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分光光度法鉴别合欢皮与山合欢皮



全 文 :分光光度法鉴别合欢皮与山合欢皮
李洁 山东中医药大学基础医学院中西医结合肿瘤防治技术重点实验室(济南 250014)
  摘要:目的:提供合欢皮与山合欢皮的一种新的鉴别方法 。方法:采用分光光度法测定合欢皮与山合欢皮溶血反应后在特定波
长处的吸收度 ,对其进行比较分析 。结果:合欢皮与山合欢皮之间有明显而稳定的差异 。结论:分光光度法可以作为鉴别合欢皮与
山合欢皮的准确可靠的方法 。
  关键词:合欢皮;山合欢皮;分光光度法
Absorption Spectrometry Identification Between Bark of Silktree
Albizziae and Bark of Silktree Albizziae Kaldora
Li Jie
Shandong University of TCM , Jinan 250014 , China
Abstract:Objective:To provide a new identification method between Bark of Silktree Albizziae and Bark of Silktree Albizziae kaldora.Method:Used
gel electrophoresis technique to analyze.Result:There are difference between UV spectrum of Bark of Silktree Albizziae and Bark of Silktree
Albizziae kaldora.Conclusion:UV spectra is an effective method for identification of Bark of Silktree Albizziae and Bark of Silktree Albizziae
kaldora.
Key words:Bark of Silktree Albizziae;Bark of Silktree Albizziae kaldora;Absorption spectrometry
  中药合欢皮(Cortex Albiziae)为豆科(leguminosae)
植物合欢 Albizia julibrissin Durazz.的干燥树皮[ 1] 。合欢
皮是常用中药 ,具有解郁安神 、活血消肿之功 。近代药
理学研究表明合欢皮有镇静 、催眠 、抗早孕 、抗过敏和
抗癌等活性。据调查 ,在商品药材中 ,以同属植物山合
欢 A.kalkora(Roxb.)Prain 皮代替合欢皮应用的现象
时有发生 ,但 2005年版《中国药典》只把合欢皮作为正
品收载 ,而山合欢皮属于混淆品。鉴于此 ,本实验根据
合欢皮与山合欢皮均含有皂甙 ,具有溶血特性 ,但两者
皂甙含量不同 ,采用分光光度法测定溶血反应后在特
定波长处的吸收度 ,从而对其作出准确的鉴别 。
1 实验材料
合欢 Albizia julibrissin Durazz.与山合欢 Albizia
kalkora (Roxb.)Prain的树皮采自济南郊区 ,并由山东
中医药大学药学院生药系石俊英教授鉴定。
2 实验仪器与试剂
UV-2201 型紫外可见分光光度计(日本岛津),
DZKW-C型恒温水浴箱 ,低速离心机。
3 实验方法与结果[ 2 , 3]
3.1 供试样品的制备 精密称取合欢皮 、山合欢皮粗
粉(40目)各 1g ,置于 10ml试管中 ,加蒸馏水 10ml ,冷
浸12小时后 ,置 60℃水浴中 ,温浸 1h ,过滤 ,即得 。
3.2 2%红细胞混悬液的制备 从兔耳缘静脉抽取兔
血约 10ml , 加适量 5%枸橼酸钠 , 混匀 ,离心 10min
(2000转 min),吸取上层液体 ,用生理盐水洗涤 2次 ,
至上层液体变清 ,取沉积的红细胞 2ml ,置 100ml容量
瓶中 ,加生理盐水稀释至刻度 ,即得 。
3.3 分光光度法鉴别 以 0.9%NaCl溶液 2.5ml为阴
性对照管 ,用新鲜蒸馏水 2.5ml为阳性对照管 ,取合欢
皮 、山合欢皮滤液各 0.5ml ,分别加入 0.9%氯化钠溶
液2ml ,为试验管 。上述各管再加入 2%兔红细胞生理
盐水混悬液2.5ml ,轻轻混匀 , 37℃水浴保温 60min ,离
心10min(2000r min),取出 ,分别吸取上清液移入比色
皿内 ,在 575nm波长处测定吸收度。比色前用对照液
调到零点 ,再进行比色 ,读出吸收度 。
结果计算:溶血程度用%表示 ,按下公式 ,实验结
果参见表 1。
溶血程度=A t-A ne
Ape-Ane ×100%
At =试验样品的吸收度;Ane =阴性对照管的吸收
度=0;Ape =阳性对照管的吸收度=1.75。
表 1 合欢皮与山合欢皮在 575nm处的吸收度
药材名 A1 A 2 A3 A4 A5 ∑A
合欢皮 1.48 1.52 1.51 1.47 1.50 1.496
山合欢皮 0.46 0.51 0.49 0.50 0.47 0.486
将所测的数值代入上列公式 ,计算 ,合欢皮的溶血
程度=84.3%;山合欢皮的溶血程度=27.7%;经统计
学处理合欢皮与山合欢皮的溶血程度有显著性差异 ,
P <0.05 。
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4 讨论
合欢与山合欢同为豆科植物 Albizia 属的两种植
物的树皮 ,主要成分均为皂甙 ,其水溶液能破坏红细胞
而有溶血作用 ,溶血的机理是皂甙与血液中胆固醇生
成分子结合物所致 ,它作用于红细胞表面的类脂质而
破坏红细胞 ,使红细胞中的主要成分血红蛋白和血红
素释放出来 ,血红素在 575±1nm 附近有强烈的吸收
峰 ,本实验采用分光光度法测定溶血反应后的光吸收
值。实验结果表明 ,合欢皮与山合欢皮都有溶血作用 ,
但其溶血程度有显著性差异(P<0.05)。这种方法操
作简便 ,重现性好 ,而且稳定可靠 ,可以作为合欢皮与
山合欢皮的一种鉴别方法 。
参考文献
[ 1]  卫生部药典委员会.中国药典(一部)[ S] .广州:广州科技出版社 ,
2005.97
[ 2]  张勇钢 ,李威.合欢皮与山合欢皮的理化性质的比较研究[ J] .武
汉生物工程学院学报 ,2006 , 2(1):19—20
[ 3]  干国平 ,朱红 , 刘焱文.山合欢皮的生药鉴定[ J] .中药材 , 2007 , 30
(3):281—282
(收稿日期:2008-02-02)
黄连在复方中药制剂提取中应该注意的问题
秦延讯 郭春景 山东省枣庄市滕州市中医医院(277500)
  摘要:目的:减少黄连在复方中药制剂水提取损失率 。方法:由于黄连的有效成分及其结构和物理化学性质易与中药的其他特
殊成分 ,生成沉淀物 ,对黄连在水提取中 ,易产生沉淀的制剂工艺中的关键条件的进行初步实验 ,分析 。结论:黄连在复方中药制剂
提取 ,通过控制制剂工艺中的关键条件 ,可以减少或避免黄连在复方中药制剂水提取中与其他中药成分产生沉淀 。
  关键词:黄连 复方中药制剂;水提取
  黄连在中医临床处方上是一味常用中药 ,但在其
复方制剂中与其它部分中药材配伍用药 ,特别是水加
热提取时 ,其有效成分易与其它药物的成分生成不溶
与水的沉淀物 ,造成有效成分提取减少 。影响药物疗
效。我院的协定处方“速克痛口服液”和“灭幽愈疡合
剂”两个制剂的生产过程中 ,也生成了不溶于水的沉淀
物 ,我们对此现象进行了初步分析 ,现报告如下:
1 黄连的有效成分及其结构和物理化学性质
全国高等中医药院校规划教材《中药化学》中 ,对
黄连的研究如下:主要含生物碱 ,是有效成分 ,其中小
檗碱含量最高 ,小檗碱对痢疾杆菌 、葡萄球菌及链球菌
等有显著的抑制作用。小檗碱是季铵型生物碱 ,在水
中溶解度大 ,水溶液呈碱性 。游离的小檗碱和酸结合
时易生成盐 ,其盐酸盐在冷水中溶解度小 ,其硫酸盐 、
磷酸盐在水中溶解度大。小檗碱和大分子有机酸生成
的盐在水中的溶解度很小。因此 ,当黄连和甘草 、黄
芩 、大黄等中药配伍时 ,小檗碱和甘草酸 ,黄芩甙 、大黄
鞣质等易形成难溶于水的盐或分子复合物而析出 。由
此可见黄连在与含有大分子有机酸或酸性较强的大分
子成分的药物一起提取时 ,易生成沉淀物。
2 处方分析
处方组成:速克痛口服液:乌梅 ,川连 ,白芍 ,黄芩 ,
白芷 ,细辛 ,花椒 ,荜茇 ,陈皮 ,白术 ,川芎 ,石膏 ,羌活 ,
甘草 。灭幽愈疡合剂:黄连 ,蒲公英 ,白花蛇舌草 ,陈
皮 ,厚朴 ,清半夏 ,白术 ,丹参 ,赤芍 ,白及 ,地榆 ,甘草 ,
经过对两个处方中药物进行分析 ,发现在药物配伍中
速克痛合剂中有黄连 、甘草 、黄芩三味药物;灭幽愈疡
合剂中有黄连 、甘草两味药物 ,因此会产生沉淀物 ,主
要与黄连中小檗碱的化学结构有关 。在一定环境下 ,
黄连中的小檗碱与这些大分子有机酸或酸性较强的大
分子成分一旦混合 ,便会有沉淀物析出 ,因此以上 2个
制剂一定有沉淀物析出。
3 生产工艺流程研究分析
3.1 制剂工艺流程 两个制剂都是水提酵沉法 ,生产
工艺大致相同。具体生产工艺流程是:将处方中全部
药物水煎煮 ,并提取挥发油 ,合并提取液 ,浓缩 ,浓缩液
醇沉后 ,取上清夜 ,去乙醇 ,配制到需要量 ,灌装 ,蒸气
消毒。在消毒后发现装药液的瓶壁上和瓶底处 ,出现
沉淀物 。起初课题组认为是药液过滤不充分 ,拆开部
分成品药液 ,重新过滤 ,精制 ,灌装 ,消毒 ,同样出现沉
淀物。反复 2 次 ,结果相同。由此可见 ,水煎煮提取
时 ,药物成分大都溶于水 ,所以小檗碱能与甘草酸 、黄
芩甙生成了溶解度很小的盐或分子复合物 ,形成沉淀
物析出。提取和浓缩时 ,由于时高温加热 ,并促进了盐
或分子复合物的形成 ,造成更多的沉淀物的析出 ,致使
有效成分的提取率降低。也说明 ,与上述提取药液受
热温度高低 ,时间长短也有关系。
3.2 沉淀物的溶解性实验 收集沉淀物 ,在常温下分
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