全 文 ：· · 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2016, 47(4)411
辣蓼为蓼科植物水蓼 Polygonum hydropiper L.
的干燥地上部分 ( 又名蓼子草 )，收载于 2003年
版《贵州省中药材、民族药材质量标准》。其性辛、
苦、温，无毒，具有行滞化湿、散瘀止血、解毒等
辣蓼不同部位槲皮素的含量测定及 HPLC指纹图谱
冯 华1，刘英波2*，刘 亮2，潘年松2，周德权3
(1. 遵义市食品药品检验所，贵州遵义 563000；2. 遵义医药高等专科学校，贵州遵义 563006；
3. 遵义绿普森农业有限公司，贵州遵义 563003)
摘要：建立了高效液相色谱法测定并比较辣蓼不同部位 (根、茎、叶、花和种子 )的槲皮素含量，并建立辣蓼 HPLC指
纹图谱。采用 Hypersil ODS2 C18色谱柱，以乙腈∶ 0.2％磷酸 (20∶ 80) 为流动相，检测波长 360 nm。结果显示，辣蓼
药材不同部位槲皮素的含量差异较大，槲皮素含量最高的是叶，其次是茎、花和种子，根中含量较低。辣蓼不同部位与
药材 HPLC指纹图谱相似度差异较大，药材间的相似度均大于 0.95，不同部位间相似度均小于 0.60。
关键词：辣蓼；槲皮素；高效液相色谱；指纹图谱；测定
中图分类号：O657.7+2；R93 文献标志码：A 文章编号：1001-8255(2016)04-0411-04
DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2016.04.010
收稿日期：2015-08-15
基金项目：贵州省科技合作协议项目(省市科合[2013]40号)
作者简介：冯 华(1977—)，男，硕士，从事药品检验及新药研究。
Tel：0851-28928059
E-mail：fenghua781014@163.com
通信联系人：刘英波(1979—)，男，副教授，从事中药-民族药新
剂型与新制剂研究。
Tel：013312308769
E-mail：gzliuyb@126.com
Determination of Quercetin from Different Parts of
Polygonum hydropiper L. and Its HPLC Fingerprints
FENG Hua1, LIU Yingbo2*, LIU Liang2, PAN Niansong2, ZHOU Dequan3
(1. Zunyi Institute for Food & Drug Control, Zunyi 563000; 2. Zunyi Medical and Pharmaceutical College, Zunyi 563006;
3. Zunyi Green and Sampson Agricultural Limited Company, Zunyi 563003)
ABSTRACT: An HPLC method was established for the determination of quercetin from different parts of
Polygonum hydropiper L., including roots, stems, leaves, fl owers and seeds, and the HPLC fi ngerprints were established.
An Hypersil ODS2 C18 column was used, with the mobile phase of acetonitrile∶0.2％ phosphoric acid (20∶80), at the
detection wavelength of 360 nm. The results showed that there were great differences between the quercetin contents from
different parts. It was the highest in leaves, followed by stems, fl owers and seeds, and the lowest in roots. The similarities
of HPLC fi ngerprints of the medicinal material were quite different from the parts of Polygonum hydropiper L.. The
similarities were all above 0.95 for Polygonum hydropiper L. samples, but below 0.60 for different parts.
Key Words: Polygonum hydropiper L.; quercetin; HPLC; fi ngerprint; determination
功效，用于痢疾、食滞、小儿疳积、痛经等症。其
有效成分主要为黄酮类，槲皮素 (1)、槲皮苷、金
丝桃苷等是辣蓼中含量较高的成分 [1]。本研究建立
了 HPLC法测定并比较辣蓼不同部位中的 1，同时
建立其 HPLC指纹图谱，以期为辣蓼药材的临床应
用和资源开发提供参考。
1 仪器与试药
LC-1260型高效液相色谱议，包括四元泵、二极管阵列
检测器 (DAD)、柱温箱、自动进样器和色谱工作站 (美国
Agilent公司 )。
1对照品 ( 中国食品药品检定研究院，批号 0081-
中药与天然药物
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9304) ；辣蓼药材采集于 2014年 10月下旬至 11月上旬，经
本所邓顺超副主任中药师鉴定为蓼科植物水蓼 Polygonum
hydropiper L.的干燥地上部分 (来源见表 1)；乙腈为色谱纯，
其他试剂均为分析纯，水为哇哈哈纯净水。
表 1 辣蓼样品的来源
Tab.1 Origins of Polygonum hydropiper L. Samples
编号 品种 产地
S1 辣蓼根 贵州湄潭县复兴镇
S2 辣蓼茎 贵州湄潭县复兴镇
S3 辣蓼叶 贵州湄潭县复兴镇
S4 辣蓼花 贵州湄潭县复兴镇
S5 辣蓼种子 贵州湄潭县复兴镇
S6 辣蓼 贵州六盘水盘县
S7 辣蓼 贵州黔西南贞丰县
S8 辣蓼 贵州黔东南西江
S9 辣蓼 贵州安顺黄果树
S10 辣蓼 贵州黔南荔波县
S11 辣蓼 贵州贵阳乌当区
S12 辣蓼 贵州毕节威宁县
S13 辣蓼 贵州湄潭县复兴镇
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
对照品溶液：精密称取 1对照品适量，加甲醇
溶解并配制成浓度为 0.064 mg/ml的对照品溶液。
供试品溶液：精密称取辣蓼药材或不同部位粉
末 (过 3号筛 )1.0 g，置锥形瓶中，加甲醇∶ 25％
盐酸 (4∶ 1)20 ml，密塞，精密称定，回流反应 1 h，
取出后放冷至室温，再次精密称定，用甲醇∶ 25％
盐酸 (4∶ 1) 补足质量，过滤，取续滤液即得。
2.2 色谱条件 [2—5]
色谱柱 Hypersil ODS2 C18柱(4.6 mm×200 mm，
5 m) ；流动相 乙腈∶ 0.2％磷酸 (20∶ 80) ；流速
1.0 ml/min；柱温 25 ℃；检测波长 360 nm；进样量
10 l。理论板数按 1峰计不低于 3 500。
按“2.1”项下方法分别制备 1对照品溶液和辣
蓼药材及不同部位供试品溶液，分别进样测定。结
果 (图 1) 显示，1与其他峰分离完全，峰形对称。
A：1对照品溶液，B：根，C：茎，D：叶，E：花，F：种子，G：辣蓼药材
1-1
图 1 辣蓼及其不同部位的 HPLC色谱图
Fig.1 HPLC Chromatograms of Polygonum hydropiper L. and Its Different Parts
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2.3 方法学考察
线性试验：分别精密吸取 1对照品溶液 2、6、
10、14和 20 l，进样测定，以 1进样量 m为横坐标，
峰面积 A为纵坐标，计算得回归方程为 A=1 094.2m+
4.046 3，r=0.999 9。结果表明 1在 0.13～ 1.28 g
范围内线性关系良好。
精密度试验：精密吸取 1对照品溶液 10 l，
连续测定 6次，计算得峰面积的 RSD为 0.6％。
重复性试验：准确称取同批辣蓼药材，共 6份，
按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，
计算得 1峰面积的 RSD为 0.9％。
稳定性试验：精密吸取同一辣蓼药材供试品溶
液 10 l，分别于 0、2、4、8和 12 h进样测定，计
算得 1峰面积的 RSD为 1.0％。表明供试品溶液在
12 h内稳定。
回收率试验：精密称取已知含量的辣蓼药材 (1
含量 0.106％，扣除水分计算 )0.5 g，共 6份，按辣
蓼药材中 1含量的 80％、100％和 120％加入 1对
照品，按“2.1”项下方法操作，分别进样测定，计
算得平均回收率 (n=6) 为 99.30％，RSD为 0.18％。
2.4 含量测定
精密称取 S1～ S5药材粉末 1.0 g，按“2.1”
项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表 2。
可见，1含量较高的是叶，其次是茎、花和种子，
根中含量较低。
表 2 辣蓼不同部位 1含量测定结果 /％ (x－ ±s, n=3)
Tab.2 Determination Results of 1 in Different Parts of
Polygonum hydropiper L./％ (x－ ±s, n=3)
样品 水分 1
S1 8.0±0.7 0.011±0.008
S2 6.8±0.6 0.128±0.012
S3 7.2±0.6 0.218±0.015
S4 8.3±0.8 0.126±0.016
S5 7.5±0.5 0.080±0.010
2.5 辣蓼药材的 HPLC指纹图谱 [6,7]
检测波长：在 200～ 400 nm波长范围内对供
试品溶液进行 UV扫描，结果在 260和 360 nm波
长处有较大吸收。360 nm处色谱峰数目较少，丰度
较高。260 nm处色谱图基线噪音较低，峰数目较多，
丰度降低，各峰的保留时间适中，分离度较好，且
基线稳定。为兼顾各组分的检测信号强度和灵敏度，
本试验选择检测波长为 260 nm。
指纹图谱色谱条件：流动相 乙腈 (A) ∶ 0.2％
磷酸 (B)，梯度洗脱 ( 程序见表 3) ；检测波长
260 nm；其他条件同“2.2”项。
表 3 梯度洗脱程度
Tab.3 Gradient Elution Procedure
t/min A B
0 5 95
15 15 85
25 20 80
40 30 70
50 5 95
精密度试验：精密吸取同一供试品溶液，重复
进样 6次，记录指纹图谱，计算得相似度均高于 0.97。
重复性试验：精密称取同批辣蓼样品粉末
1.0 g，共 6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，
分别进样，记录指纹图谱。结果相似度均高于 0.95。
稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别
在 0、2、4、8、10和 12 h进样测定，结果表明供
试品溶液在 12 h内指纹图谱的相似度均高于 0.96，
稳定性良好。
2.6 辣蓼药材 HPLC指纹图谱的建立
取辣蓼不同部位 S1～ S5样品及辣蓼药材
S6～ S13样品，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，
进样测定，记录色谱图 (见图 2)。
2.7 相似度分析
采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A版”软件对辣蓼药材及不同部位指纹图谱进
行数据处理，以 14号峰 (1) 为参照峰进行相似度
评价，图谱见图 3。根据相似度分析结果，辣蓼不
同部位的相似度均小于 0.60(S1～ S5分别为 0.395、
0.598、0.030、0.517和 0.349)，8批辣蓼药材的相
似度均大于 0.95(S6～ S13分别为 0.998、0.997、
0.996、0.995、0.998、0.997、0.996和 0.999)。
3 讨论
本试验测定了辣蓼不同部位的 1含量并建立了
HPLC指纹图谱。由结果可知，不同部位 1含量差
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A：指纹图谱共有模式 (全草 )，B：1对照品溶液，C：根，D：茎，E：叶，F：花，G：种子
S-1
图 2 辣蓼及其不同部位的 HPLC指纹图谱
Fig.2 HPLC Fingerprints of Polygonum hydropiper L. and Its Different Parts
14(S)-1
图 3 辣蓼药材及不同部位的 HPLC指纹图谱
Fig.3 HPLC Fingerprints of Polygonum hydropiper L. and Its Different Parts
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· · 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2016, 47(4)423
基础上，始于预先设定的目标，并强调对产品与工
艺的理解及过程控制的一种系统化方法。先要从
患者的角度来确定目标产品质量概况 (QTPP) 作为
研发起点，在确定产品关键质量属性 (CQA) 基础
上，基于风险评估和实验研究确定关键物料特性
(CMA) 和关键工艺参数 (CPP)，再采用 DoE等建
立各种变量与产品 CQA之间的关系以建立和实施
控制策略，实施产品和工艺的生命周期管理。这一
研发理念能大大提高本药品的质量及研发效率、缩
短审评和审批时间，减少产品缺陷、不合格、召回、
批准后的变更。
3.2 本项目为了使所开发的制剂能适应国内产业化
的制药设备，以在同一台制药设备——流化床中连
续地制备出复方缓释小丸装胶囊的方式替代原研的
双层缓释片，达到同样的释放行为和临床效果并顺
利上市，为建立复方药物缓控释技术产业化平台提
供了科学依据。
3.3 本试验对显著影响缓释小丸释放度的 3个单因
素 (隔离层增重、控释层中 EC与 HPMC的比值、
控释层增重 )，采用 QbD方法中多变量 DoE的
Box-Behnken设计，优化复方缓释胶囊中的 2缓释
小丸处方。该法可在不丢失潜在的交互作用信息下
评价各因素间的非线性相互作用即曲面效应，使拟
合的模型能较好地预测操作的结果，可用于确定过
程或系统的最优运行条件或确定因素满足运行要求
的区域，常用于试验后期对变量进行优化。
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异较大，表明 1在辣蓼药材各部位分布不均。不同
药用部位的指纹图谱分析结果显示，各样品相似度
和出峰个数差异很大。辣蓼药用部位的不同将影响
药材的临床疗效，建议可将不同药用部位分开使用。
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