全 文 ： 2005, Vol. 26, No. 10 食品科学 ※工艺技术156
拳卷地钱总黄酮的提取与纯化
朱 华1，邹登峰2，肖建波3,*，谢爱泽2，何翠薇2
(1.桂林医学院，广西 桂林 541004；2.广西中医学院，广西 南宁 530001；
3.中南大学化学化工学院，湖南 长沙 410083)
摘 要：本文系统地研究了溶剂、浓度、温度、时间对拳卷地钱总黄酮提取的影响，优化了工艺，得到了最佳
条件：80%乙醇、74℃、提取2h，提取率达1.90%；并对拳卷地钱总黄酮的提取物进行纯化，选择了溶剂萃取-
硅胶柱层析纯化拳卷地钱总黄酮提取物，纯度达95.63%，总收率94.47%。
关键词：拳卷地钱；总黄酮；提取；纯化
Extraction and Purification of Flavones from Marcha tia convoluta
ZHU Hua1，ZOU Deng-feng2，XIAO Jian-bo3,*，XIE Ze-ai2，HE Cui-wei2
(1.Guilin Medical College, Guilin 541004, China；
2.Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning 530001, China；
3.College of Chemistry and Chemical Engineering, Central South University, Changsha 410083, China)
Abstract ：A method for leaching and purifying the flavones from Marchantia convo uta was stablished. The article studied four
different solvents to extract flavones from Marchantia convoluta with different concentration, temperature and time. The optimum
conditions were: 80 %ethanol at 74℃ extracted for 1 hour. The average yield of flavones from M rch ntia conv luta was 1.90 %.
Key words：Marchantia convoluta；flavones；leaching and purifying
中图分类号：Q949.751.5 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2005)10-0156-04
收稿日期：2004-02-16 ﹡通讯作者
基金项目：广西壮族自治区科技攻关项目(桂科攻0235022—1B)；广西壮族自治区回国人员科技基金项目(桂科回0009004)
作者简介：朱华(1959-)，男，教授，博士，主要从事中草药开发方面研究。
地钱又名地衣，广泛分布于各地，多生于阴暗潮
湿的地方[ 1 ]。地钱的药用始载于《名医别录》，《本
草纲目》中谓之“石衣”，味淡，性凉，归肝经[ 2 ]。
具有清热利湿、解毒敛疮之功效。资源调查表明广西
境内存在3种地钱科植物，其中以拳卷地钱(Marchantia
convoluta)为主[3]。民间常用拳卷地钱来治疗急性肝炎。
目前国内外对拳卷地钱的研究报道较少，拳卷地钱的化
学成分主要包括黄酮和挥发油等[4～7]。
天然药用植物中黄酮类化合物的提取常用有机溶剂
提取法、碱提法、水提法、超临界萃取法、微波法、
超声法等方法[8～12]。拳卷地钱总黄酮的提取和纯化国内
外文献尚未见报道。本文用甲醇、乙醇、丙酮和水在
不同浓度、温度、时间下提取拳卷地钱总黄酮，采用
铝盐显色可见分光光度法测定总黄酮含量，得到了最
佳工艺条件：80%乙醇、74℃、提取2h，提取率达
1.90%；并对拳卷地钱的黄酮提取物进行纯化化工艺研
究，最后选择了溶剂萃取-硅胶柱层析法纯化拳卷地钱
总黄酮提取物，纯度达95.63%，总收率94.47%。
1 材料与方法
1.1仪器与试剂
旋转蒸发器 上海申生仪器厂；紫外可见分光光
度计756MC 上海分析仪器厂；甲醇、乙醇、丙酮、
乙酸乙酯、正丁醇等试剂均为AR级，硅胶 青岛海
洋化工厂、硅藻土、AB-8树脂和聚酰胺均为AR级。
拳卷地钱药材 广西中医学院提供。
1.2拳卷地钱总黄酮的测定
移取40.00μg/ml芦丁乙醇溶液0、2、3、4、5、
6、7ml于25ml容量瓶中，加入0.50mol/L NaNO2溶液
1ml，摇匀，静置5min后，加入0.30mol/L AlCl3溶液
157※工艺技术 食品科学 2005, Vol. 26, No. 10
1ml，摇匀，加入1.00mol/L NaOH溶液5ml，60%乙醇
定容至刻度，用1cm比色皿，以60%乙醇作参比，于
波长525nm处测其吸光度，得到芦丁标准溶液的工作曲
线。用最小二乘法进行回归，得到吸光度值A与芦丁
标准溶液的浓度C(μg/ml)的关系曲线：
C=－0.0153+0.03003A，回归系数r=0.9997，RSD=0.16%。
校准曲线如图1所示。
2 3 4 5 6 7
芦丁标准溶液浓度(μg/ml)
0.20
0.18
0.16
0.14
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
吸
光
度
A
图1 校准曲线
Fig.1 Calibration curve
1.3拳卷地钱总黄酮的提取
1.3.1有机溶剂提取
准确称取1g粉碎后的拳卷地钱，分别用不同浓度
50 60 70 80 90 %
60℃
50℃
74℃
50 60 70 80 90
甲醇百分浓度(%)
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
提
取
率
(
%
)
图2 甲醇提取试验结果
Fig.2 Result of extraction with methanol
0
0
4
%
74℃
68℃
60℃
55℃
50 60 70 80 90
乙醇百分浓度(%)
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
提
取
率
(
%
)
图3 乙醇提取试验结果
Fig.3 Result of extraction with ethanol
4
8
0
5
％
55℃
45℃
50 60 70 80 90
丙酮百分浓度(%)
1.05
1.00
0.95
0.90
0.85
0.80
0.75
0.70
0.65
0.60
提
取
率
(
%
)
图4 丙酮提取试验结果
Fig.4 Result of extraction with acetone
5℃
5℃
的甲醇、乙醇、丙酮水溶液30ml，在不同温度下提取
1h，流水冷却，定容至50ml，过滤，取滤液5.00ml，
按1.2法测定总黄酮含量，计算提取率，结果见图2、
3、4。
℃
3hour
2hour
1hour
50 60 70 80 90
温度(℃)
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
提
取
率
(
%
)
图5 水提取试验结果
Fig.5 Result of extraction with water
h
h
h
1.4黄酮提取物的纯化
1.4.1拳卷地钱总黄酮的提取
广西中医学院提供之拳卷地钱干燥品200g，加入
80%的乙醇水溶液1000ml，在74℃下回流提取2h，过
滤，重复三次，合并滤液，减压蒸馏回收乙醇，蒸
至约400ml，待用。取该提取液3.00ml五份，按1.2法
测定总黄酮含量，利用标准曲线计算总黄酮提取率。
1.4.2溶剂萃取硅胶柱层析法纯化总黄酮
取1.4.1提取液50ml，用50ml石油醚萃取3次，50ml
乙酸乙酯萃取3次，萃余液拌入硅胶，干法装柱，用
1.3.2水提取实验
准确称取1g拳卷地钱五份，各加入水30ml，在50、
60、70、80、90℃下分别提取1、2、3h，流水冷
却，定容至50ml，过滤，取滤液5.00ml，按1.2法测
定总黄酮含量，计算提取率，结果见图5。
2005, Vol. 26, No. 10 食品科学 ※工艺技术158
500ml 70%甲醇洗脱，减压蒸馏回收甲醇，浓缩至约
50ml，定容后取滤液3.00ml三份，按1.2法测定总黄酮
含量，利用标准曲线计算总收率。冷冻干燥后测定纯
度 。
1.4.3硅藻土吸附法纯化总黄酮
取1.4.1提取液50ml，拌入约30g硅藻土，水浴蒸
干，依次用50ml石油醚，50ml乙酸乙酯，150ml(50ml
×3)乙醇洗脱，乙醇洗脱液减压蒸馏至50ml，取滤液
3.00ml三份,按1.2法测定总黄酮含量，在标准曲线上查
找，计算总黄酮含量，利用标准曲线计算总收率。冷
冻干燥后测定纯度。
1.4.4大孔树脂吸附法纯化总黄酮
取1.4.1提取液50ml三份于分液漏斗中,分别加入AB-
8树脂10、20、30g，振荡1h，放去上清液，用50ml
水洗，合并上清液和水洗液，定容至100ml，取10.00ml
按1.2法测定总黄酮含量，在标准曲线上查找，计算吸
附率。再将AB-8树脂用150ml(50ml×3)70%乙醇水溶
液淋洗，取淋洗液5.00ml，按1.2法测定总黄酮含量，
在标准曲线上查找，计算洗脱率。冷冻干燥后测定纯
度 。
1.4.5聚酰胺吸附法纯化总黄酮
取1.4.1提取液50ml于烧杯中，拌入聚酰胺20g，
蒸干，取60g处理过的聚酰胺装入玻璃柱底部，将蒸干
的20g聚酰胺装在玻璃柱上部，用10%、20%、30%⋯
90%的乙醇水溶液各50ml淋洗，合并淋洗液，减压蒸
馏至50ml，取滤液3.00ml三份，按1.2法测定总黄酮含
量，利用标准曲线计算总收率。冷冻干燥后测定纯度。
2 结果与讨论
2.1各种溶剂对拳卷地钱总黄酮的提取比较
从图2～5可知相同时间下80%乙醇74℃提取率最
高，丙酮次之，甲醇、水最差。甲醇的极性与黄酮
类化合物极性相差较大，提取率不高，又因甲醇沸点
低，易挥发，不易操作，温度上升(＞64℃)提取率反
而下降。水提法总黄酮提取率低，且提取液存放易腐
败变质，后继的过滤、浓缩等操作困难且费时，这可
能是水的极性大，作溶剂时，易把蛋白质、糖类、鞣
质等易溶于水的成分提出来，因此易霉变。水只能提
取极性较大的黄酮甙，而且提取率低。
随温度上升水浸提总黄酮提取率有所提高，但提取
率仍较低(与其它溶剂相比)，增加提取时间提取率亦提
高不多。乙醇、丙酮克服了水提法存放易腐败变质的
缺点，丙酮极性小，提取率比水提法高，后继的过滤
等操作较容易，但价格昂贵。乙醇极性较小，80%乙
醇水溶液既可提取黄酮甙元又能提取黄酮甙，故提取率
高，随温度上升提取率有所提高，但80℃以后提取率
上升不明显;且乙醇提取液的过滤、溶剂回收、干燥等
过程容易进行。蛋白质、糖类等杂质在乙醇中不溶或
难溶，实际应用的关键是操作过程中回收乙醇、减少
乙醇的损失，降低成本。
2.2提取时间对提取率的影响
准确称取1g粉碎后的拳卷地钱四份，加入80%的
乙醇溶液20ml，在74℃下回流提取1、2、3、4h，照
上法测定拳卷地钱总黄酮，结果见表1。从表1数据可
知，该条件下，提取2 h后提取率变化不大，故提取
时间选择2h。
树脂质量 原液总量 吸附后 吸附率 洗脱后总量 洗脱率 总收率
(g) (g) 总量(g) (%) (g) (%) (%)
10 0.4750.27841.470.18091.3737.89
20 0.4750.09979.140.33188.0369.66
30 0.4750.09480.210.32886.0168.98
表2 AB-8树脂纯化试验结果
Table 2 Result of purification with AB-8 resin
时间(h) 1 2 3 4
提取率(%) 1.74 1.90 1.92 1.94
表1 乙醇提取时间对提取率的影响
Table 1 Effect of time on extraction rate
方法
原液总黄酮量 纯化后总 总收率 纯度
(g) 黄酮量(g) (%) (%)
溶剂萃取硅胶柱层析 0.475 0.450 94.4795.63
硅藻土吸附 0.475 0.382 80.4293.12
AB-8树脂吸附 0.475 0.331 69.6697.63
聚酰胺吸附 0.475 0.421 88.6392.58
表3 不同纯化工艺的比较
Table 3 Compare of different techniques
2.3AB-8树脂纯化结果
AB-8树脂纯化结果见表2所示。
从表2可知，对于0.475g总黄酮，20g AB-8树脂
的总收率最高，树脂质量大于20g时，虽然吸附率稍有
提高，但洗脱率下降，增加了洗脱难度。
2.4不同纯化工艺的比较
不同方法对黄酮提取物的纯化数据见表3。
159※工艺技术 食品科学 2005, Vol. 26, No. 10
从表3可知，此四种纯化工艺中，总收率以溶剂
萃取-硅胶柱层析为最高，且总黄酮纯度也较高，操作
简单，后处理方便，而AB-8树脂吸附纯化工艺虽然产
品纯度很高，但总收率低，吸附率和洗脱率都不高，
不宜工业应用，可作分离单体物质用；聚酰胺吸附纯化
工艺，吸附、洗脱速度慢，溶剂消耗大，由于聚酰
胺易碎成小分子，产品中残存大量聚酰胺小分子，影
响总黄酮的纯度和后处理；硅藻土吸附操作繁琐，硅藻
土不能带有水份，每次要烘干，且硅藻土洗脱速度慢，
后处理不方便，总收率不高。经筛选，采用溶剂萃取
分离，硅胶柱纯化，70%甲醇洗脱，可得到纯度为95.
63%的拳卷地钱总黄酮，总收率94.47%，设备简易，
操作简单，易实现工业化生产。
3 结 论
干燥拳卷地钱用80%的乙醇水溶液在74℃回流提取
2h，提取率达1.90%，采用溶剂萃取和硅胶柱层析相结合
的方法纯化拳卷地钱的总黄酮提取物，纯度达95.63%，总
收率94.47%，设备简单，后处理方便，易实现工业化
生产。
参考文献：
[1]胡人亮. 苔藓植物学[M]. 北京: 高等教育出版社, 1987. 2.
[2]夏征农. 辞海[M]. 上海: 上海辞书出版社, 1999. 639.
[3]朱华. 广西地钱属药用植物资源调查和形态构造研究[A].
见中国中医药学会编, 第7届全国中药标本馆专业学术讨
论会论文集[C]. 成都: 成都中医药大学, 2002, 161-165.
[4]曹慧, 肖建波, 周春山, 等. 拳卷地钱不同提取部位的GC-
MS分析比较和部分生物活性研究[J]. 质谱学报, 2005, 26
(1): 1-5.
[5]肖建波, 周春山, 朱华, 等. 反相高效液相色谱法用于拳
卷地钱中黄酮类化合物的分离和测定[J]. 分析试验室,
2005, 24(4): 17-19.
[6]Zhu Hua, Xiao Jian-bo, Zou Dengfeng, et al. Isolation, puri-
fication and identification of apigenin-7-O-D- glucuronide in
Marchantia convoluta with Silica Column Chromatography,
RP-HPLC and LC-ESI-MS[J]. Nature Product R & D, 2005,
17(1): 38-41.
[7]曹慧, 肖建波, 周春山, 等. 拳卷地钱中黄酮类化合物的
含量测定[J]. 中南药学, 2005, 3(1): 7-9.
[8]李维莉, 马银海, 彭永芳, 等. 蜂胶总黄酮提取方法研究
[J]. 食品科学, 2003, 24(1): 100-101.
[9]周德庆, 曾骆. 黄芩总黄酮的提取工艺研究[J]. 华西药学
杂志, 2003, 18(1): 78-79.
[10]罗伟强, 黄润均, 邓光辉, 等. 苦买菜茎黄酮类化合物提
取方法研究[J]. 广西民族学院学报, 2003, 9(1): 31-32.
[11]孙志萍. 大车前叶中总黄酮的微波提取及含量测定[J]. 现
代中药研究与实践, 2003, 17(1): 48-49.
[12]许勇, 范捷. 正交设计研究补骨脂中总黄酮提取工艺[J].
沈阳药科大学学报, 2003, 20(2): 144-146.
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