由西安医学高等专科学校药学系廖国珍教授鉴定为展毛
多根乌头(Aconitum karakolicum var． patentipilum W． T．
Wang)。
1． 1． 2 主要仪器。UV －6300双光束紫外可见分光光度计，
购自上海 MAPADA 仪器有限公司;PHSJ － 5 型 pH计，购自
上海仪电科学仪器股份有限公司;超声波振荡器，购自上海
五相仪器仪表有限公司;AEL － 200 型电子分析天平，购自上
海隆拓仪器设备有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。乌头碱对照品，批号 110798 － 200404，由
西北农林科技大学生命科学学院 HPLC 指纹图谱实验室提
供;高氯酸，优级纯，购自上海优浦科学仪器有限公司;甲醇、
乙醚、氢氧化钠、盐酸羟胺、无水乙醇均为分析纯，市售;pH
值 0． 5高氯酸水溶液和氨试液等，均按中国药典(2010版)规
定的方法配制［3］。
1． 2 方法
1． 2． 1 乌头碱标准液的配制。精密称取乌头碱对照品 20
mg，置于 10 ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀后用 0． 22 μm
滤膜滤过，即得。
1． 2． 2 碱性盐酸羟胺试液的配制。(1)浓度 12． 5%氢氧化
钠的甲醇溶液(A)。准确称取氢氧化钠 12． 500 g，加无水甲
醇 100 ml，回流加热使其溶解，即得。(2)浓度 12． 5%盐酸羟
胺甲醇溶液(B)。准确称取盐酸羟胺 12． 500 g，加无水甲醇
100 ml，回流加热使溶解，即得。溶液 A、溶液 B等体积混合，
过滤待用。
1． 2． 3 高氯酸铁试剂的配制。将 10 ml 浓度 70%高氯酸，
加入 500 ml烧瓶中，分数次撒入铁粉 0． 80 g(铁粉不可一次
加入) ，边加边搅拌、溶解后冷却至室温，转移于 100 ml 容量
瓶中，在冷水浴下用无水乙醇稀释至 100 ml。用前取出 4
ml，置 100 ml容量瓶中，加浓度 70%高氯酸 1． 2 ml，用无水乙
醇稀释至 100 ml。
1． 2． 4 供试品溶液的配制。将采摘的展毛多根乌头冲洗干
净、晒干，取适量，于 60 ℃烘干至恒重，研细，过 20 目筛，称
取样品 10． 000 g，置于 500 ml锥形瓶中，加入 100 ml 乙醚及
氨试液 5 ml，浸 30 min后置于超声波振荡器上持续提取 30
min，加水 4 ml混匀，振荡均匀，放置 1 h，过滤，用乙醚洗涤滤
渣，合并滤液，于 40 ℃水浴挥干，最后加 10 ml乙醇，在 65 ℃
水浴 15 min，冷却至室温转入 20 ml 容量瓶中，用乙醇定容，
持续振荡 30 min，即得。
1． 2． 5 测定波长的选择。取 2． 50 ml 乌头碱标准液，置 25
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(19):8134 － 8135
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.19.118
ml干燥具塞锥形瓶中，加碱性盐酸羟胺试液 1． 50 ml，于 65
℃水浴 10 min。取出待冷却至室温，加高氯酸铁试液 12． 50
ml，移入 25 ml容量瓶中，振荡使生成的 Fe(OH)3 溶解，准确
加入 pH 0． 5高氯酸水溶液 8． 00 ml，用高氯酸铁试液稀释至
刻度，混匀，于 400 ～750 nm波长范围内扫描，确定乌头碱的
吸收光谱。
1． 2． 6 方法学考察。(1)线性关系的考察。精确量取乌头
碱标准液 0、0． 25、0． 50、1． 00、1． 50、2． 00 和 2． 50 ml，置于 25
ml干燥具塞锥形瓶中，依次加无水乙醇至 2． 50 ml，加碱性盐
酸羟胺试液 1． 50 ml，于 65 ℃水浴 10 min;取出，待冷却至室
温，加高氯酸铁试液 12． 50 ml，移入 25 ml容量瓶中，振荡，准
确加入 pH 0． 5高氯酸水溶液 8． 00 ml，用高氯酸铁试液稀释
至刻度，放置20 min，于512． 6 nm处测定吸收度，将吸光度对
乌头碱浓度进行线性回归，计算回归方程。(2)稳定性试验。
取乌头碱浓度为 40 μg /ml 的标准液按照“(1)”项下方法分
别于 1、2、3、4、5和 6 d内测定乌头碱的吸光度和浓度，并计
算 ＲSD。(3)回收率试验。在 3个已知乌头碱含量的样品液
中定量加入乌头碱对照品，按照“1． 2． 4”项下方法制备供试
品溶液，并按照“(1)”项下方法进行测定，并计算平均回收
率和 ＲSD。
1． 2． 7 样品的含量测定。精确量取样品液2． 50 ml，置于25
ml干燥具塞锥形瓶中，加入新配制碱性盐酸羟胺试液 1． 50
ml，于 65 ℃水浴 10 min;取出，待冷却至室温，加高氯酸铁试
液 12． 50 ml，移入 25 ml 容量瓶中，振荡使生成的 Fe(OH)3
溶解，准确加入 pH 0． 5高氯酸水溶液8． 00 ml，用高氯酸铁试
液稀释至刻度，混匀，分成 3 份，于 512． 6 nm波长处测定，按
线性回归方程计算展毛多根乌头中乌头碱含量。
2 结果与分析
2． 1 测定波长的选择 图 1表明，乌头碱在 512． 6 nm处有
最大吸收波长，故选用 512． 6 nm 作为测定乌头碱含量的
波长。
图 1 测定波长的选择
2． 2 方法学考察 (1)线性关系的考察。计算得线性回归
方程为:Y =2． 495 3X －0． 008 8，Ｒ =0． 991 6。试验结果表明，
乌头碱浓度在 0 ～200 μg /ml范围内与吸光度的线性关系良
好。(2)稳定性试验。计算得 ＲSD为 3． 413 5%，说明该方法
在 6 d内稳定性好。(3)回收率试验。由表 1 可知，平均加
样回收率为 97． 4%，ＲSD为 1． 27%，表明该方法准确可靠，可
用于展毛多根乌头样品中乌头碱的含量测定。
表 1 展毛多根乌头样品乌头碱回收率
试样
样品中已知
乌头碱含量
mg
定量添加对
照品中乌头
碱含量∥mg
测得混样
中乌头碱
含量∥mg
加样
回收率
%
平均加样
回收率
%
ＲSD
%
1 3． 60 3． 00 6． 53 97． 7
2 4． 50 4． 00 8． 44 98． 5 97． 4 1． 27
3 4． 30 3． 50 7． 66 96． 0
2． 3 展毛多根乌头样品中乌头碱含量测定 由表 2可知，3
份展毛多根乌头样品中乌头碱的浓度为 0． 180 3 mg /ml，经
计算，展毛多根乌头中乌头的含量为 0． 360 6%。由此可知，
展毛多根乌头中乌头碱含量较高，应具有较强药理活性，但
因其毒性较强，临床应注意采取减毒措施。
表 2 展毛多根乌头样品乌头碱含量
待测样品 吸光度 A 浓度∥mg /ml
第 1份样品 0． 442 1 0． 180 7
第 2份样品 0． 441 8 0． 180 6
第 3份样品 0． 439 7 0． 179 7
平均 0． 180 3
3 结论与讨论
展毛多根乌头中含有乌头碱、脱氧乌头碱、新乌头碱、准
噶尔乌头碱、欧乌碱和去氧乌头碱等多种生物碱，这些成分
含量的多少直接影响其生物活性［4］。乌头碱含量测定方法
很多，试验采用改良异羟肟酸法，用高氯酸铁显色来进行分
光光度法测定，方法简便快捷，稳定性好、成本低，且在操作
中减少了乌头碱的损失，试验结果准确。
所用测得展毛多根乌头中的乌头碱含量为 0． 360 6%。
据朱俊访，李卓亚等人的研究报道［5］，川乌中乌头碱的含量
不超过 0． 15%，所以展毛多根乌头中乌头碱含量较川乌中的
含量要高，用展毛多根乌头为原料提取乌头碱方法简便，原
料资源丰富，无副产物，便于工业生产。同时，因为乌头碱的
含量较高，所以药理活性也要强于川乌，但同时毒性也强于
川乌，炮制工艺中要注意减毒措施，临床应注意剂量。
参考文献
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531841 卷 19 期 闫晋晋等 新疆展毛多根乌头中乌头碱分离及含量测定