全 文 ：水辣蓼中 2 种黄酮类成分含量测定
张宏武1，任恒春1，丁 刚1，李榕涛2，魏建和1，邹忠梅1(1． 中国医学科学院北京协和医院药用植物研究所，北京
100193;2． 中国医学科学院北京协和医院药用植物研究所海南分所，海南 万宁 571533)
［基金项目］ 十一五国家科技支撑计划(2007BAI27B06).
［作者简介］ 张宏武(1977-) ，女，硕士，助理研究员． Tel: (010)
57833281，E-mail:hwzhang@ implad． ac． cn.
［通讯作者］ 邹忠梅 . Tel: (010)57833290，E-mail:zmzou@ implad．
ac． cn.
［摘要］ 目的 首次应用高效液相色谱方法建立同时测定水辣蓼药材中槲皮素和槲皮苷含量的测定方法。方法 Ver-
tiSep GES C18(250 mm ×4． 6 mm，5． 0 μm)色谱柱;流动相:乙腈-甲酸水(0． 1%，V /V) (19∶81)等度洗脱，流速 1 ml /min，检
测波长为 350 nm，柱温:30 ℃。结果 槲皮素和槲皮苷分别在 4． 827 ～ 80． 455 μg /ml和 2． 934 ～ 48． 900 μg /ml范围内呈良好
的线性关系 (r = 0． 999 9，r = 0． 999 7，n = 5) ，平均回收率分别为 97． 98%、98． 29% ，RSD分别为 1． 91%、1． 84%(n = 9)。结
论 本方法准确、简便，重复性好，可用于水辣蓼中槲皮素和槲皮苷的含量测定。
［关键词］ 水辣蓼;槲皮素;槲皮苷;含量测定
［中图分类号］ R917;R284 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1006 － 0111(2012)05 － 0378 － 03
［DOI］ 10． 3969 / j． issn． 1006 － 0111． 2012． 05． 017
Determination of two flavones in Polygonum hydropiper Linn
ZHANG Hong-wu1，REN Heng-chun1，DING Gang1，LI Rong-tao2，WEI Jian-he1，ZOU Zhong-mei1(1． Institute of Medicinal Plant De-
velopment，Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College，Beijing 100193，China;2． Hainan Branch Institute
of Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College，Wanning 571533，China)
［Abstract］ Objective To established the HPLC method for simultaneously determination of quercitin and quercitrin in Polygo-
num hydropiper Linn． Methods A VertiSep GES C18(250 mm ×4． 6 mm，5． 0 μm)column was adopted with a mobile phase of aceto-
nitrile-0． 1% formic acid water(19∶81)at the flow rate of 1 ml /min and the column temperature was set at 30 ℃ ． The detection wave-
length was 350 nm． Results The linear range of quercitin and quercitrin was 4． 827 ～ 80． 455 μg /ml(r = 0． 999 9，n = 5)and 2． 934
～ 48． 900 μg /ml (r = 0． 999 7，n = 5) ，respectively，and the average recovery(n = 9)was 97． 98%，98． 29%，RSD was 1． 91%，
1. 84% respectively． Conclusions The method was accurate，simple，reproducible，and could be used to determine the contents of
quercitin and quercitrin in Polygonum hydropiper Linn．
［Key words］ Polygonum hydropiper Linn;quercitin;quercitrin;HPLC dertermination
水辣蓼为蓼科植物水辣蓼(Polygonum hy-
dropiper Linn． )的全草，别名柳草、蓼子草、斑蕉
草、蝙蝠草等。全草均可入药，水辣蓼味辛，温;具
有祛风利湿，散瘀止痛，解毒消肿等功效;主要用
于痢疾、肠胃炎、腹泻、脚气、疥癣、风湿关节痛、跌
打肿痛、功能性子宫出血;外用治毒蛇咬伤、皮肤
湿疹等症状［1］。近年研究表明，水辣蓼具有抗微
生物、杀虫、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性［2 ～ 5］。
水辣蓼中主要含有挥发油、黄酮及黄酮苷类化合
物［5］。曾有文献报道用芦丁作为对照品控制水辣
蓼的质量［6］，在《中华本草》中是以槲皮素作为水
辣蓼的薄层对照［7］。研究发现，黄酮类成分为其
抗氧化活性的有效成分［2］。为此，本研究首次用
高效液相色谱法建立了同时测定水辣蓼中 2 种黄
酮类成分槲皮素和槲皮苷的含量测定，为该药材
的质量标准研究奠定基础。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(美国 Waters 公司) :600 泵;
PDA紫外检测器。试剂:色谱乙腈(Burdick ＆ Jack-
on) ;重蒸水;其余试剂均为分析纯。槲皮苷、槲皮
素对照品均购于中国药品生物制品检定所，槲皮素
批号:1-9905，槲皮苷批号:111538-200403。
样品:10 批海南产水辣蓼样品分别采自海南文
昌、屯昌，由中国医学科学院药用植物研究所海南分
所助理研究员李榕涛鉴定为蓼科植物水辣蓼 Polyg-
onum hydropiper Linn．的全草。
2 含量测定
2． 1 色谱条件 VertiSep GES C18(250 mm × 4． 6
mm，5． 0 μm)色谱柱;流动相:乙腈-甲酸水(0． 1%，V /
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V) (19∶81)等度洗脱。流速:1 ml /min ;检测波长: 350 nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μl;色谱分离见图 1。
图 1 槲皮苷、槲皮素对照品 (A)和水辣蓼药材 (B)HPLC色谱图
2． 2 实验方法及方法学考察
2． 2． 1 供试品溶液的制备 取水辣蓼药材粉末
(过四号筛)约 1． 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
精密加入甲醇 50 ml，称定重量，回流 1 h，放至室温，
再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取
续滤液，精密称定，蒸干，用甲醇转移到 10 ml 容量
瓶中，过 0． 45 μm微孔滤膜，取续滤液 1 ml即得。
2． 2． 2 对照品储备液的制备 精密称取槲皮苷对
照品 19． 56 mg，槲皮素对照品 32． 18 mg，甲醇定容
于 10 ml量瓶中，作为对照品储备溶液。
2． 2． 3 线性及定量限的测定 精密称取适量槲皮苷
对照品储备液配置成 2． 934、9． 780、24． 450、29. 340、
48． 900 μg /ml，精密称取适量槲皮素对照品储备液配
置成4． 827 、16． 091 、40． 228 、48． 273 、80． 455 μg /ml，
以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性
回归，得回归方程分别为 Y = 23 803X + 21 433，r =
0. 999 7;Y = 30 366X + 64 581，r = 0． 999 9。结果表
明:槲皮苷在 2． 934 ～ 48． 900 μg /ml，槲皮素在 4． 827
～80． 455 μg /ml范围内呈良好的线性关系。
2． 2． 4 重复性试验 精密称取同一批药材粉末 5
份(编号 4) ，按供试品溶液制备方法，按照“2． 1”项
色谱条件下测定，记录峰面积，槲皮苷和槲皮素含量
分别为 0． 185 5%、0． 304 1%;RSD分别为 0． 21%、
0． 17%。
2． 2． 5 精密度试验 取同一对照品溶液(29． 340
μg /ml) ，重复进样 5 次，测得峰面积，槲皮苷和槲皮
素对照品日间精密度 RSD 分别为 1． 68%、1． 87%，
日内精密度 RSD分别为 1． 2%、1． 3%。
2． 2． 6 稳定性试验 取同一份供试品溶液，在 0、
4、8、24、48 h分别按照“2． 1”项色谱条件进样测定，
记录峰面积，结果表明供试品在 48 h 内基本稳定，
槲皮苷和槲皮素对照品峰面积 RSD 分别为 1． 2%、
0． 76%。
2． 2． 7 回收率试验 精取同一已知含量的水辣蓼
分别置 9 个三角瓶中，每三份一组，按样品中槲皮苷
和槲皮素含量的 120%、100%、80%分别加入适量
槲皮苷和槲皮素对照品溶液，然后按供试品溶液制
备方法制备，测定结果，槲皮苷和槲皮素对照品平均
加样回收率分别为 98． 29%、97． 98%;RSD 分别为
1． 84%、1． 91%。
2． 2． 8 样品测定 取 10 批水辣蓼药材粉末，按供
试品溶液制备方法制备样品，按照“2． 1”项色谱条
件进行测定，结果见表 1。
表 1 水辣蓼药材中槲皮苷、槲皮素含量测定结果(n = 3)
编号 产地
槲皮素含量
(%)
槲皮苷含量
(%)
总含量
(%)
1 文昌溪头 0． 371 5 0． 147 3 0． 518 8
2 文昌溪头 0． 572 7 0． 552 5 1． 125 2
3 屯昌 0． 728 0 0． 255 7 0． 983 7
4 屯昌 0． 304 1 0． 185 5 0． 489 6
5 屯昌 0． 065 2 0． 084 3 0． 149 5
6 屯昌 0． 576 8 0． 587 4 1． 164 2
7 屯昌 0． 321 3 0． 293 1 0． 614 4
8 屯昌 0． 454 6 0． 146 6 0． 601 2
9 屯昌 0． 387 0 0． 083 6 0． 470 6
10 屯昌 0． 244 6 0． 239 3 0． 483 9
3 讨论
3． 1 对照品的选择 芦丁在一半以上的高等植物
中都存在，不足以作为衡量水辣蓼药材质量的标准，
另外槲皮苷抗氧化活性比槲皮素强，因此我们选择
槲皮素、槲皮苷为对照品，作为水辣蓼的质量评价指
标，从而可以更加全面的反映水辣蓼药材质量。
3． 2 提取方法的选择 本实验曾分别用二氯甲烷、
70%乙醇和甲醇作为提取溶剂，超声提取水辣蓼药
材中槲皮素和槲皮苷的含量，HPLC 测定结果发现
甲醇提取物中槲皮素和槲皮苷的含量最高。并对甲
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因是检验方法有缺陷。如复方薄荷脑滴鼻液，有
报道［4］其检测方法存在问题。该制剂鉴别项下
“樟脑”釆用 UV 法鉴别，以液体石蜡为参比溶液
在 289 nm波长处有最大吸收，但不同质量的液体
石蜡对樟脑的最大吸收波长有不同的影响，测定
时必须用与所配制剂使用的同厂家同批号的液体
石蜡做参比，否则易导致检验结果出现差异。
4 对策
4 ． 1 加强制剂质量管理，提高制剂质量 针对抽
验制剂中微生物限度、装量、含量测定等主要项目
不合格率仍然偏高的问题，要加大专项检查力度，
积极查找原因，追根溯源，必要时进行质量跟踪和
安全性评价。同时，要严格制剂审批制度，对抽验
不合格的制剂经过评价后，仍不合格者吊销制剂
文号。加强药品生产监管制度建设;严格控制配
制分装间的环境卫生，加强操作人员的卫生管理;
为确保制剂质量，建议对微生物限度检查进行方
法学验证，坚持制剂室年审制度，加大监督管理。
4． 2 提高制剂包装容器质量 溶液剂多釆用塑
料瓶包装，封装不严，受温度、湿度影响大，应改善
包装容器。只有包装容器密封不漏气，制剂的装
量、含量、性状等出现问题的几率才会减少;包装
容器的卫生质量提高了，微生物限度出现不合格
的几率也会减少。因此建议:①使用符合要求的
包装材料;②对瓶口进行二次密封;③对瓶口进行
压膜封口处理或釆用玻璃瓶密封包装;④用软管
或铝箔封口。
4 ． 3 优化制剂处方和工艺，提高和统一制剂质量
标准 对一些易出现质量问题的品种，若临床必
需保留，应对其制剂处方和工艺进行优化，重新报
批。建议向《中国药典》靠拢，药典上已收载的制
剂品种，《中国人民解放军医疗机构制剂规范》不
再收载。
4 ． 4 加强药检队伍建设 为确保药品制剂质量，
应改善药品检验实验室条件，配备符合要求的检
验设备;同时要加强药检基层人员的专业技术培
训，促进药检人员不断更新知识层次，提升药品检
验能力，提高医疗机构制剂质量。
4 ． 5 切实执行医疗机构制剂配制质量管理规范
监督部门应严格实施军队医疗机构制剂管理办
法，加大制剂抽验的力度，扩大抽验覆盖面和抽验
品种范围，增加抽验频次。抽验时加强制剂现场
的监督检查，严格按照质量管理要求开展检验工
作，保证药品制剂检验结果的准确可靠与公正;对
抽验不合格制剂配制单位加大检查力度。通过有
效地监督管理，进一步提高医疗机构制剂水平，保
证人民群众和官兵用药安全有效。
【参考文献】
［1］ 中国药典 2010 版．二部［S］． 2010:1070.
［2］ 中国人民解放军医疗机构制剂规范 2002 年版［S］． 2002:
121.
［3］ 中国人民解放军医疗机构制剂规范 2002 年版增补本［S］．
2005:35.
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［J］．解放军药学学报，2008，24(2) :187.
［收稿日期］2012-03-14
［修回日期］2012-07-17
(上接第 379 页)
醇超声提取和回流提取方式及提取次数进行了考
察，最后确定提取方法为甲醇回流提取 1 h 作为供
试品溶液的提取方法。
【参考文献】
［1］ 全国中草药汇编编写组． 全国中草药汇编［M］． 北京:人民
卫生出版社，1986:896.
［2］ Yagi A，Uemura T，Okamura N，et al． Antioxidative sulphated
flavonoids in leaves of Polygonum hydropiper［J］． Phytochemis-
try，1994，35 (4) :885．
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leaves of Polygonum hydropiper［J］． J Agric Food Chem，1992，
40 (8) :1349．
［4］ Haraguchi H，Ohmi I，Sakai S，et al． Effect of Polygonum hy-
dropiper flavonoids on lens aldose reductase and related enzymes
［J］． J Nat Prod，1996，59 (4) :443．
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草药，2004，35(3) :285.
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［收稿日期］2011-11-30
［修回日期］2012-05-17
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