全 文 ：抗肿瘤和增强机体免疫等功效。 临床适用于多种外科手术后的
刀口疼痛 、出血 、外伤骨折 、筋骨扭伤 、风湿痹痛 、崩漏 、痛经 、牙龈
肿痛 、出血以及视网膜静脉阻塞等疾病。
表 9　对小鼠转棒运动的影响实验( x±s) s
组别 转棒时间
空白 104.60±9.36
高剂量 99.35±16.27
中剂量 97.63±15.86
低剂量 109.06±23.37
阳性 32.61±14.77＊
　　与空白对照组比较:＊P<0.001;n=12
本实验结果表明 ,独一味滴丸在 516mg(原料药)/kg体重给
药剂量内 , 对麻醉 Bealge犬心血管系统 、呼吸系统均无明显影
响;在 688 mg(原料药)/kg体重给药剂量范围内 , 对小鼠的中枢
神经系统没有明显的抑制作用 ,对小鼠的机能协调运动无明显影
响 , 说明此临床指导用量是安全可靠的 , 至于加大剂量是否影响
临床治疗效果还应做进一步的探索。
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收稿日期:2006-12-20;　修订日期:2007-02-15
作者简介:朴光春(1968-),男(朝鲜族), 吉林图们人, 现任吉林省延边大
学药学院副教授 ,硕士学位 ,主要从事中草药活性部位筛选及活性成分研
究工作.
万年蒿提取物对小鼠肝损伤的保护作用
朴光春 , 权迎春
(吉林省延边大学药学院 ,吉林 延吉　133000)
摘要:目的 探讨万年蒿超临界萃取物和水提液对小鼠肝脏损伤的保护作用 。方法 分别以万年蒿超临界萃取物和水提
液灌胃小鼠 , 并以 CCl4制成小鼠急性肝脏损伤模型 ,测定小鼠血清中门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶
(ALT)含量 ,观察万年蒿不同提取物对肝脏损伤的保护作用。 结果 和模型组相比 , 万年蒿水提液高剂量组和超临界萃
取物高剂量组能够明显降低小鼠的 AST, ALT含量(P<0.05或 P<0.001)。结论 万年蒿提取物具有较好的保肝作用。
关键词:万年蒿;　四氯化碳;　肝损伤;　超临界萃取
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1646-02
ProtectiveEfectsofExtractsofArtemisiasacrorum Ledeb.onAcuteHepaticInjury
inMice
PIAOGuang-chun, QUANYing-chun
(ColegeofPharmacy, YanbianUniversity, Yanji, Jilin133000, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsofsupercriticalfluidextraction(SFE)extractsandwaterextractsofArtemis-
iasacrorumLedeb.onacutehepaticinjuryinmice.MethodsThemicewereperfusedwithwaterextractsandSFEextractsre-
spectively.ThemousemodelofacutehepaticinjurywereinducedbyCCl4 andtheserumlevelsofALTandASTofthemiceweremeasured.ResultsThehigh-dosegroupsofwaterextractsandofSFEextractsgreatlydecreasedASTandALTlevelsinserum
comparedtomodelgroup(P<0.05 orP<0.001).ConclusionTheextractsofArtemisiasacrorumLedeb.haveprotectiveefects
againsthepaticinjury.
Keywords:ArtemisiasacrorumLedeb;　CCl4;　Hepaticinjury;　Supercriticalfluidextraction(SFE)
　　万年蒿为菊科植物万年蒿 ArtemisiasacrorumLedeb.干燥地
上部分 , 也可为全草。有利湿退黄 、凉血止血作用 [ 1 ～ 3] 。 民间常
用其治疗急慢性肝炎 、妇女内寒证等。东北某些地区在治疗黄疸
等肝炎症状时 , 更愿意选用万年蒿替代茵陈蒿作为首选药物。
本文通过测定小鼠血浆中门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙
氨酸氨基转移酶(ALT)等的含量 ,研究了万年蒿的超临界萃取等
四种提取物对 CCl4所致小鼠肝损伤的影响 , 为进一步研究万年
蒿的保肝作用打下了基础。
1　器材
1.1　药材与试剂 万年蒿采集自吉林省延吉市溪洞 , 由延边大
学药学院生药学教研室刘永镇教授鉴定为 Artemisiasacrorum
Ledeb.的地上部分;四氯化碳(天津开发区海晶精细化工厂);试
剂盒(ALT, AST)(北京北化康泰临床试剂有限公司);羧甲基纤
维素钠;吐温 -80等。
1.2　仪器 沈阳天诚超临界流体萃取仪(TC-SFE-50-5-5-
120S);紫外分光光度计 (上海棱光技术有限公司 , S22PC);
R2060旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司 , R2060);离心机(德
国制造 , 型号:IGMA95308);200μl移液器(pipetman, France),
1000μl移液器(XL3000i, Denvile)。
1.3　动物 昆明种小鼠 , 60只雄性 , 22 ～ 25 g, 由延边大学医学
院动物科提供。
2　方法
2.1　提取方法
2.1.1　万年蒿水提法 取 500 g万年蒿加入适量水中浸泡 , 1 h
后 , 加热至沸 , 提取两次 , 1 h/次 , 合并滤液 , 用旋转蒸发仪浓缩。
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.7　
参考万年蒿的成人剂量 ,通过体表面积转换 , 配制成灌胃小鼠的
低 、高两个浓度 ,分别为:6.5 g(相当于生药量)/kg, 26.0 g(相当
于生药量)/kg。
2.1.2　超临界萃取法 投药 800g万年蒿于超临界萃取仪里 ,分
别进行了两次萃取。第一次没有提携剂 ,第二次以无水乙醇为提
携剂。具体实验条件及结果如下。
表 1　万年蒿超临界萃取条件
实验次数 投药量m/g
萃取
温度 T/℃
萃取
压力 MPa
萃取
产量 m/g
萃取 38.5 萃取 19.1
第 1次 分一 44.1 分一 6.4 4.07
800 分二 35.0 分二 5.4
第 2次 (无水乙醇为提携剂)萃取 38.0 萃取 19.1
分一 44.1 分一 6.3 5.55
分二 31.5 分二 5.1
　　(分一为分离釜一 ,分二为分离釜二)
2.2　超临界萃取物的配制 取适量无水乙醇作为提携剂的超临
界萃取物 , 用少量吐温 -80和配制好的 0.05 g/ml羧甲基纤维素
钠溶液作为溶剂配制成低 、高两种浓度:0.45, 0.90 g/kg(这两个
浓度均以超临界萃取物的质量绝对值进行计算)。
2.3　动物实验
2.3.1　实验方法 从动物科取回小鼠后 , 放置于药学院动物室 ,
使其适应环境数日。 小鼠随机分成 6组 , 每组 10只:第 1组:正
常组;第 2组:急性肝损伤模型组;第 3组:万年蒿的水提液低剂
量组(6.5 g/kg);第 4组:万年蒿的水提液高剂量组(26.0 g/
kg);第 5组:万年蒿超临界萃取物低剂量组(0.45 g/kg);第 6
组:万年蒿超临界萃取物高剂量组(0.90 g/kg)。正常组和模型
组灌胃蒸馏水 , 其余各组分别灌胃上述剂量的相应药物 , 连续 4
d。第 5天上午灌胃一次 , 过 2 h正常组腹腔注射相应的生理盐
水 , 其它各组小鼠腹腔注射 0.1% CCl4豆油溶液 0.1 ml/10 g。24h后由小鼠颈动脉取血(取血前 12 h前开始禁食), 离心机 3000
r/min分离血清 , 根据试剂盒方法测定 AST, ALT[ 4 , 5] 。
2.3.2　统计处理 动物实验数据以 x+s表示 ,组间差异用 t检验
进行显著性分析。
3　结果
动物实验结果如表 2。
表 2　万年蒿对四氯化碳所致肝损伤小鼠的影响( x+s)
组别 剂量 C/g· kg-1 ALT/IU· L-1 AST/IU· L-1
正常　　 46.4±10.7 155.3±17.5
模型　　 65.7±10.0# 176.3±10.8#
超临界低 0.45 56.9±17.8 157.9±17.4
超临界高 0.90 55.6±9.7 152.4±9.3＊
水提低　 6.5 60.6±10.6 163.3±14.9
水提高　 26.0 31.0±13.5＊＊＊ 155.1±11.9＊
　　与正常组比较 , #P<0.05;与模型组比较 , ＊P<0.05;P<0.001, n=10
由表一可知 , 模型组的 ALT, AST数据与正常组相比 , P<
0.05, 说明用四氯化碳所致小鼠肝损伤造模是成功的。 4个万年
蒿组的 ALT, AST值均低于相应的模型组。其中超临界萃取物高
剂量组 、水提液高剂量组的 AST值与模型组相比 , 有统计学上的
显著性意义(P<0.05或 P<0.05);水提液高剂量组的 ALT值
与模型组相比 , 有显著性差异(P<0.001)。
4　讨论
万年蒿(ArtemisiasacrorumLedeb.)具有清热解毒 , 利湿 , 退
黄 , 凉血止血等作用 , 近年研究发现其有明显的的利胆作用 [ 6] 。
目前 , 在吉林省延边地区仍有万年蒿膏剂民间出售 , 用于治疗和
预防急慢性肝炎 , 妇女内寒证等 , 在民间有广泛的应用基础。但
是有关万年蒿的研究报道并不多 ,并且多局限于成分分析。为提
高疗效对其所做的药理实验更是少见。 因此有必要通过实验验
证其抗肝损伤活性 , 并以现代技术加以开发 , 分离精制其有效部
位 , 从而大大提高疗效。
在应用上 , 万年蒿多为水煎煮液 ,因此相比脂溶性成分 ,水溶
性成分更能体现中药应用中的宝贵经验。因此 ,本实验以两种浓
度的水提液进行了相关的抗肝损伤药理实验。
但是 ,水煎液在体现宝贵经验的同时 , 有一个弱点 ,即破坏热
敏性物质及脂溶性成分提取不完全。因此 ,本实验采用了超临界
流体萃取 ,以试图很好地解决这个问题。
处于高于其临界温度和临界压力的情况下的超临界流体 , 性
质介于气体和液体之间 ,其密度接近液体 , 而扩散系数则接近气
体 , 因而不仅具有与液体溶剂相当的萃取能力 , 而且具有优良的
传质效果。超临界流体萃取是以超临界流体为萃取剂 ,从中药材
中萃取药效成分并进行分离的方法。 CO2 临界条件适中(Pc=
7.39 MPa, Tc=31.06℃), 而且本身无毒无腐蚀性 , 故成为超临界
流体萃取法最常用的超临界流体 ,通常称为 CO2超临界流体萃
取法。
超临界流体萃取与传统方法相比 ,具有萃取时间短 、得率高 、
有效成分含量高 、质量稳定 、简便和安全等优点。更重要的是由
于萃取温度较低 ,中药中易挥发组分或生理活性物质极少受到损
失或破坏 , 超临界流体萃取非常适合于分离热敏性和化学性质不
稳定性的物质 , 因而在医药 、食品 、化工等领域受到广泛重视 。提
携剂能够增加溶质溶解度对温度 、压力的敏感程度 ,可使溶质的
选择性大大提高。因此添加适当极性提携剂的 CO
2
超临界流体
萃取法能够创造一般溶剂达不到的萃取条件 ,可以对极性物质进
行萃取 ,大幅度提高萃取收率 [ 7 ～ 11] 。本实验以无水乙醇做提携
剂进行了 CO2超临界流体萃取并用萃取物进行了抗肝损伤药理
实验。
实验结果初步证明民间使用水煎液的做法非常合理 ,水提液
低 、高剂量组的 ALT, AST值均低于肝损伤模型组。另外 ,水提液
高剂量组的 AST值与模型组相比 ,有统计学上的显著性意义(P
<0.05);水提液高剂量组的 ALT值与模型组相比 ,有显著性差
异(P<0.001)。 日后水煎液如以大孔吸附树脂等技术加以分
离 , 必能富集抗肝损伤有效成分群 , 从而大大提高抗肝损伤活性。
超临界萃取物高剂量组的 AST活性与肝损伤模型组相比 ,
有统计学上的显著性意义(P<0.05)。说明如果选择好剂量 , 有
可能会收到更好的效果。从而能够补充水提液损失掉的对抗损
伤有益的成分群 ,更好地发掘万年蒿的潜力。
万年蒿作为有悠久 、广泛应用基础的民间药物 , 发展潜力巨
大 , 发展前景看好。本实验初次使用超临界流体萃取法对万年蒿
进行了萃取并做了相关的抗肝损伤药理研究 ,力图以现代技术分
离其有效部位 , 提高疗效 , 为开发保肝保健品及抗肝炎新药提供
技术支持和理论基础。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期