全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2010，25(4)∶461 ～ 463
基金项目:广东省社会发展领域重大科技专项(编号:2007A03200001) ;广东林业科技计划项目
作者简介:丁平，女，教授，从事中药资源与质量标准研究。Email:dingpinggz@ 126． com
鸡血藤化学成分的指纹图谱研究
丁 平，仰铁锤，林振坤，徐鸿华
(广州中医药大学中药学院，广东 广州 510405)
摘要:目的 建立鸡血藤药材的 RP － HPLC指纹图谱分析方法，评价 23 批鸡血藤药材的质量。方法 采用 Diamonsil C18色
谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，以乙腈(A)－ 0． 1%醋酸水(B)为流动相梯度洗脱，流速 1． 0 mL·min －1，检测波长 260 nm，柱
温为室温。结果 测定了 23 批鸡血藤药材的 HPLC图，建立了标准指纹图谱，有 16 个共有峰，分别由原儿茶酸、表儿茶素、大
豆苷元、染料木素、毛蕊异黄酮、异甘草素等组成。结论 鸡血藤化学成分的 HPLC指纹图谱特征性及专属性强，方法重复性
好，可为控制鸡血藤药材质量提供实验依据。
关键词:鸡血藤;高效液相色谱法;指纹图谱
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2010)04 － 0461 － 03
Study on HPLC chromatographic fingerprint of Caulis spatholobi
DING Ping，YANG Tie － chui，LIN Zhen － kun，XU Hong － hua
(College of Chinese Materia Medica，Guangzhou University of CM，Guangzhou，Guangdong，510405 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish the chromatographic fingerprints by RP － HPLC and evaluate the quality of Caulis spatholobi
from 23 batches． METHOD The separation was performed on a Diamonsil － C18 column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)using a gradient
elution with acetonitrile － water (containing 0． 1% acetic acid)as the mobile phase． The flow rate was 1 mL·min －1 ． The detection
wavelength was 260 nm． The temperature of column was at room temperature． RESULTS The chromatographic fingerprint of Caulis
spatholobi was established，which showed 16 characteristic peaks from 23 batches of crude drug． The main components of fingerprints
consisted of protocatechuic acid，epicatechin，daidzein，genistein，calycosin，isoliquiritigenin and so on． CONCLUSION The
chromatographic fingerprinting of spatholobus suberectus with high specificity can be used to control its quality and assure lot － to － lot
consistency． The established method is simple and rapid to identify and differentiate samples of Spatholobus suberectus collected from
different areas and its counterfeit．
Key words:Caulis spatholobi;HPLC;Fingerprint
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2010)04 － 0461 － 03
鸡血藤为豆科植物密花豆 Spatholobus suberectus
Dunn的干燥藤茎，性温，味甘苦，归肝、肾经，具有补
血、活血、通络的功效，用于治疗月经不调、血虚萎黄
等症［1］。主产于广西、广东，化学成分主要有黄酮
类、香豆素类、蒽醌和三萜类等［2 － 4］。文献［5 － 7］以表
儿茶素、3 －羟基 － 9 甲氧基紫檀烷为对照品，采用
HPLC法测定了鸡血藤药材的含量测定并研究了其
指纹图谱，在此基础上，用 RP － HPLC 法，对广西、
广东等 5 个产地 23 份鸡血藤药材及其 7 种混伪品
进行了分析，建立了鸡血藤化学成分的指纹图谱，可
为控制鸡血藤药材质量提供实验依据。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
Dionex summit P680 高效液相色谱仪(美国戴
安) ;ChromafingerTM色谱指纹图谱系统解决方案软
件(珠海科曼中药研究有限公司)。大豆苷元、染料
木素、表儿茶素对照品(中国药品生物制品检定
所) ;原儿茶酸(广州波柏贸易有限公司) ;毛蕊异黄
酮(中国药科大学) ;异甘草素(陕西旭煌植物科技
发展有限公司) ;鸡血藤药材及其混伪品(市售) ，凭
证标本存于广州中医药大学中药资源教研室(表
1) ;乙腈、乙酸为色谱纯;其余试剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil － C18柱(250
mm ×4． 6 mm，5 μm)、保护柱为 Security GuardTM C18
(4． 0 mm × 3． 0 mm，5 μm) ;流动相 A 为乙腈、B 为
0． 1%醋酸;梯度洗脱条件为 0 min，A － B(10∶90) ;
0 ～ 25 min，10∶90→15∶85;25 ～ 55 min，15∶85 →
25∶75;55 ～ 95 min，25∶75 →45∶55;95 ～ 120
min，45∶55 →70∶30;120 ～ 130 min，70∶30 →
90∶10;130 ～ 140 min，90∶10 到 100%乙腈;流速
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2010.04.019
1． 0 mL·min －1;柱温室温;检测波长 260 nm;进样 量 10 μL。
表 1 鸡血藤及其混伪品
Table1 Caulis spatholobi and its counterfeits
序号 品名 /学名 收集地点 产地 序号 品名 /学名 收集地点 产地
01 鸡血藤 Spatholobus suberectus Dunn 百益堂大药房 广西百色 16 鸡血藤 S． suberectus Dunn 仁和堂 广东
02 鸡血藤 S． suberectus Dunn 钦州药材公司 广西钦州 17 鸡血藤 S． suberectus Dunn 广东省人民医院 广东
03 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 广西百色 18 鸡血藤 S． suberectus Dunn 宝芝林大药房 广东
04 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 广西柳州 19 鸡血藤 S． suberectus Dunn 广州药品检验所 广东高要
05 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 广西南宁 20 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 越南
06 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 广西凭祥 21 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 越南
07 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林健济堂 广西玉林 22 鸡血藤 S． suberectus Dunn 金康药房 江西
08 鸡血藤 S． suberectus Dunn 钦州慧昌药店 广西钦州 23 鸡血藤 S． suberectus Dunn 玉林药市 云南
09 鸡血藤 S． suberectus Dunn 广西宁明 广西宁明 24 山鸡血藤 Millettia dielsiana Harms 商品 广州清平
10 鸡血藤 S． suberectus Dunn 广州药品检验所 广西 25 油麻血藤 Mucuna sempervirens Hemsl． 商品 广州清平
11 鸡血藤 S． suberectus Dunn 大参林药店 广东 26 过岗龙 Entada phaseoloides (L．)Merr 商品 广州清平
12 鸡血藤 S． suberectus Dunn 吕祥堂药店 广东 27 大血藤 Sargentodoxa cunenta(Oliv．)Rehd． et Wils． 商品 广州清平
13 鸡血藤 S． suberectus Dunn 全家福药店 广东 28 广东海风藤 Kadsura heteroclita(Roxb．)Craib 商品 广州清平
14 鸡血藤 S． suberectus Dunn 广东德庆 广东德庆 29 圆过岗龙 Bauhinia championi (Benth．)Benth 商品 广州清平
15 鸡血藤 S． suberectus Dunn 普翠堂药房 广东 30 通关藤 Marsdenia tenacissima (Roxb．)Wight et Am． 商品 贵州
1. 2. 2 溶液的制备 精密称取适量原儿茶酸、表儿
茶素、大豆苷元、染料木素、毛蕊异黄酮、异甘草素对
照品，加甲醇分别配成 1． 110、3． 020、0． 103、0． 104、
0． 108、1． 080 mg·mL －1的混合对照品溶液。精密称
取 3． 0 g 样品粗粉(过 20 目筛) ，置磨口三角瓶中，
以甲醇超声(220 W，55 kHz)提取(50、50、30 mL) ，
每次提取 30 min。提取液以 4 × 103 r·min －1离心 5
min，取上清液，减压浓缩，用 20% 甲醇定溶至 30
mL，并以乙酸乙酯萃取 3 次(30、30 、20 mL) ，萃取
液减压浓缩，甲醇定容至 5 mL 量瓶中，作为供试品
溶液，冷藏。
1. 2. 3 精密度试验 精密吸取 10 μL 同一份鸡血
藤药材供试品溶液，连续进样 5 次，测得各共有峰相
对峰面积和相对保留时间的 RSD 分别小于 5%和
0． 6%，表明仪器精密度良好。
1. 2. 4 重复性试验 精密称取鸡血藤药材粉末 5
份，按“1． 2． 2”项下方法制备供试品溶液。分别进
样 10 μL，测得供试品溶液各共有峰相对峰面积和
相对保留时间的 RSD 分别小于 4%和 0． 5%，表明
重复性良好。
1. 2. 5 稳定性试验 精密吸取同一份鸡血藤药材
供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、24 h时进样 10 μL，
测得供试品溶液各共有峰相对峰面积和相对保留时
间的 RSD分别小于 5%和 0． 9%，表明样品溶液在
24 h内稳定。
1. 2. 6 鸡血藤指纹图谱的建立 分别精密吸取空
白溶剂、混合对照品溶液以及供试品溶液 10 μL 进
样，按“1． 2． 1”项下色谱条件测定，记录 140 min 内
的色谱图。建立了 23 批鸡血藤样品及 7 批混伪品
的 HPLC指纹图谱(图 1)。将所得样品的 HPLC 指
纹图谱数据导入 ChromafingerTM指纹图谱解决方案
软件，生成共有模式并积分。将鸡血藤代表性样本
数据采用中位数法确定特征峰，均数法计算特征值。
在 23 批鸡血藤样品的指纹图谱中，其相对保留时间
及色谱峰较稳定的峰有 16 个，确定为鸡血藤共有峰
为 1 ～ 16 号峰，构成了鸡血藤药材 HPLC 指纹图谱
共有模式。通过与对照品对照，指认了其中 6 个色
谱峰。即 1 号峰为原儿茶酸，4 号峰为表儿茶素，8
号峰为大豆苷元，10 号峰为毛蕊异黄酮，11 号峰为
染料木素，12 号峰为异甘草素。鸡血藤药材的
HPLC指纹图谱共有模式见图 2。
图 1 鸡血藤(A)及其混伪品(B)的 HPLC指纹图谱
Fig 1 HPLC fingerprint chromatograms of Caulis spatholobis(A)and its counterfeits(B)
264 华 西 药 学 杂 志 第 25 卷
图 2 鸡血藤药材 HPLC指纹图谱共有模式
Fig 2 The common of HPLC fingerprint chromatogram of Caulis
spatholobis
2 讨论
曾考察甲醇 －水、甲醇 －醋酸水、乙腈 －水、乙
腈 －醋酸水为流动相进行梯度洗脱。结果表明:用
乙腈 － 0． 1%醋酸水体系，能使各色谱峰达到较好分
离，峰形对称，既能满足基线分离的要求，又有适宜
的保留时间。还考察了两种色谱柱［Luna C18(2)
柱、Diamonsil C18柱］，比较了不同保留时间、出峰数
量、分离度、峰形对称性、柱压以及经济环保等因素，
选用 Diamonsil C18柱建立鸡血藤药材的 HPLC 指纹
图谱。
鸡血藤中黄酮类成分在 260 nm有较强吸收、儿
茶素类在 280 nm有较强吸收，选择 260 nm，各成分
均达到较好吸收、出峰较多、峰形对称。还比较了不
同提取溶剂(甲醇、乙酸乙酯、氯仿)、不同提取方法
(超声、冷浸、回流)、不同提取时间和提取次数。甲
醇超声提取(30 min × 3)既利于处理又能提取出较
多成分;其超声提取液的再处理方法(乙酸乙酯萃
取、ODS、大孔树脂柱洗脱) ，经乙酸乙酯萃取后，鸡
血藤中各化学成分损失较少，出峰最多，基线平稳。
鸡血藤药材中主含黄酮类成分，亦是其有效成
分，其中主要含有表儿茶素、大豆苷元、芒柄花素、异
甘草素等［5，8］。文中测得异甘草素峰面积相对最
大，含量较高，异甘草素具有抗肿瘤、抗病毒、抗自由
基、抑制脂质过氧化等生物活性［9 － 10］，是否与鸡血
藤补血、活血等的药效有关，需结合药理学做进一步
研究。在确定的主要成分中 16 个峰为共有峰，包括
儿茶素和黄酮两类成分，为了方便辨认，将该图谱分
为两部分(图 2) ，Ⅰ部分为极性较大的儿茶素类成
分，Ⅱ部分为极性相对较小的黄酮类成分。由对照
品可以确认 6 种化学成分，分别为原儿茶酸和表儿
茶素(Ⅰ) ，大豆苷元、染料木素、毛蕊异黄酮、异甘
草素(Ⅱ)。同时利用 ChromafingerTM软件对 23 批药
材进行了指纹图谱分析，23 批药材均含有以上 6 种
化学成分，且均具有图 2 中的 16 个色谱峰。由结果
可知，23 批鸡血藤药材均来自野生，各成分相对含
量的差异造成了指纹图谱相似度相差很大，提示鸡
血藤成分的稳定性及含量是药材品质评价的主要问
题之一。
市场上鸡血藤来源涉及 6 科 30 余种。文中研
究收集了广州清平市场上常见的 7 种混伪品(表
1) ，均作为“鸡血藤”或“血藤”在广州市场上销售。
从图 1B可以看出:7 种混伪品与鸡血藤化学成分指
纹图谱的整体轮廓差别较大，山鸡血藤等 4 种混为
品来源于豆科，但化学成分组成存在较大不同;木通
科的大血藤在民间常作为鸡血藤用药，但从 50 min
后的图谱，基本没有峰出现，与鸡血藤药效物质不
同;来源于木兰科广东海风藤所含主要成分极性相
对较大，来源于萝藦科通关藤所含主要成分极性相
对较小，均与鸡血藤成分组成不同。通过 HPLC 方
法分析可知:以上 7 种混伪品不能作为鸡血藤药用。
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收稿日期:2009 － 12 － 16
364第 4 期 丁 平，等。鸡血藤化学成分的指纹图谱研究