全 文 ：HPLC法青风藤根中青藤碱含量的测定及其提取工艺的优化
陈 曦　(陕西省资源生物重点实验室 ,陕西理工学院 ,陕西汉中 723000)
摘要　 [目的 ]测定青风藤根中青藤碱的含量并与藤茎中含量比较 ,同时优化青藤碱的提取工艺 ,为合理有效地开发青风藤资源提供依
据。 [方法]用HPLC法测定青藤碱的含量 ,通过正交试验优化青藤碱的提取工艺。 [结果]青风藤根中青藤碱的平均含量为 1.73%,比
藤茎中含量高 0.62%;青藤碱的最佳提取工艺为:乙醇浓度为 70%,乙醇用量为 15ml,超声处理时间为 30min,超声频率为 30Hz。 [结
论]该试验比较了青风藤根和藤茎中青藤碱的含量差异 ,为合理有效地开发利用青风藤资源、评价青风藤药材提供了可靠的依据。
关键词　青风藤根;青藤碱;含量测定;高效液相法;提取工艺;
中图分类号　S687.3　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)29-16236-03
DeterminationoftheContentofSinomenineinRootofCaulisSinomenibyHPLCandPurificationofItsExtractionProcess
CHENXi　(KeyLaboratoryofshaanciprovince, ShaanxiUniversityofTechnologyBio-resources, Hanzhong, Shaanxi723000)
Abstract[Objective] Theresearchaimedtodetermineandcomparethecontentofsinomenineinrootandstemofcaulissinomeniandoptimize
theextractionprocessofit.[ Method]HPLCwasusedtodeterminethecontentofsinomenineandorthogonaltestwasusedtooptimizetheextrac-
tionprocess.[ Result]Theaveragecontentofsinomenineinrootofcaulissinomeniwas1.73%whichwas0.62%higherthanthatinstem.The
optimumextractionprocesswereasfolows:ethanolconcentrationof70%, ethanolvolumeof15ml, microwavetreatingtimeof30minandmi-
crowavefrequencyof30Hz.[ Conclusion] Thevarianceofcontentofsinomenineinrootandstemofcaulissinomeniiwascomparedinthisstudy,
whichwouldprovidereliablebasisfortheefectivedevelopmentanduseofcaulissinomeniresourcesandtheassessmentofcaulissinomenimed-
icalmaterial.
Keywords　Rootofcaulissinomeni;Sinomenine;Determinationofcontent;Extractionprocess;HPLC
作者简介　陈曦(1981-), 女 , 陕西汉中人 , 硕士 ,助教 ,从事中药
质量分析的研究。E-mail:baobeixiaoxi@sina.com。
收稿日期　2010-07-26
　　青风藤是防己科植物青藤 [ Sinomeni-umacutum
(Thunb.)Rehd.etWils.]及毛青藤 [ Sinomeni-um.acutum
(Thunb.)Rehd.etWils.var.cinereumRehd.etWils.]的干燥
藤茎 ,具有通络 、止痛 、祛风湿等功效 ,主治风湿及类风湿性
关节炎 、关节肿大 、肢体疼痛和麻木等症 。中医药应用青风
藤及其复方治疗风湿性疾病已有 1 000多年的历史 ,宋朝 《图
经本草 》和明朝《本草纲目 》中记载:“青风藤主治风疾 ,治风
湿流注 ,历节鹤膝 ,麻痹……”。根据中医关于 “痹症 ”的病因
机制和中药关于青风藤的功效论述 ,采用青风藤治疗风湿疼
痛等效果明显 [ 1-3 , 6-7] 。
《日本药局方 》第 15改正版收载的青风藤 ,虽与中国药
典植物来源相同 ,但药用部位为根 ,用于治疗肌肉痛 、神经痛
和关节痛等。 《陕西中草药 》也将青风藤根作为用药部位收
载 ,且在我国其他一些地方亦有以青风藤根入药的习惯 ,这
与中国药典规定的青风藤以藤茎入药不同 [ 4-5, 8] 。
该试验收集陕西产青风藤 ,测定青风藤根中青藤碱的含
量并讨论其最佳提取工艺 ,且与藤茎作比较 ,以期为评价青
风藤质量和进一步开发利用秦巴山区的药用资源提供可靠
的理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象。青风藤根 ,分别采于陕西镇巴 、陕西南
郑 、陕西略阳和陕西宁强等地 ,经陕西省药品检验所鉴定为
防己科植物青藤 [ Sinomeni-umacutum(Thunb.)Rehd.et
Wils.]及毛青藤 [ Sinomeni-umacutum(Thunb.)Rehd.et
Wils.var.cinereumRehd.etWils.]的根。将采来的鲜活材料
先置于 110℃烘箱内杀青 ,经 105℃烘干 、粉碎 ,过 50目的分
样筛 ,备用制得试验样品。
1.1.2　主要设备。 LC-2010A高效液相色谱仪 ,由日本岛津
公司生产;H66026型超声波清洗机 ,由无锡超声电子设备有
限公司生产;电子分析天平由德国赛多利斯公司生产;FZ102
型微型植物试样粉碎机由北京中兴伟业仪器有限公司生产。
1.1.3　主要试剂。青藤碱对照品由(批号:774-9001),由中
国药物生物制品检验所提供;甲醇 ,乙腈 ,为市售色谱纯;其
他试剂均为市售分析纯。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件。色谱柱:岛津 ODS柱(5 μm, 4.6 mm×
150mm);流动相∶甲醇 -磷酸盐缓冲溶液(0.005 mol/L磷酸
氢二钠溶液 ,以 0.01 mol/L的磷酸二氢钠调节 pH值至 8.0,
再以 0.1%的三乙胺调节 pH值至 9.0)(50∶50, V/V);检测波
长:262 nm;柱温:30℃,流速:1.0 ml/min。数据处理外标法
峰面积定量。
1.2.2　对照品溶液的配制。精密称取青藤碱对照品 4.200
mg,置于 10 ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得浓度为 0.420mg/ml的对照品溶液。
1.2.3　供试品溶液的配制。取青风藤样品粉末约 0.25 g,精
密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 15 ml70%乙醇 ,密塞 ,称
定重量 ,超声处理(功率 250 W,频率 20kHz)30 min,放冷 ,再
称定重量 ,用 70%乙醇补足损失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤
液 ,即得试品溶液。
1.2.4　方法学考察。
1.2.4.1　最大波长的确定。取青藤碱对照品溶液 ,以 70%
乙醇为对照 ,在 200 ～ 400nm处用紫外分光光度计扫描 3次 ,
确定最大吸收波长。
1.2.4.2　线性关系考察。分别吸取青藤碱对照品溶液 2、4、
8、10、12、16 μl注入高效液相色谱仪分别测定。以青藤碱进
样量为横坐标 ,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线 ,考察
线性关系。
1.2.4.3　精密度试验。精密吸取青藤碱对照品溶液 10 μl,连
续进样 5次测定峰面积 ,计算峰面积的相对标准偏差值(RSD)。
责任编辑　刘群燕　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(29):16236-16238
1.2.4.4　稳定性试验。取青风藤根供试品溶液 10 ul,分别
在 2、4、8、12、24、48 h测定峰面积 ,计算峰面积 RSD值。
1.2.4.5　重现性试验。取同一批青风藤根样品 0.25 g,按
“1.2.3”中供试品溶液的制备方法制成 5份供试品溶液 ,分
别吸取 10 μl测定峰面积并计算峰面积 RSD值。
1.2.4.6　回收率试验。取 5份已知含量的青风藤根样品约
0.125g,精密称定 ,精密加入一定量的青藤碱对照品溶液 ,
挥干 ,按 “1.2.1”中色谱条件测定青藤碱含量 ,计算平均回收
率和 RSD值。
1.2.5　样品含量的测定。精密吸取各样品溶液 10 ul,在上
述色谱条件下测定青藤碱含量 ,重复 3次。
1.2.6　提取方法的优化。通过设计正交试验来确定青藤碱
的最佳提取工艺。以乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、超声时间
(C)和超声频率(D)为 4个因素 ,每个因素 3个水平设计正
交试验(表 1)。
表 1　正交试验设计
Table1　Designoforthogonaltest
因素Factor
A乙醇浓度∥%Concention
ofethanol
B乙醇用量Volumeof
ethanol
C超声时间∥minMicrowave
treatingtime
C超声频率∥HzMicrowave
frequency
1 50 15 15 15
2 70 20 20 20
3 95 25 30 30
2　结果与分析
2.1　方法学考察结果
2.1.1　最大波长确定结果 。对照品溶液在 262 nm处有最
大吸收 ,因此选择 262 nm为测定波长。
2.1.2　线性关系考察结果。计算得其回归方程为 Y=
1 535.3 X-609.87(r=0.999 2), 表明青藤碱在
0.84 ～ 6.72μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.1.3　精密度试验结果。通过精密度试验测得样品峰面积
值分别为 5 501.14、5 502.09、5 449.79、5 501.31和 5 449.64,
RSD值为 0.68%,表明仪器精密度良好。
2.1.4　稳定性试验结果。计算得各峰面积 RSD值为
0.60%,表明样品溶液在 48 h内 ,色谱峰面积无明显变化 ,待
测组分化学性质稳定。
2.1.5　重现性试验结果。计算峰面积 RSD值为 1.21%,表
明该方法的重复性良好。
2.1.6　加样回收率试验结果。各样品回收率见表 2,平均回
收率为 97.80%, RSD值为 2.83%。
2.2　样品含量测定结果
2.2.1　不同产地青风藤根中青风藤碱含量比较。样品含量
测定结果见表 3,由表 3可知 ,陕西南郑法镇的青风藤根中青
藤碱的含量最高 ,而陕西镇巴庙镇最低。
表 2　回收率试验结果
Table2　Resultsofrecoveryexperiment
样品量∥mg
Amountofsample
样品含量∥mg
Contentofsample
对照品加入量∥mg
Contentofowparativesubstance
实测总量∥mg
Measuredamount
回收率∥%
Recoveryrate
平均值∥%
Averagerecovergrate RSD∥%
125.000 3.750 3.780 7.251 96.32
125.390 3.762 3.780 7.504 99.49
125.780 3.773 3.780 7.387 97.81 97.80 2.83
124.890 3.747 3.780 7.151 95.00
125.250 3.758 3.780 7.561 100.37
表 3　不同产地青风藤根中青藤碱的含量(n=3)
Table3　SinomeninecontentofCaulisSinomenirootsfromdifferent
placesoforigin
产地 Habitat 平均含量∥% Meancontent RSD∥%
陕西南郑法镇 3.00 1.04
陕西南郑周家坪镇 2.82 0.82
陕西镇巴巴庙镇 1.97 1.19
陕西镇巴简池镇 2.53 0.78
陕西略阳紫柏山 2.24 0.94
陕西宁强 2.70 1.41
2.2.2　青风藤茎与根中青藤碱含量比较 。对青风藤茎和根
中青藤碱的含量分别进行测定 ,结果见表 4。各样品编号分
别为:1号:最细藤茎(直径 0.3 ～ 0.7cm);2号:略粗藤茎(直
径 0.7～ 0.9 cm);3号:较粗藤茎(直径 0.9 ～ 1.1 cm);4号:
近基部粗藤茎(直径 1.7 ～ 2.3 cm);5号:近基部藤茎上的不
定根(直径 0.2cm以下);6号:与主根平行位置上的较细根
(直径 1 ～ 1.4 cm);7号:主根上略粗的支根 (直径
1.1 ～ 2cm);8号:主根较粗的一段(直径 2 ～ 3 cm);9号:主
根最粗的部分(5 cm);10号:主根之侧根上的须状根毛(直
径 0.5 cm以下)。
表 4　青风藤不同粗细的藤茎和根青藤碱含量测定结果(n=3)
Table4　Resaltsofdelerminaionsinomenineofvinestemandvootsfnr
caulissinomenisinomeninecontentindiferentthicknessof
vinestemandrootsofCaulisSinomeni(n=3)
样品
Sample
样品含量∥mg/g
Contentof
thesample
青藤碱含
量平均值∥%
Meancontent
RSD∥%
藤茎 1 2.72 1.07 0.88
藤茎 2 3.05 1.21 1.02
藤茎 3 0.53 0.21 1.58
藤茎 4 - - -
根 5 3.0 1.18 0.93
根 6 5.75 2.30 0.97
根 7 7.85 3.00 1.32
根 8 2.21 0.86 1.10
根 9 3.48 1.39 1.23
根 10 4.18 1.66 1.45
　注:-未检出。
　Note:-Notbeingdetected.
2.3　提取方法优化结果　正交试验结果表明(表 5),青藤
碱最佳提取工艺为 A2 B3C1D3 ,即乙醇浓度为 70%,乙醇用量
1623738卷 29期　　　　　　　　　　　　　　陈 曦　HPLC法青风藤根中青藤碱含量的测定及其提取工艺的优化
为 15 ml,超声处理时间为 30 min,超声频率为 30Hz。
表 5　正交试验结果
Table5　Resultsoforthogonaltest
编号
No. A B C D
青藤碱含量∥%
Contentofsinomenine
1 1 1 1 1 1.54
2 1 2 2 2 1.51
3 1 3 3 3 1.55
4 2 1 2 3 1.55
5 2 2 3 1 1.54
6 2 3 1 2 1.59
7 3 1 3 2 0.82
8 3 2 1 3 0.85
9 3 3 2 1 0.95
K1 1.533 1.303 1.360 1.327
K2 1.560 1.333 1.320 1.307
K3 0.890 1.347 1.303 1.350
R 0.687 0.063 0.034 0.036
3　结论与讨论
(1)试验中确定的最大吸收波长为 262 nm,这与 《中国
药典 》2005版Ⅰ部中青风藤质量标准中的检测波长相符合。
(2)不同产地的青风藤根中青藤碱含量有差异 ,其中采
于陕西南郑法镇的青风藤根中青藤碱的含量最高 ,而采于陕
西镇巴巴庙镇的青风藤根中青藤碱含量最低。同株青风藤
不同器官中青藤碱的含量不同 ,根中青藤碱的含量比藤茎中
含量高 0.62%;侧根的青藤碱含量最高 ,须根次之 ,主根的青
藤碱含量最低;藤茎中越粗的部分 ,由于茎木质化程度高其
青藤碱含量越低 ,由此可知 ,青藤碱在藤茎中主要存在于韧
皮部 。该结果为有效利用青风藤资源 ,评价青风藤药材质量
提供了可靠的依据。
(3)通过正交试验得出青藤碱提取的最佳工艺为:乙醇
浓度为 70%,乙醇用量为 15 ml,超声处理时间为 30 min,超
声频率为 30 Hz。
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(上接第 16235页)
出的 2 , 3 , 5-trihydroxy-3, 6, 7-trimethoxyflavone, vitexicar-pin
和 artemetin可呈剂量依赖性地抑制体外培养的人急性髓性
白细胞(HL-60)增殖。
该研究表明 ,蔓荆子总黄酮提取物对小鼠肉瘤 S180和
肝癌 H22具有较强的抑制作用 ,且对肉瘤 S180的抑瘤效果
优于肝癌 H22。说明蔓荆子黄酮对不同肿瘤的抑制活性可
能存在一定的选择性。阳性药组抑瘤效果最好 ,但小鼠在服
药期间食欲不佳 ,状态差 ,身体明显消瘦 ,体重 、脾脏指数和
胸腺指数降低 ,说明环磷酰胺对小鼠的损伤很大 ,在抑瘤的
同时也降低了小鼠的免疫能力;而蔓荆子黄酮各剂量组小鼠
在服药期间食欲良好 ,与空白对照组相比 ,小鼠体重均有所
增加 ,脾脏指数和胸腺指数亦均有所增大。同时 ,蔓荆子黄
酮提取物的抗肿瘤作用与给药剂量呈一定的量效关系 ,但具
体的抗肿瘤机制还有待进一步研究 。
目前 ,国内关于蔓荆子的研究较少 ,且主要集中在粗提
物和黄酮类成分的分离纯化方面 ,而对特征性成分的药理活
性研究不够深入 。蔓荆子在我国传统中药中具有悠久的应
用历史 ,因此 ,有必要深入研究其化学成分及药理活性 ,为该
植物的综合开发利用提供理论依据。
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