全 文 ：野生毛葡萄芽器官离体培养的研究*
收稿日期: 1998- 02- 09
* 广西科委小基金项目 ,桂科金 9722012
王以红 吴幼媚 蔡 玲 莫泽莲
(广西林业科学研究院 南宁 530001)
摘要 野生毛葡萄芽器官离体培养试验结果 ,外植体—— 茎段芽在含有植物生长调节剂
BA2mg～ 4mg /L、 IAA 1. 0mg / L的 MS培养基上 ,被直接诱导出不定芽 ,芽继代培养分化率高 ,但
芽茎粗且短 ,呈密集型 , BA和 IAA减半的 Ms培养基 ,促进形成正常健壮芽。在含有 IBA0. 5mg /L
的 M S培养基上 ,无根苗生长 10天后开始长出根点 , 15天根系长至 0. 5～ 1cm。 移栽于经 0. 1%高
锰酸钾溶液消毒的基质里 ,成活率 90% ,生长健壮 ,培育成完整的小植株。
关键词 毛葡萄 茎段芽 离体培养
毛葡萄 ( Vi tis quinquangularis Rehd)主
要呈野生分布于海拨 300m以上的溶岩石山
地区 ,其果实为有“人头马”之美称的广西特
产—— “山葡萄”酒的主要原料。都安产的山
葡萄酒不仅国内市场畅销 ,还有广泛的国际
市场 ,但生产上严重缺少毛葡萄的优良种苗 ,
尤其是常规的无性繁殖苗 ,如扦插、嫁接等因
受穗条、季节、环境多种因素的限制 ,难于满
足大生产的需要 ,实生苗因雌雄异株 ,只有
50%的植株结果。为此 ,我们对野生毛葡萄芽
器官的离体培养进行了试验研究 ,成功地培
养出了健壮的小植株。
1 材料和方法
1. 1 试验用的外植体采用呈半木质化的一
年生毛葡萄扦插苗枝条 ,除去叶片 ,剪切成带
节的小段。
1. 2 自来水下冲洗干净后 ,用 70%乙醇浸
渍 10s,立即用蒸馏水漂洗二遍 ,在超净工作
台上把茎段置于 0. 1% HgCl2溶液中灭菌 8
～ 10min后 ,再用无菌水反复漂洗 4～ 5遍 ,
剪切成长约 1cm带一个节的小段 ,斜插于培
养基面上。
1. 3 以 MS为基本培养基 ,附加不同种类、
不同浓度的植物生长调节剂 ,糖浓度为 2%
～ 3% ,琼脂粉 0. 45% , pH值 5. 8～ 6. 5,于压
力 11N /cm2 ,温度 121℃下灭菌 15min,采用
自然光照培养。
2 试验与结果
2. 1 植物生长调节剂对不定芽诱导的影响
外植体茎段被接种于附加不同组合的
6—苄基氨基嘌呤 ( BA)、玉米素 ( ZT)、吲哚
乙酸 ( IAA)、萘乙酸 ( N AA)的培养基上 ,其
诱导结果见表 1。
接种在 1号培养基上的外植体于 8～ 10
天后 ,外植体切口处开始出现淡绿色愈伤组
织 ,随着培养时间的延续 ,愈伤组织迅速增
多 ,由淡绿色转变为白色 ,并且疏松 ,后被淘
汰。 在 3号、 4号培养基上培养的外植体 ,一
第 27卷 第 1期 广 西 林 业 科 学 Vo l. 27 No. 1
1998年 3月 Guangxi For estry Science Mar. 1998
周后观察到节间膨胀 ,有芽点突起 ,二周后绿
芽明显伸长 ,有些分化出 2～ 3个芽 ,并长出
小叶片。试验结果表明:在含高浓度细胞分裂
素如 BA的培养基上 ,外植体切口处易长出
愈伤组织 ,并且生长快 ,迅速复盖整个外植
体 ,呈白色疏松型 ;细胞分裂素 ZT对不定芽
诱导并非起重要作用 ,因为附加与不附加 ZT
的培养对不定芽诱导的差异并不明显 ;只有
附加低浓度的细胞分裂 BA素 ( 2mg /L)的培
养基有利于不定芽的诱导。
表 1 植物生长调节剂对外植体不定芽诱导的影响
序号 植物生长调节剂组合 ( mg /L)
外植体数
(个 )
形成不定芽数
(个 )
形成愈伤组织数
(个 )
被褐化数
(个 )
1 MS+ BA4+ ZT1+ NAA1 10 8 2
2 M S+ BA4+ NAA1 10 1 4 5
3 M S+ BA2+ ZT1+ IAA1 10 3 3 4
4 M S+ BA2+ IAA1 10 3 2 5
2. 2 植物生长调节剂对毛葡萄继代培养的
影响
将丛生芽分切成小段或小丛接种于附加
相同的植物生长调节剂但浓度不同的培养基
上继代培养 ,结果见表 2。
表 2 植物生长调节剂对毛葡萄继代培养的影响
序
号 培养基
每瓶接
种芽数
25天后继代
培养观察
4 M S+ BA2+ IAA1 6
芽呈密集型、茎短、粗、愈伤组织多。
5 M S+ BA1. 5+ I AA1 6
芽分化多、茎较短、粗、叶片小。
6 M S+ BA1+ IAA0. 5 6
芽分化较多、茎伸长、叶片展开、绿色。
7 M S+ BA0. 5+ IAA0. 5 6
芽分化较少、茎节长、苗较细弱。
芽段继续在用于诱导不定芽的培养基上
培养 ,芽分化多且密集 ,芽茎粗 ,节间短 ,叶片
小 ,呈淡绿色 ,并伴有较多的愈伤组织产生。
随着降低 BA和 IAA的浓度 ,丛生芽生长健
壮。如在 6号培养基上培养的芽丛 ,茎节伸
长 ,叶片展开 ,呈浓绿色。 25～ 30天为一个继
代周期 ,增殖倍数可达到 2～ 3倍。当在细胞
分裂素和 生长素的浓度继续减低 , 如
BA0. 5mg /L、 IAA0. 5mg /L甚至更低的培养
基上培养 ,丛生芽分化较少 ,生长表现较纤
弱。
2. 3 植物生长调节剂对诱导生根的影响
当芽丛继代培养长至 2cm左右时 ,可以
转入生根培养基中进行生根诱导。在茎节下
2mm处切下 ,剪除基部叶片 ,直插入生根培
养基。 以 MS为基本培养基 ,加入不同种类、
不同浓度的植物生长调节剂诱导生根 ,结果
见表 3。
表 3 不同的植物生长调节剂对毛葡萄生根的影响
序号 培养基 ( mg /L) 接种株数 (株 ) 生根株数 (株 ) 生根率 (% ) 备注
8 M S+ IBA1 60 60 100 根粗壮 ,愈伤组织多。
9 1 /2M S+ IBA1 60 58 97 根粗壮 ,愈伤组织多 ,植株较弱。
10 MS+ IBA0. 5 60 60 100 根系多 ,均匀 ,愈伤组织少。
11 M S+ ABT2 60 55 92 根粗壮 ,愈伤组织多。
12 M S+ ABT1 60 60 100 根粗壮 ,愈伤组织多。
试验结果表明: 毛葡萄的生根诱导并不
困难 , 10天后基部膨大 , 15天根系长至
0. 5cm,在 5种不同组合的培养基上 ,生根率
均能达到 90%以上 ,但植株的生根表现却有
差异。在 8号、 11号、 12号培养基上的植株根
系生长较粗 ,并且愈伤组织 (下接第 15页 )
10 广 西 林 业 科 学 第 27卷
3 结论与讨论
3. 1 区域试验结果表明 ,杉木二代园家系子
代的遗传基础是不同的 ,树高、胸径均表现出
极显著的差异。家系与地点交互作用明显或
接近明显。 家系子代生长量稳定性有好、有
差 ,这都为二代园材料选择及评价提供了科
学依据。
3. 2 福建来的二代园家系子代生长量总体
来说不算很高 ,与广西高水平的对照比较 ,多
数家系子代生长量比对照小 ,因此 ,广西建立
第二代杉木种子园应以本区域优良材料为
主 ,谨慎使用外省的二代园材料。
3. 3 初步筛选出来的 4个优良家系 ,可适当
扩大推广使用。 对二代园家系子代的进一步
评价与利用 ,有待作更深入的研究。
参考文献
1 陈代喜等 . 不同产地杉木优良家系试验初报 .
林业科技通讯 , 1990( 6) .
2 张文峤 ,陈代喜等 . 杉木无性系区域化试验的初
步研究 . 广西林业科学 , 1996( 4)
3 陈代喜 ,张文峤等 . 杉木优良家系区域化试验研
究 . 广西林业科学 , 1997( 1)
(上接第 10页 )
多 , 9号培养基上的植株上部分生长较纤弱 ,
只有 10号生根培养基上的植株生长健壮 ,根
系均匀 ,愈伤组织少。
2. 4 试管苗的移栽及护理
当试管苗的根系长至 1cm左右时 ,搬离
培养室置于育苗大棚内 ,在自然环境中练苗
5天 ,方可移栽。营养基质采用表土 50cm以
下的红壤 ,除去树根等杂物 ,经粉碎后装杯 ,
用 0. 1%高锰酸钾溶液喷淋消毒 12h后 ,用
自来水喷淋以清洗残药。将试管苗倒出 ,在自
来水中漂洗清除琼脂培养基 ,浆根 ,移栽于营
养杯中 ,淋水 ,并加盖 70%黑色遮光网。一星
期后 ,可揭开遮光网 ,湿度保持在 70% ～
80%左右 ,移栽成活率可达到 90%以上。
3 讨论
以野生毛葡萄茎段芽为外植体 ,培养出
完整的试管小植株 ,为国内初次报道。本研究
的试验程序和结果 ,属无性系繁殖范畴 ,这对
解决当前生产上急需大批量毛葡萄优株无性
系种苗 ,是一条有效途径。
研究是以一年生扦插苗萌芽条为试验材
料 ,而成年树枝条茎段芽的诱导仍处于研究
之中 ,但试验结果为后者的研究提供了一定
的科学基础。
研究尚处于初试阶段 ,对如何进一步提
高芽的成苗率 ,瓶苗在继代培养过程中的变
化、组培苗经种植所表现的经济性状等 ,有待
于继续深入试验研究。
参考文献
1 谭文澄 ,戴策刚 .《观赏植物组织培养技术》 . 中
国林业出版社 , 1991. 60～ 69
2 Murashig e F. , F. Skoog . A rev ised medium fo r
rapid gr ow th and bioa ssay s with tobacco tissue
cultur e. Phy siol Plant, 1962, 15: 473～ 497
覃尚民、曹季丹高工提供试验材料 ,特此致谢。
15第 1期 陈代喜等:杉木二代园子代区域试验初报