全 文 ：华西药学杂志W CJ· PS　2009, 24(3)：300 ～ 301 　　
作者简介:左爱仁(1976-),男 ,硕士 ,讲师 ,从事中药药理学的教学与科研工作。 Email:zuoairen@sina.com
HPLC测定东方肉穗草中的槲皮素
左爱仁 ,万春鹏 ,周寿然
(江西中医学院基础医学院 , 江西 南昌 330006)
摘要:目的　建立测定东方肉穗草中槲皮素含量的方法。方法　采用 RP-HPLC法 , 色谱柱为 ShimadzuShimpackVPC18柱
(150 mm×46 mm, 5 μm),流动相为甲醇 -0.1%磷酸(45：55),流速为 1.0 ml·min-1 ,检测波长为 365 nm, 柱温为 40℃。结
果　槲皮素 0.025 ～ 0.400 mg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系 ,回归方程为:Y=7.74×107X-2.69 ×105(r=0.9998), 平均
回收率为 99.8%, RSD=0.83%(n=5)。结论　所建方法快速 、简便 , 重复性和稳定性均好 , 能准确地测定东方肉穗草中槲皮
素的含量。
关键词:东方肉穗草;槲皮素;高效液相色谱
中图分类号:R917　 文献标识码:A　 　文章编号:1006-0103(2009)03-0300-02
DeterminationofquercetininSarcopyramisbodinierivar.delicatabyHPLC
ZUOAi-ren, WANChun-peng, ZHOUShou-ran
(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine, Nanchang, Jiangxi, 330006 P.R.China)
Abstract:OBJECTIVE　ToestablishamethodfordeterminingthecontentofquercetininSarcopyramisbodinierivar.delicataby
HPLC.METHODS　TheShimadzuShimpackVPC18(150 mm×46 mm, 5 μm)columnwithmethanol-water-phosphoricacid
(45：55)asthemobilephasewasused.Theflowratewas1.0 ml·min-1 andthedetectivewavelengthwassetat365nm.Thecolumn
temperaturewassetat40℃.RESULTS　Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.025-0.40 mg·ml-1 , Y=7.74×107X-
2.69×105(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.8% withtheRSDof0.83%.CONCLUSION　Themethodissimple, accu-
rate, reproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofSarcopyramisbodinierivar.delicata.
Keywords:Sarcopyramisbodinierivar.delicata;Quercetin;HPLC
CLCnumber:R917　　　 Documentcode:A　 　ArticleID:1006-0103(2009)03-0300-02
　　东方肉穗草 Sarcopyramisbodinierivar.delicata
属野牡丹科的功效肉穗草属植物 ,可全草入药 ,具有
清热解毒 、清肝泻火的功效 ,是治疗急性肝炎 、肺热
咳嗽 、蛇头疔 、无名肿毒 、胃肠炎等疾病的珍稀名贵
中药[ 1] 。因此 ,作者首次从东方肉穗草中分离鉴定
了 20多个黄酮类化学成分(结果另文发表),槲皮
素 、异鼠李素是其主要苷元成分。槲皮素具有抗氧
化 、抗肿瘤 、保护心肌受损和肝细胞损伤等药理作
用 [ 2 ～ 4] 。现参考文献 [ 5 ～ 7]的色谱条件 ,建立了测定
东方肉穗草提取物中槲皮素含量的 HPLC法。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
高效液相色谱仪系统 (日本岛津)。槲皮素对
照品(自制)经 MS、UV、1HNMR和 13 CNMR鉴定结
构 , HPLC测定纯度为 98%;所用试剂为分析纯;其
余为色谱纯;水为超纯水;D101大孔树脂(沧州宝恩
化工有限公司);东方肉穗草(福建永春林业局)经
高级工程师邹秀红鉴定为原植物。
1.2　方法与结果
1.2.1　对照品的制备　用 70%乙醇萃取东方肉穗
草 ,其提取物再依次用石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、正丁
醇分别萃取 3次 ,回收溶剂后得石油醚 、氯仿 、乙酸
乙酯 、正丁醇 、水部分。将乙酸乙酯部分用蒸馏水溶
解 ,过滤 ,滤液经 D101大孔树脂柱层析 ,以不同含
量的乙醇进行梯度洗脱 。取 70%乙醇洗脱部分 ,用
SephadexLH-20柱进一步分离纯化 ,甲醇洗脱 ,得
槲皮素对照品 。经 MS、UV、1HNMR和 13CNMR鉴定
结构 , HPLC测定纯度为 98%。
1.2.2　色谱条件 　色谱柱为 ShimadzuShimpack
VPC18柱(150mm×46mm, 5μm),流动相为甲醇 -
0.1%磷酸(45：55),流速为 1 ml·min-1 ,检测波长
为 365 nm,柱温为 40℃,进样量 20 μl,理论板数按
槲皮素峰计应不低于 2.8×103。对照品和样品的
HPLC图见图 1。
1.2.3　溶液的制备　精密称取 10 mg经冷冻干燥
的槲皮素对照品 ,置 25 ml量瓶中 ,加甲醇定容 ,得
0.4 mg·ml-1对照品贮备液 。精密吸取 5 ml此液置
10 ml量瓶中 ,加甲醇定容 ,得 0.20mg·ml-1的对照
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2009.03.021
图 1　对照品(A)和供试品(B)溶液的 HPLC图谱
Fig1　HPLCchromatogramsofcontrolsolution(A)andsample
solution(B)
品溶液 。同样的方法再分别制备 0.100、 0.050、
0.025 mg·ml-1的槲皮素对照品溶液 。精密称取 1 g
东方肉穗草粉末 ,精密加入 100 ml60%甲醇中 ,水
浴回流提取 60 min,放冷 ,过滤 ,滤渣再重复提取 1
次 ,合并滤液 ,减压浓缩成浸膏。浸膏中精密加入
10 ml甲醇 -10%盐酸(4：1)的混合液 ,称定重量 ,
水浴回流 60 min,放冷 ,用 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,
取滤液 ,用甲醇定容为 10ml,即得供试品溶液。
1.2.4　线性关系的考察 　分别精密吸取 20 μl
“ 1.2.3”项各浓度的对照品溶液进样 ,以浓度为横
坐标 、峰面积为纵坐标进行线性回归 ,回归方程为:
Y=7.74×107X-2.69 ×105(r=0.9998),槲皮素
0.025 ～ 0.400 mg·ml-1与峰面积的线性关系良好。
1.2.5　精密度试验　按 “ 1.2.2”项的条件 ,精密吸
取 20μl对照品溶液 ,重复进样 5次 ,测其峰面积 ,
RSD=1.21%(n=5),表明精密度良好 。
1.2.6　稳定性试验　分别精密吸取 20 μl对照品
溶液和供试品溶液 ,按 “1.2.2”项的色谱条件 ,分别
在 0、6、12、24、48 h时测定 ,记录色谱图和峰面积 ,
对照品和供试品峰面积的 RSD分别为 0.81%、
1.36%,对照品和供试品溶液在 48 h内均稳定 。
1.2.7　重复性试验　取样品粉末 5份 ,每份 1 g,按
“ 1.2.9”项的方法测定含量 , RSD=1.48%(n=5),
表明方法的重复性良好。
1.2.8　回收率试验 　分别称取 1 g平均含量为
0.137%的东方肉穗草粉末样品共 5份 ,再分别加
入 10ml0.2 mg·ml-1的槲皮素对照品溶液 , 按
“ 1.2.3”项方法制备供试品溶液 ,并按 “1.2.2”项的
条件测定。实验数据表明 ,添加槲皮素对照品后各
组样品的槲皮素含量为 0.335 ～ 0.339 mg·ml-1。
根据回收率计算公式[ 8] , 计算出平均回收率为
99.68%, RSD=0.3282%(n=5),结果见表 1。
1.2.9　样品的测定　按 “1.2.3”“1.2.2”项下方法
操作 ,分别取 20 μl对照品 、供试品溶液 ,进样 。以
峰面积按外标法计算 , 供试品溶液的平均含量为
0.137 mg·ml-1 ,并推算东方肉穗草粉末样品中槲皮
表 1　加样回收率结果(mg)
Table1　Resultsofrecoverytest(mg)
No.Samplecontent/mg Added
Measure
content/mg
Recovery
rate/% X/% RSD/%
1 1.382 3.376 99.7 99.7 99.7 0.33
2 1.364 2.000 3.350 99.3
3 1.389 2.000 3.381 99.6
4 1.386 2.000 3.390 100.2
5 1.377 2.000 3.369 99.6
素的平均含量为 0.137%, RSD=1.07%(n=5)。
2　讨论
实验曾考察了 RestekPinnacleDBC18(250mm×
4.6 mm, 5 μm)和 ShimadzuShimpackVPC18 (150
mm×46mm, 5 μm)两种品牌 、两个规格的色谱柱 ,
结果表明 ,后者分离效果较好。流动相考察了乙
腈 -水 、乙腈 -0.1%磷酸(30：70)和甲醇 -水 、甲
醇 -0.1%磷酸 (45：55), 从经济角度考虑 , 以甲
醇 -0.1%磷酸(45：55)为流动相最佳。
东方肉穗草中含有多种以槲皮素 、异鼠李素为
苷元的葡萄糖苷成分 ,因此 ,采用酸水解的方法测定
槲皮素的含量 。参考文献 [ 5] , 以甲醇 -5%盐酸
(4：1)的混合液水浴 15 min水解 ,其 HPLC图表明
水解不完全 ,故采用甲醇 -10%盐酸(4：1)混合液水
浴 1h的水解完全 ,从而确定了供试品溶液的制备方
法。文中首次以槲皮素为质控成分 ,采用 HPLC测定
东方肉穗草中槲皮素的含量 ,方法简便 、准确 ,重复性
好 , 可作为东方肉穗草的质量控制方法。
参考文献:
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收稿日期:2008-07
301第 3期 左爱仁 ,等。 HPLC测定东方肉穗草中的槲皮素