全 文 ：中国药物与临床 2009年 10月第 9卷第 10期 Chinese Remedies & Clinics，October 2009,Vol.9,No.10
半边莲又名急解索、细米草、蛇舌草等，为桔梗
科植物半边莲的全草，其始载于《滇南本草》，后李时
珍在《本草纲目》中亦有记载，性辛、平，归心、小肠、
肺经，具有清热解毒、利尿消肿之功效，它是临床上
常见的抗癌中药，用于治疗肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌
等，并可外敷治疗癌症［1］。为进一步探讨半边莲抗肿
瘤的作用, 我们运用小鼠移植性肿瘤模型进行了实
验,检测了对 P27和 Survivin表达的影响，并探讨半
边莲的抗肿瘤机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药物与试剂：半边莲煎剂（半边莲煎煮浓缩而
成，浓度为 1 g/ml，由大连医科大学附属第二医院中
草药局提供）；5 -氟脲嘧啶 （5 -Fu，生产批号
0802162，由天津金耀氨基酸有限公司生产，每支
250 mg/10 ml）。兔抗鼠 P27 单克隆抗体、兔抗鼠
Survivin 单克隆抗体、SP免疫组织化学检测试剂盒
及浓缩型二氨基联苯胺（DAB）试剂盒皆购自北京中
杉金桥生物技术有限公司。
1.1.2 动物及癌株：昆明种小白鼠 24只，雌雄性各
半，6～8周龄，体质量 18~24 g，购买于大连医科大学
实验动物中心。瘤株为小鼠肝癌腹水瘤细胞系 H22，
购自本校病理教研室。
1.1.3 试验设备：Olympus—206024 型显微镜（日本
Olympus 公司）、滑台切片机（日本樱花牌）、干燥箱
（上海事实验仪器总厂 101—1型）、电热恒温水温箱
（北京市医疗设备厂 HWI型）、电热恒温干燥箱（上
海跃进医疗器械厂 202—2—S型）等。
1.2 方法
1.2.1 动物模型建立及分组：无菌条件下，取生长
半边莲煎剂对肝癌 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用
及对 P27和 Survivin表达的影响
刘晓宇 张 红
【摘 要】 目的 研究半边莲煎剂对肝癌 H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法 建立肝癌 H22荷瘤小鼠实
体瘤模型，将 24只小鼠分为 3组：生理盐水组、半边莲煎组和 5-氟脲嘧啶组各 8只。通过测定荷瘤小鼠的瘤质
量、抑瘤率观察半边莲煎剂对肿瘤生长的影响，采用免疫组织化学技术检测 P27和 Survivin的表达情况。结果
半边莲煎剂能使肝癌 H22荷瘤小鼠的瘤质量减少，抑瘤率为 33.98% ，显著低于对照组（P<0．05）；P27和 Survivin
在 3组中均呈阳性表达，单因素方差分析表明：半边莲煎剂组 P27表达增强，Survivin表达减弱，与对照组相比差
异均有统计学意义（P<0．05），半边莲煎剂组与 5-Fu组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 半边莲煎剂具有
明显的抗肿瘤作用，其作用机制可能与 P27和 Survivin的表达有关。
【关键词】 半边莲；基因产物；肝肿瘤
Chinese Lobelia Herb decoction exhibits anti-tumor actions and inhibits P27 and Survivin expressions in H22
hepatocellar carcinoma-bearing mice LIU Xiao-yu, ZHANG Hong. Department of Traditional Chinese Medicine,
Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Liaoning 116023, China
【Abstract】 Objective To study the anti-tumor effects of Chinese Lobelia Herb (CLH) decoction in H22 hepa-
tocelluar carcinoma-bearing mice. Methods H22 hepatocelluar carcinoma-bearing model was established in 24
mice which were then randomized to receive treatment with CLH decoction (CLH group) or 5-Fu (5-Fu group) com-
pared to an untreated group (control group). The tumor-weights and rates of tumor inhibition were compared among the
groups. P27 and Survivin in the tumor tissue were examined using immunohistochemical straining. Results CLH de-
coction was shown to reduce tumor weights in 39.48% of mice with significant difference compared to controls (P<
0.05). Both P27 and survivin were detectable in the three groups. ANOVA revealed stronger expression of P27 and
weaker expression of surviving in CLH group than in controls (P<0.05) but no statistical difference between CLH and
5-Fu groups (P>0.05). Conclusions The apparent anti-tumor actions of CLH may be related with its modulation on
expressions of P27 and Survivin.
【Key words】 Lobelia Chinese； Gene products； Liver neophasms
作者单位：116023 大连医科大学附属第二医院中医科
通信作者：张红，Email:zh19600901@163.com
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中国药物与临床 2009年 10月第 9卷第 10期 Chinese Remedies & Clinics，October 2009,Vol.9,No.10
7~9 d传代接种的 H22细胞株，将细胞 5×106个/ml，
每只 0.1 ml，接种于小鼠右腋下皮下造成实体瘤模
型，随机分为中药组、西药组和对照组。从荷瘤次日
起，中药组以半边莲 0.4 ml/只 （约含生药 0.4 g）灌
胃；西药组以 5-Fu按 20 mg·kg-1·d-1腹腔注射；对照
组以生理盐水 0.4 ml/只灌胃。均每日 1次，连续给药
14 d。
1.2.2 瘤质量、抑瘤率的测定 给药 14 d停药，次日
断颈处死小鼠，剥离瘤组织称重备用，计算抑瘤率，
抑瘤率 （%）=（对照组平均瘤质量-用药组平均瘤质
量）/对照组平均瘤质量×100%。
1.2.3 免疫组织化学法检测肿瘤组织 P27、Survivin
蛋白的表达：选择合适蜡块，切片，厚约 4~5 μm，烤
片 60 min，二甲苯脱蜡水化，酒精梯度水化，流水冲
洗 10 min，0.01 mol/L磷酸盐缓冲液 （PBS）冲洗 3
min×3，3%H2O2消化内源性过氧化物酶 10 min，PBS
洗 3 min×3，擦干，0.01 mol/L 柠檬盐缓冲液（CB）缓
冲液 pH 6.0微波修复 100 ℃，室温 10 min冷却,以
PBS冲洗 3 min×3，滴加山羊血清封闭液，室温 10
min后，倾去多余液体，勿洗，滴加 P27、Survivin的一
抗工作液，4 ℃过夜。取出切片，室温放置 20 min，
PBS冲洗 5 min×3，滴加生物素化山羊抗兔 IgG，37
℃ 20 min。0.01 mol/L PBS冲洗 3 min×3，滴加辣根
酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP）37 ℃ 20 min，
0.01 mol/L PBS冲洗 5 min×4，DAB显色，流水冲洗
10 min，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封片。
1.2.4 结果判断：400倍光镜视野下，选取每张切片
中 P27、Survivin着色最明显的视野，采集图像，并利
用 Image-proplus （美国 Media Cybernetics公司）图
像分析软件检测染色阳性物质的面积及积分吸光
度，求积分吸光度平均值，用平均吸光度值代表组织
中特定蛋白表达水平的高低，即表示 P27、Survivin
的含量。
1.3 统计学方法
利用 SPSS 17.0统计软件进行数据处理，t检验,
各数值以 x±s表示；采用单因素方差分析各变量间
关系，组间比较用 LSD法或 SNK法。P<0.05为差异
有统计学意义。
2 结 果
2.1 瘤质量、抑瘤率的测定：见表 1。半边莲煎剂组
与对照组瘤质量相比，差异有统计学意义（P<0.05）,
明显减小，表明半边莲有明显的抑瘤作用，其抑瘤率
为 33.98%。
2.2 P27、Survivin表达：见表 2。
P27、Survivin 在各组均成阳性表达，P27、Sur－
vivin阳性表达者呈均匀或粗细不等的棕黄色颗粒，
P27主要在细胞核内表达，Survivin主要在细胞质内
表达；单因素方差分析表明，中药组与对照组相比
P27、Survivin表达差异有统计学意义（P<0．05），半边
莲煎剂组使 P27表达增强，使 Survivin表达减弱，说
明半边莲可能有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作
用。而中药组与 5-Fu组之间比较 P27、Survivin表达
差异统计学意义（P＞0.05），表明两组在抑瘤作用上
差异无统计学意义。
3 讨 论
原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是严
重危害人类健康的疾病，当前具有抑瘤作用且不良
反应小的中药研究成为热点之一，在预防肝癌的发
生、抑制肝癌生长、防止复发和转移等方面都具有其
独特的优势［2］。原发性肝癌属祖国医学“ 瘕”、“积
聚”、“臌胀”、“黄疸”、“胁痛”、“胆胀”、“痞满”、“岩”、
“痞气”等范畴。中医学认为原发性肝癌是由于湿热
毒邪迁延留滞、饮食内伤、七情郁结等所致的肝脾失
和，气血痰毒郁结脉络，日久渐聚结成块停于胁腹而
成。现代研究表明半边莲主要化学成分含生物碱、黄
酮苷、皂苷和氨基酸等［3］。其中生物碱主要为山梗菜
碱、山梗菜酮碱、山梗菜醇碱和去甲山梗菜酮碱，具
有利尿消肿、清热解毒的功效［4］，可用于治疗水肿、
痈肿疔疮、蛇虫咬伤、晚期血吸虫病腹腔积液、癌症、
动脉粥样硬化等。目前半边莲对肿瘤细胞的生理学
效应研究主要是对 Hela细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、
胃癌细胞等有抑制作用。本实验从细胞增殖和细胞
凋亡两方面研究了半边莲的抑瘤作用机制，一方面
可使具有抑制细胞增殖作用的 P27表达增强，另一
方面可使具有阻断细胞凋亡作用的 Survivin表达减
表 1 半边莲的抑瘤作用(x±s)
组别 只数 瘤质量（g） 抑瘤率（%）
对照组 8 0.91±0.51 —
中药组 8 0.60±0.11a 33.98
西药组 8 0.45±0.11b 50.48
注：与对照组比较 aP<0.05，bP<0.01
表2 P27、Survivin 表达的比较(x±s)
组别 只数 P27 Survivin
对照组 8 206 678±35 573 307 454±19 699
中药组 8 355 193±88 106a 262 565±14 308a
西药组 8 367 490±87 896a 251 978±38 191a
注：与对照组比较aP<0.05
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弱。
P27是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（cy－
clin dependent kinases inhibitors，CDKIS）家族中的一
员，由 Polyak等［5，6］首先克隆出来的。该基因位于人
染色体 12p13 处 由至少 2 个外显子和 1 个约 600
bp的内含子组成；外显子 1长度为 474 bp，外显子 2
长度为 120 bp，两者共同组成 1个 594 bp的开放阅
读框架，编码 1条 198个氨基酸的多肽，是一个相对
分子质量为 27 000的热稳定蛋白质。它是一种抑制
基因，然而它不同与一般的抑制基因，其中主要抑制
作用于 G1期，通过直接与 CDK 或 cyclin/CDK 复合
物结合，抑制 cyclin/CDK复合物的活性，使细胞周期
停滞于 G1期，实现对细胞周期的负调控作用，抑制
细胞增殖 ［7，8］。Survivin 属凋亡抑制蛋白（inhibitor
apoptosis protein，IAP）家族中的最小成员，是 1997
年在人类基因组库的杂交筛选中分离并克隆出来
的，与效应蛋白酶受体 （EPR）-1 同位于染色体
17q25，全长 15 kb，含 4个外显子，3个内含子，编码
一个相对分子质量为 16 500、由 142个氨基酸组成
的蛋白质［9］。Survivin 既能抑制细胞凋亡，又能促进
细胞增殖［10］。Survivin可以直接作用于抑制半胱氨酸
蛋白酶 Caspase， 主要抑制 Caspase-3 和 Caspase-7
的活性， 阻断各种刺激诱导的细胞凋亡过程；Sur－
vivin 也可以与周期蛋白 CDK4 形成复合物， 释放
出 CDK4 复合物中的 P21，再进一步与线粒体 Cas－
pase-3 结合抑制其活性， 阻断细胞凋亡 ［11］。P27、
Survivin在细胞周期的调控上有着相关性。细胞周期
主要有两个调定点：G1/S期，G2/M期［12］。Survivin属
于正调控因子，能够对抗 G2/M期细胞凋亡的诱导作
用，促进通过细胞调定点，从而促进肿瘤的发生发
展；P27属于负调控因子，具有阻止细胞通过 G1/S期
转化“关卡”的作用，从而抑制细胞的增殖［13］。
近年来研究表明，肿瘤既是一种增殖失控的疾
病，也是一种细胞凋亡异常的疾病。细胞增殖与细胞
凋亡之间的动态平衡是维持机体稳态的重要方式，
两者的失衡将导致肿瘤的发生［14］。据高永琳等［15］报
道，半边莲对 Hela细胞增殖的直接抑制作用不明
显；但可通过促进细胞内储藏钙的释放和细胞外钙
离子的内流，显著提高细胞内游离钙的浓度，从而诱
导肝癌细胞的凋亡。但从细胞增殖角度进行的探讨
尚未见报道，究其具体机制还不明确，本实验只是初
步就细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白 P27的表达
进行检测，涉及细胞增殖和细胞凋亡两方面的其他
多种基因的表达情况，还有待进一步研究。
参 考 文 献
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Cdk protein kinase activity，is related to p21. Cell，1994，78(1):
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9 Ambrosini G，Adida C，Altieri DC. Anove l anti-apoptgene，sur－
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10 陈明，伊新，林木生，等. Survivin 在肝癌中的表达及与 P53 表
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11 Suzuki A，Ito T，Kawano H，et al. Survivin initiates pro-caspase
3/p21 complex formation as a result of interaction with Cdk4 to
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（收稿日期：2009-05-04）
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