全 文 ： 论　　著
　　[ 收稿日期] 2005-10-31;[ 修回日期] 2005-11-15
[ 基金项目] 河北省科学研究与发展计划指导项目(042761125)
[ 作者简介] 崔晓红(1965- ),女 ,河北石家庄人 ,河北医科大学
第二医院副主任药师 ,药学硕士 ,从事中药有效成分和临床药学研
究。
反相高效液相色谱法测定朱砂莲块根中
马兜铃酸 A的含量
崔晓红1 ,袁志芳2 ,杨秀岭1 ,张兰桐2
(1. 河北医科大学第二医院药剂科 , 河北 石家庄 050000;2. 河北医科大学药学院药物分析教研室 ,河北 石家庄 050017)
　　【摘要】　目的 建立反相高效液相色谱法( rever sed phase-high pe rformance liquid chromatog ram , RP-HPLC)
测定朱砂莲块根中马兜铃酸 A 的方法。方法 采用 RP-H PLC 法测定 , C18柱(250 mm×4. 6 mm , 5 μm)为固定相 ,
以甲醇-水-冰醋酸(59∶40∶1)为流动相 , 检测波长为 315 nm ,柱温为室温 ,进样量为 20 μL。结果 马兜铃酸 A 与
共存的成分能很好分离 , 在 1. 33 ～ 26. 6 mg /L 范围内与峰面积呈线性关系 , 平均回收率为 98. 60 %, RSD 为
0. 81 %( n =5)。结论 该法简便 、快速 、准确 , 适用于马兜铃酸 A 的含量测定。
【主题词】　朱砂莲;马兜铃酸 A;色谱法 ,高压液相
【中图分类号】　R284. 1　　　【文献标识码】　A　　　【文章编号】　1007-3205(2006)01-0038-03
　　朱砂莲( Aristolochia tuberosa C. F. Liang et
S . M. Hwang )为马兜铃科植物[ 1] ,其块茎为民间
习用的著名止痛药 ,用以治疗牙痛 、咽喉肿痛 、泻痢
腹痛 、痈疖肿痛 、跌打损伤等 ,该植物主要分布于四
川 、广西 、贵州 、云南等地 ,野生资源极其稀少 ,濒于
绝迹 。从四川产朱砂莲根部提取出 9个成分[ 2] :马
兜铃酸 、马兜铃酸-Ⅱ , 马兜铃酸-Ⅲ 、马兜铃苷 ,
N-β-D-马兜铃内酞胺葡萄糖苷 , β-D-马兜铃内酰胺
葡萄糖苷 、朱砂莲素 、朱砂莲苷和 6氧香豆酸葡萄糖
苷等 。有报道朱砂莲有抗癌 、抗感染 、增强机体免疫
机能的作用 ,但经动物实验又发现有致癌作用 。因
该药含有马兜铃酸 ,马兜铃酸已被证实有肾毒性和
致癌性。朱砂莲的不良反应为马兜铃酸所致 ,则监
测朱砂莲药材中马兜铃酸具有重要的临床意义。本
文应用反相高效液相色谱法(reversed phase-high
performance liquid chromatog ram , RP-HPLC)对
朱砂莲块根中马兜铃酸 A 进行鉴别和含量测定 ,以
期为临床应用提供理论依据。
1　材 料 与 方 法
1. 1　仪器与试药:美国 Waters 高效液相色谱仪 ,
2487UV 检测器 ,浙江大学色谱工作站 。硅胶 G(青
岛海洋化工厂),甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析
纯 。朱砂莲块茎:2002 年 10月采自四川省的 3个
产区 ,阴干备用 ,由河北医科大学药学院生药学教研
室聂凤禔教授鉴定 ,马兜铃酸 A 对照品购于中国药
品生物制品检定所 。
1. 2　定性分析
1. 2. 1　对照品溶液制备:精密称取马兜铃酸 A 对
照品适量 ,加甲醇制成 1 mL 中约含 0. 5 mg 的溶
液 ,作为对照品溶液。
1. 2. 2　供试品溶液的制备:取朱砂莲块茎 ,研细 ,取
细粉3 g ,加甲醇 50 mL ,加热回流提取 8 h 。取甲醇
提取液 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL 使溶解 ,
作为供试品溶液。
1. 2. 3　检测限试验:精密吸取马兜铃酸 A 对照品
溶液(0. 5 g /L)1 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,吸取此稀释液 5 、6 、7 、8 、9 、10 、20 μL ,
分别点于同一硅胶 G 薄层板上 ,置日光和紫外灯
(365 nm)下检视 ,点样量 5 μL 时观察不到马兜铃
酸斑点 ,因此本法的检测限为 0. 25 μg 。
1. 3　定量分析
1. 3. 1 　色谱条件:色谱柱 ,迪马 Diamond 色谱柱
(250 mm×4. 6 mm , 5μm)(北京分析仪器厂);流动
相 , 甲醇-水-冰醋酸 (59 ∶40 ∶1);体积流量 ,
1. 0 mL /min;检测波长 , 315 nm;柱温 , 室温;进样
量 ,20 μL 。
1. 3. 2　对照品溶液的制备:取马兜铃酸 A 对照品
约 1. 5 mg ,精密称定 ,置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解
并稀释至刻度 ,摇匀 ,精密量取 1. 0 mL ,置 5 mL 量
瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。
38 第 27卷第 1期2006年 1月 　 河 北 医 科 大 学 学 报JOURNAL OF H EBEI MEDICAL UNIVERSIT Y　Vol. 27　No. 1Jan. 　2006
1. 3. 3　供试品溶液的制备:取朱砂莲块茎细粉约
1 g ,精密称定 ,置索氏提取器中 ,加甲醇 70 mL ,加
热回流提取 8 h 。取甲醇提取液 ,滤过 ,蒸干 ,残渣
加 0. 5%氢氧化钠溶液 15 mL 使溶解 ,用 6 mo1 /L
盐酸溶液调节 pH 至 2 ,转移到分液漏斗中 ,用氯仿
振荡提取 4次(5 、10 、10 、10 mL),合并氯仿提取液 ,
蒸干 ,残渣加适量甲醇使溶解 ,移至 25 mL 量瓶中 ,
加甲醇至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 2. 5 mL ,置 10 mL
量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。
1. 3. 4　色谱系统性试验:照上述色谱条件 ,分别取
对照品溶液 、供试品溶液 ,注入液相色谱仪 ,记录色
谱图 。由此可见供试品色谱中 ,在与对照品色谱相
应位置上有相同保留时间的色谱峰 。马兜铃酸 A
的保留时间约为 15 mim ,对称因子为 0. 96 ,理论板
数以马兜铃酸 A 峰计≤4 500 ,马兜铃酸 A 与其他
成分峰的分离度均 >1. 5(图 1)。
2　结　　果
2. 1　薄层色谱结果:按《中华人民共和国药典 2000
年版》一部薄层色谱法试验 ,吸取供试品溶液 、对照
品溶液各 20 μL ,分别点于同一硅胶 G 薄层板上 ,使
成条状 ,以甲苯-醋酸已酯-水-甲酸(20∶10∶1∶1)
图 1　马兜铃酸 A 对照品和朱砂莲块茎的 HPLC图谱
图 2　朱砂莲块茎和马兜铃酸 A 对照品的薄层图谱
的上层溶液为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干。置日光和
紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中 ,在与对照
品色谱相应的位置上有相同颜色的条斑(图 2)。
2. 2　线性关系考察:取马兜铃酸 A 对照品适量 ,精
密称定 ,置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得 0. 133 g /L 马兜铃酸 A 储备液。分
别精密吸取上述溶液 0. 05 、0. 2 、0. 4 、0. 8 、1. 0 mL ,
置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 。照上述
色谱条件依法进样测定。以马兜铃酸 A 峰面积为
纵坐标 ,马兜铃酸 A 的质量浓度为横坐标 ,绘制标
准曲线 ,得回归方程:Y=0. 4105X+0. 871 4 , r =
0. 999 5。结果表明 ,马兜铃酸 A 质量浓度在 1. 33
～ 26. 6 mg /L 范围与峰面积之间呈良好的线性关
系 。
2. 3　最低检测限:在信噪比 S /N=3时 ,最低检测
限为 1. 33 μg /L。
2. 4　重复性考察:取同一朱砂莲块茎细粉 5份 ,按
“1. 3. 3”项下方法制备供试品溶液 ,注入液相色谱
仪 ,依法测定马兜铃酸 A ,结果朱砂莲块茎中马兜铃
酸 A 的含量为 0. 2954 %,RSD为 1. 8 %。
2. 5　精密度试验:精密吸取按“1. 3. 3”制备的供试
品溶液 20 μL ,重复进样 5次 ,测定马兜铃酸 A 峰面
积 ,结果马兜铃酸 A 的峰面积 RSD为 1. 6 %。
2. 6　稳定性试验:取按“1. 3. 3”制备的供试品溶液 ,
每隔 2 h进样 20μL ,记录峰面积。结果表明 ,供试
品溶液在 8 h 内基本稳定 ,马兜铃酸 A 峰面积 RSD
为 1. 9 %( n =5)。
2. 7　回收率试验:采取加样回收法。精密量取同一
朱砂莲块茎细粉 5份 ,每份约 0. 5 g ,精密称定 ,分
别加入马兜铃酸 A 对照品溶液适量 ,按“ 1. 3. 3”制
备供试品溶液 ,进样 ,测定马兜铃酸 A 峰面积 ,计算
回收率 ,结果马兜铃酸 A 的平均回收率为 99. 2 %,
RSD=1. 1 %( n =5)。
2. 8　样品测定:取不同产区的朱砂莲块茎细粉 ,按
“1. 3. 3”分别制备供试品溶液 ,照上述色谱条件进行
测定 ,按外标法计算马兜铃酸 A 的含量。3个产区
朱砂莲块茎中马兜铃酸 A 的质量分数分别为
0. 294 5 %、0. 318 9 %、0. 456 2 %。
3　讨　　论
3. 1　美国 FDA发布通告提出 ,所有含有或怀疑含
有马兜铃酸 A 的天然药物均被禁止使用。虽然我
国还没有作出相应的限制 ,但医务工作者不可掉以
轻心。本实验确定的方法简便 、快速 ,准确可靠 ,灵
敏度高 ,可用于检测朱砂莲块茎中马兜铃酸 A 的含
39 河北 医科大学学 报　　第 27卷　第 1期
量 ,以确保该药的安全 、合理使用。
3. 2　将马兜铃酸 A 对照品溶于确定的流动相中 ,
于分光光度计上进行光谱扫描 ,测定结果显示 ,马兜
铃酸 A 在 315 nm 波长处有最大吸收 ,故选用此波
长作为测定波长 。
3. 3　实验以甲醇-水为流动相 ,马兜铃酸 A 色谱峰
易拖尾 ,对称度差;于流动相中加入适量的冰醋酸可
抑制其拖尾 ,并可改变峰形。
3. 4　本实验参考文献[ 3 , 4] ,确定样品中甲醇索氏
提取 8 h ,马兜铃酸可以提取完全 ,且重现性良好 。
再经酸化 ,氯仿萃取 ,可消除其他物质对马兜铃酸 A
色谱峰的干扰。
【参考文献】
[ 1] 　刘笼 ,吴家 ,荣李林 ,等. 贵州朱砂莲药材的生药鉴定[ J] . 贵州
医药 , 1999 , 23(2):157.
[ 2] 　李宏. 四川朱砂莲的化学成分研究[ J] . 植物学报 , 1995 , 37
(9):745.
[ 3] 　崔晓红 , 袁志芳 ,万永占 ,等. RP-HPLC法测定朱砂莲胶囊中
马兜铃酸 A 的含量[ J] . 中草药 , 2004 , 35(17):1118.
[ 4] 　陈邑. HPLC测定朱砂莲胶囊中马兜铃酸 A 的含量[ J] . 重庆
医科大学学报 , 2003 , 28(1):84.
论　　著
　　[ 收稿日期] 2005-09-29;[ 修回日期] 2005-11-15
[ 作者简介] 王彩霞(1971- ),女 ,内蒙包头人 ,石家庄制药集团
中奇制药技术有限公司工程师 ,药理学硕士 ,从事药理学研究。
注射用苦碟子对大鼠急性心肌缺血的保护作用
王彩霞1 ,李彦辉1 ,刘玉兰2 ,高玉清1
(1. 石家庄制药集团中奇制药技术有限公司 , 河北 石家庄 050041;2. 沈阳药科大学药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
　　【摘要】　目的 观察注射用苦碟子[ I xeris Sonchi f olia(Bge .)Hance ] 抗心肌缺血作用 , 分析其作用机制。方
法 采用连续注射盐酸异丙肾上腺素(isopro terenol , Iso)法制作大鼠急性心肌缺血模型 , 通过进行心电图 、血清肌酸
激酶(creatine kinase , CK)、 谷草转 氨酶 (glutamic oxaloacetic tr ansaminase , GOT)、乳 酸脱氢 酶( lactate
dehydro genase , LDH)、 心 肌 超 氧 化 物 歧 化 酶 ( supero xide dismtase , SOD)、 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶
(g lutathionepe ro xidase , GSH-PX)活力和丙二醛(malondialdhyde , MDA)含量测定及心肌病理组织学检查 , 探讨苦
碟子抗心肌缺血的作用及其机制。结果 注射用苦碟子每天以 7. 2 、 3. 6 、 1. 8 mg /kg 静脉注射 , 可明显降低缺血性
心电图中 ST 段异常偏移 , 与模型组比较有统计学意义( P <0. 05)。注射用苦碟子预先用药可使大鼠心肌缺血程
度减轻 ,降低急性心肌缺血大鼠血清中 CK 、GOT 、LDH 及心肌匀浆中 MDA 水平 , 升高 GSH-PX、SOD 活力 ,与模
型组比较均有统计学意义( P 均<0. 05)。结论 注射用苦碟子对 I so 引起的实验性心肌缺血有保护作用 , 其机制可
能与稳定细胞膜 、抑制氧自由基 、抗脂质过氧化作用有关。
【主题词】　菊科;心肌缺血;药理学;大鼠
【中图分类号】　R285. 5　　　【文献标识码】　A　　　【文章编号】　1007-3205(2006)01-0040-03
　　苦碟子[ I xeris Sonchi f ol ia(Bge. )Hance ] 异
名满天星 、苦荬菜 ,为菊科植物抱茎苦荬菜的全草 。
苦碟子注射液是以苦碟子为原料提取精制而成的静
脉注射液 ,经化学分析 ,其主要成分为腺苷及黄酮类
物质 。药理研究证明 ,苦碟子具有抑制氧自由基 ,防
治缺血及缺血再灌注损伤 ,扩张血管 ,增加心脑血流
量 ,增加纤溶活性 ,降低心肌耗氧量 ,改善微循环 ,镇
痛 、镇静及解除平滑肌痉挛的作用[ 1] 。本实验采用
连续注射盐酸异丙肾上腺素(isopro tereno l , Iso)造
成大鼠急性心肌缺血模型 ,以市售苦碟子注射液作
阳性对照 ,观察采用超临界萃取法提取制备的注射
用苦碟子抗心肌缺血作用 ,并对其作用机制进行初
步探讨 。
1　材 料 与 方 法
1. 1　动物:Wistar 大鼠 ,体质量 200 ～ 250 g ,雄性;
沈阳药科大学实验动物中心提供 ,动物生产合格证
号:SXCK(辽)2003-008号。
1. 2　药品与试剂:注射用苦碟子(10 mg /支 ,含生
40 第 27卷第 1期2006年 1月 　 河 北 医 科 大 学 学 报JOURNAL OF H EBEI MEDICAL UNIVERSIT Y　Vol. 27　No. 1Jan. 　2006