全 文 ：基金项目:福建省教育厅资助项目(JB03229);泉州师范学院大学生科研基金项目(2003KJ22)
酸藤子总黄酮含量的测定及其有效成分薄层分析
蔡建秀,周海水,周天送 (泉州师范学院生物系,福建 泉州 362000)
摘要:提取酸藤子叶的黄酮类化合物,并测得其总黄酮含量为 1.66%;将提取的黄酮样液进行薄层层析及紫外光谱分析,黄酮类化合
物含有 6种成分,根据其紫外光谱特征推断这 6种化合物可能含有的基团为洋芹素 (Apingenin)、金圣草黄素 (Chrysoeriol)、山奈素
(Kaempferol)。
关键词:酸藤子;黄酮类化合物;薄层层析;总黄酮含量
AstudyonthedetermineofFlavnonecontentinEmbelialaetaMezvarlaeta
andanalysisefectivecomponentbythin-layerchromatography
CAIJian-xiu,ZHOUHai-shui,ZHOUTian-song(DepartmentofBiolgyQuanzhouNormalColege,Quanzhou362000,China)
Abstract:WithdrawsflabonoidfromtheEmbelialaetaMezvarlaetaleafanddeterminesthatitsflavanonecontentwhichis1.66%.Thereare
sixkindscoponentinEmbelialaetaMezvarlaetafavonoidwiththethin-layercharamatographicanalysisedandtheultra-violetespectrograph
characteristic,ItinfersthatthesixtpesofcompoundspossiblyincludesAapingenin,Chrasoeriol,andKaempferol.
Keywords:EmbelialaetaMezvarlaeta;flavanone;favonoidthin-layercharamatography;flavanoneconten
酸藤子,有称信筒子(福建)或酸果藤(中国高等植物图
鉴),攀缘灌木或藤本,稀为小灌木状,长1~3m,幼枝无毛,老枝具
皮孔。根叶可散瘀止痛,收敛止泻,治跌打肿痛、肠炎腹泻、咽喉
炎、胃酸少、痛经、闭经等症;也可作外科洗药,嫩尖及叶可生食,
味酸,果亦可食,有强壮补血之效;根叶可作兽药,治伤食胀气,
热通口渴[1]。
黄酮类化合物是一类在植物界广泛分布的酚性组分,目前
已知的黄酮类化合物单体己达 8000多种,黄酮类化合物可分
为黄酮、黄酮醇、异黄酮、二氢黄酮等,近年来研究发现黄酮类化
合物有抗突变、抗肿瘤、抗炎、抗菌、降血脂、镇痛、治疗心血管疾
病等广泛生物学活性,其中最为重要的是它能减少自由基形成
和清除自由基的抗氧化活性,对含脂食品的自动氧化的防止有
一定的实用价值,是一类值得深入研究的天然产物。然而并不是
所有的黄酮类化合物都具有抗氧化的功效,而与每种黄酮类化
合物的具体结构有关[2]。近几年在黄酮类化合物抗氧化作用与其
国 土 与 自 然 资 源 研 究
2006No.2 TERRITORY&NATURALRESOURCESSTUDY · 87·
文章编号:1003-7853(2006)02-0087-02 中图分类号:Q946.91 文献标识码:A
复原始景观为目的的生态工程,可有限度地进行观赏型旅游和
资源采集活动。隔离缓冲区以外人类活动对核心区天然性的干
扰,为绝对保护黄山松提供后备性、补充和替代性的栖居地。
实验区——保存与缓冲区和核心区的一致性,允许进行一
些科研和人类经济活动,一协调当地居民、保护区和研究人员的
关系,按照资源适度开发原则建立黄山松大经营区,使生态景观
与缓冲区和核心区保持一定程度的和谐一致,经营活动要与黄
山松资源承载力相适应。
4 黄山松自然保护区的管理措施
加强法制建设,制定相应法规,以法律的严肃性去维护自然
保护区,使自然保护区的执法人员做到有法可依,有章可循,规
范自然保护区周边社区居民的行为。
加强检疫检查,在黄山市 3区 4县原 21个木竹检查站增挂
森林植物检疫检查牌,并特批徽州区潜口、休宁县水桥关、黄山
区寨西、白亭、黄山风景区北大门5个专职森林植物检疫检查
站,以增强进入黄山风景区检疫检查力度。
加强宣传教育,提高公民的保护意识,一方面对游客进行直
接的宣传教育,另一方面进行范围更广泛的宣传教育,起到对全
民进行自然保护教育的作用;提高自然保护区的管理人员的业务
素质和管理水平,以胜任保护区的管理工作。
参考文献:
[1]周秉根,吴莉淳.黄山旅游开发条件评价[J].安徽师大学报(自然科
学版),1997,20(3):277-282.
[2]刘万青,周秉根,万荣荣.黄山旅游景观美学特征与欣赏[J].安徽师
范大学学报(自然科学版),2002,25(1):79-83.
[3]蒋明康,吴小敏.自然保护区生态旅游开发与管理对策研究[J].农村
生态环境,2000,16(3):1-4.
[4]王庆前.全力以赴预防松材线虫病传入黄山风景区[J].植物检疫,
2002,16(4):251~253.
作者简介]:柯来章(1970年 -),男,安徽歙县人,教师,硕士研究生,研究
方向为资源与环境。
(2005-06-20收稿 X编辑)
结构关系方面的研究,主要从黄酮类化合物中羟基的位置、数目
及其不同取代等方面对黄酮类化合物抗氧化作用的影响进行研
究的。本试验通过对酸藤子的总黄酮的的测定及薄层层析分析
其有效成分,可以为基础药物研究提供初级理论。
1 材料与方法
1.1 样品、试剂与仪器
样品采自清源山,自然晾干,于 60℃下烘干,粉碎后过 40目
筛备用。
试剂:硅胶G(青岛海洋化工厂,PC),聚酰胺粉(过 80目筛,
以70%乙醇预处理);AlCl3,5%NaN02,10%Al(N03)3,1molNaOH
溶液,光谱级甲醇,甲醇,无水乙醇,乙酸乙酯,氯仿,丁酮,吡啶,
甲酸,苯,醋酸,石油醚
仪器:721型分光光度计,索式提取装置,恒温水浴锅,砂芯
层析柱,小型粉碎机,玻璃板 (10cm×2lcm)、层析缸(20cm×
lOcm×15cm),紫外可见分光光度计(型号:UV-2401.PC)。
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DOI:10.16202/j.cnki.tnrs.2006.02.047
匀,转移至装有 3000mg聚酰胺粉砂芯层析柱中(已用 7Q%乙醇
预处理);吸附 10min.,以 70%,80%,90%,100%的乙醇各 lOml
依次洗涤,收集各级洗涤液,将收集到的各级洗涤液于 80℃水浴
中浓缩,回收乙醇,收集浓缩液 6.3ml.浓缩液用乙酸乙酯萃取,
得乙酸乙酯溶液3.4ml于试剂瓶中,供薄层层析用。
1.4.2 薄层层析[4]
获得一定量的化合物后用光谱级甲醇洗脱,过滤,收集滤液
于试剂瓶中,供紫外光谱分析用。
1.4.3 紫外光谱分析
将黄酮体的光谱级甲醇溶液,在紫外可见分光光度计下做
黄酮体紫外光谱分析(200nm~500nm),以光谱级甲醇作试剂空白
对照,获得甲醇UV光谱图。
2 结果与分析
2.1 酸藤子叶的总黄酮含量
由试验测得酸藤子叶的吸光度为(A)=0.308,计算出酸藤子
叶的总黄酮含量为1.62%。
2.2 A,B,C,D,E5种展开剂展开效果
用 5种展开剂 A,B,C,D,E对酸藤子黄酮液进行层析,分离
出6种化合物,以展开剂 E,即石油醚:乙酸乙酯:氯仿 =8:3:2展
开的效果最好,所以本实验以展开剂E作为最终展开剂。
表2 酸藤子黄酮类化合物在薄层板上分离出的化合物的Rf值化合物
化合物 1 2 3 4 5 6
X(cm) 8.5 9.7 11.2 13.4 14.6 15.7
L(cm) 18.5
Rf 0.459 0.524 0.605 0.724 0.789 0.849
显色 淡黄色 黄色 红棕色 浅黄色 黄绿色 棕黄色
注:X--分离出的黄酮类化合物移动的距离;L-展开剂移动的距离;
Rf=-X/L
根据以上计算所得的 Rf值将 6种化合物一一分离,用光
谱甲醇洗脱,收集起来备用。
2.3 紫外光谱特征
根据图谱(本文略),参照黄酮类化合物韵紫外光分析图谱,
其峰值显示线 1,2,3,4,5,6可能含有的基团为洋芹素(apin-
genin),(金圣草黄素(Chrysoeriol)、山奈素(kaempferol)。
3 讨论
酸藤子总黄酮成分比较复杂,其确切成分有待用其他手段
进一步分析;酸藤子资源很多,开发利用有一定的潜力。
参考文献:
[1]福建省科学技术委员会,福建植物志编写组.福建植物志,第4卷
[M].福州:福建科学技术出版社,1982.
[2]陈琪,王伯初,唐春红,等. 黄酮类化合物抗氧化性与其构效的关系
[J].重庆大学学报(自然科学版),2003,(26):11.
[3]蔡建秀,吴文珊,吴凌云,等.22种药用蕨类植物的总黄酮含量研究
[J].福建师范大学半报(自然科学版),2000,(16):12.
[4]张冬冬,王春艳,解春华.薄层层析法测定黄花菜中黄酮成分[J].
中国卫生检验杂志,2000,(12):9.
[5]黄量,于德泉.紫外光谱在有机化学中的应用阳[M].北京:科学出版
杜,1988.
作者简介:蔡建秀(1957~),女,福建莆田人,副教授,系主任,从事植物学
研究。
(2005-07-20收稿 X编辑)
1.2 标准液的制备及标准曲线的制作[3]
1.2.1标准液的制备
准确称取 120℃下干燥恒重的芦丁 5.0mg,用 60%微热乙醇
定容至50ml,摇匀,得浓度为0.1mg/ml的标准液。
1.2.2 标准曲线的制作
准确吸取标准液 0ml,1.0ml,2.0ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml于
6个具塞试管中,加 30%乙醇,使各试管溶液为 5ml,各加 5%
NaN02溶液 0.3ml,摇匀,放置 6min.加 10%AI(N03)3溶液 0.3m1,
摇匀,放置 6min.,加 1molNaOH溶液 4ml,蒸馏水 0.4ml,摇匀,放
置 10~15min.,用 85%的乙醇作空白对照,于 510nm波长下测定
吸光度,结果见表1.
表l 标准芦丁量与吸光度
试样 0 1 2 3 4 5
芦丁标准液/ml 0 1.000 2.000 3.000 4.000 5.000
标准芦丁量/mg 0 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500
吸光度A 0 0.116 0.220 0.335 0.440 0.556
绘制浓度 C=吸光度 A的标准曲线(本文略)。测得值最小
二乘法进行线性回归,分析得回归方程
A=1.1C+3.4×10-3; 其线性范围为 0~0.5mg相 关系数
r=0.9998。
1.3 酸藤子总黄酮含量的测定
1.3.1 样品处理
精确称取干燥恒重样品 1g于回流装置中,量取 70%乙醇
30ml于磨口烧瓶中,70~80℃水浴回流提取,从冷凝器中出现第
1滴回流液开始计时,提取 270h,去弃残渣,收集滤液,待滤液冷
却后用70%乙醇定容至30ml.
1.3.2 聚酰胺层析
准确吸取提取液 4ml,加 200mg聚酰胺粉于小烧杯中,摇匀,
转移到装有400mg聚酰胺粉的砂蕊层析柱中,吸附 10min.,用乙
醇梯度洗脱:70%乙醇(10m1) 80%乙醇(10m1) 90%乙
醇(10m1) 无水乙醇(10ml),收集各级洗涤液,用 85%乙醇定
容至40ml,备测。
1.3.3 样液测定
精确吸取 5.0ml样液 3份于 3支具塞试管中,各加 5%
NaN02溶液 0.3ml,摇匀,置 6min.,加 10%Al(N03)3溶液 0.3ml,
摇匀,放置 6min.,加 1molNaOH溶液 4ml,加蒸馏水 0.4ml,摇匀,
放置10~15min。以试剂作为空白对照,于5lOnm波长处测定吸光
度,查标准曲线,即得所取样液中黄酮含量mg数。
1.3.4 结果计算
样品中的黄酮量(以芦丁计)(%)=CV1V3/(10WV2V4)式中 C
为样液含黄酮量(mg),v1为抽提体积,V2为聚酰胺处理时取样体
积(ml),V3为聚酰胺处理后定容体积(m1),V4为显色反应测定取
用样液体积(m1),W为称样品(g)。
1.4 酸藤子黄酮类化合物成分分析
1.4.1 黄酮样液的提取
60ml 弃残渣
酸藤子叶细粉 70~80℃水浴回流 酰酰胺层析
70%乙醇 集滤液
将收集到的滤液冷却后于装有1500mg聚酰胺粉的小烧杯中,搅
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