全 文 ：野生毛葡萄茎段离体培养和生产应用研究
邹瑜　莫磊兴　林贵美　李小泉　彭宏祥＊　牟海飞
(广西农科院植物组培苗有限公司　南宁　530007)
摘　要　用不同植物生长调节剂对都安野生毛葡萄茎段腋芽进行离体培养 ,结果 BA 1.0 ～ 2.0mg
L 与KT 1.0mg L配比诱导出不定芽的效果理想;BA 1.0～ 2.0mg L与 IAA 0.02mg L配比 , IBA 0.4 ～
1.0mg L与 BA 0.1～ 0.2mg L配比对继代和生根培养的效果最佳。采用河沙和塘泥假植毛葡萄组
培苗成活率高。
关键词　毛葡萄　离体茎段培养　植物生长调节剂
文献分类号　S663.103.5
　　广西野生葡萄资源十分丰富 ,有毛葡萄
(Vitis quinguangularis Rehd)、瘤枝刺葡萄 、复
叶葡萄等 12种[ 3] ,主要分布于桂中 、桂北 、桂
西的岩溶石山地区。都安县利用当地野生毛
葡萄为原料酿造的野生山葡萄酒 ,畅销国内
外市场 ,有广阔的发展前景 。由于受原料产
量的制约 ,葡萄酒产量远远满足不了市场需
求 ,迫切需要建立优良毛葡萄原料生产基地。
而种苗来源成为当前的主要问题。如采用种
子育苗 ,只有 50%是结果雌株 , 且不能确定
种苗的优劣。采用扦插法繁育种苗 ,受插条
数量 、成活率 、季节等因素影响 ,也存在一定
困难[ 1 , 2] 。我们进行毛葡萄优良单株茎段组
织培养研究 ,成功地繁殖出完整小植株 ,并已
批量生产营养杯苗供应都安山区农民种植。
1　材料和方法
1.1　材料及处理
采用都安野生毛葡萄 2号和 5号优良株
系的一年生枝条进行沙床扦插。2 个月后 ,
插条萌发 ,长出约 10cm 长的嫩芽。剪下嫩
芽 ,在自来水下冲洗干净 ,剪掉大叶片 ,截成
　　＊该作者单位为广西农科院园艺研究所
3 ～ 4cm的大茎段 ,在无菌水中漂洗几分钟后
放入 3%的次氯酸钠溶液中消毒 30分钟 ,取
出后在无菌水漂洗 3 ～ 4次 ,剪成约 1cm 长的
带腋芽茎段外植体接种于经消毒的培养基。
1.2　培养基
基本培养基为 MS培养基 ,略作修改 ,即
维生素 B1量加倍 ,生根培养时用 1 2MS 。白
糖浓度为 3%,琼脂 0.4%～ 0.45%。pH 值
5.8 ～ 6.0。压力 1.1kg cm2 、温度 121℃下灭
菌 20 ～ 25分钟。
植物生长调节剂浓度及培养条件:启动
培养:BA 0.5 ～ 2.0mg L ,KT 0 ～ 1.0mg L ,NAA
0.01 ～ 0.05mg L。在光照培养箱中培养 ,温
度 24±1℃,光照 2000 ～ 3000lux ,每天光照 12
小时 。
继代培养:BA 0.5 ～ 3.0mg L ,ZT 0.01 ～
2.0mg L , IAA 0.01 ～ 0.5mg L ,NAA 0.05 ～ 0.
1mg L。培养温度 25℃±2℃, 光照 2000 ～
4000Lx ,每天光照 12小时。
生根培养:IBA 0.1 ～ 1.0mg L , IAA 0.1 ～
0.5mg L ,BA 0 ～ 0.2mg L ,ZT 0.01 ～ 0.2mg L。
室温培养 ,自然散射光。
1.3　组培生根苗假植
用干净河沙和塘泥作介质 。假植瓶苗标
·196· 广西农业科学　1998年第 4 期
准:根 2 ～ 3 条 ,高 2.5cm 以上 ,具叶 3 片以
上。瓶苗经炼苗后 ,取出瓶外在 0.1%的高
锰酸钾溶液中消毒数秒后假植 。假植苗在塑
料棚中培育 ,盖塑料薄膜保湿或定期喷雾保
湿 ,棚上覆盖 50%～ 70%遮光网 ,以防日灼。
10天成活后 ,适当降湿和增加光照。
2　结果与分析
2.1　离体茎段不定芽启动诱导结果
茎段外植体 ,接种到附加不同种类 、浓度
的植物生长调节剂的培养基 ,结果如表 1。
表 1　植物生长调节剂对离体茎段不定芽启动诱导的影响
培养基
(单位:mg L)
外植体接
种数(个)
启动的外植
体数(个)
启动率
(%)
愈伤组织发生
数及大小＊
污染或褐
化个数
1号　BA 2.0+KT 1.0 8 5 100 3
2号　BA 1.0+KT 1.0 8 3 100 5
3号　BA 2.0+NAA 0.05 8 0 0 4(+++) 4
4号　BA 0.5+NAA 0.01 8 0 0 5(++) 3
　　＊愈伤组织大小表示方法:“ +”表示小于 1cm;“ ++”大于 1cm 、小于 2cm;“+++”表示大于 2cm。后表与此相同。
　　接种到第 1 、2号培养基上的外植体 ,诱
导率达 100%, 10 ～ 15 天 , 茎段腋芽开始膨
大 ,20天后形成肉眼可见的芽点 ,25 ～ 30天
开始长出明显的单芽 ,个别长成2个单芽 。
接种在第 3 、4 号培养基上的外植体 , 5
天后 ,茎段两头切口开始变形肿大 , 10天后
逐渐脱分化并形成愈伤组织 , 20天后愈伤组
织长大且非常明显 ,特别是在含 BA 2.0的 3
号培养基上 ,随着时间延续 ,愈伤组织愈长愈
大。愈伤组织特征是白色 ,呈粉状 , 质地疏
松。但转接到 1 、2号培养基上进行不定芽诱
导 ,未获成功。
上述结果表明 ,BA 1.0 ～ 2.0+KT 1.0是
毛葡萄茎段离体培养时 ,不定芽启动诱导的
理想配比 ,启动诱导率达 100%。用 BA 与
NAA的配比 ,对不定芽启动诱导作用无效 ,
极易形成愈伤组织。
2.2　继代培养结果
把毛葡萄茎段启动诱导长成的低代嫩
芽 ,剪切成带 2 ～ 3个小叶片的小芽段或切成
带2个小芽的芽丛 ,分别接种到表2的6 ～ 12
号继代培养基中 ,培养 20 ～ 25天后进行定性
和定量测定。
在 IAA 0.01 ～ 0.02mg L水平下 ,BA浓度
由 0.5mg L 上升到 3.0mg L 时 ,繁殖系数呈
上升趋势 ,并极易诱导愈伤组织和玻璃化的
发生 ,丛芽趋于矮小密集 。当 IAA浓度提高
到0.1 ～ 0.5mg L 时(第 10 、11号培养基),分
化丛芽趋势减弱 ,愈伤组织和玻璃化现象发
生不明显 ,小芽趋于上长 ,高度可达 2cm 。第
6 、7 、8号培养基 , BA 浓度为 1.0 ～ 1.5mg L ,
继代繁殖系数超过 3 ,小芽生长较健壮 ,节间
短 ,长势较理想 ,继代周期 20 ～ 25天 ,是毛葡
萄继代培养的适宜浓度。
这些结果表明 ,高浓度的 BA 极易诱发
愈伤组织和玻璃化(在继代中使用ZT的结果
类似),对组织培养极为不利。
2.3　生根培养结果
试验结果如表 3。所有植物生长调节剂
的配比诱导发根率均超过 90%。一般是培
养 10 ～ 15天根系开始萌动生长 ,20天后长度
可达 1cm 以上 , 小芽也同时长高和长叶片 。
第 16 、17号培养基 ,使用NAA ,极易诱导愈伤
组织发生 ,根数发生多 ,每株可达 5 ～ 6条 ,但
·197·邹瑜等:野生毛葡萄茎段离体培养和生产应用研究
表 2　BA 和 IAA 不同配比对毛葡萄继代培养的影响
培养基 繁　殖系　数
愈伤组织
发生程度
玻璃化
发生程度＊ 长势和长相
5号　BA 0.5+IAA 0.01 2.4 + 芽细弱 、少
6号　BA 1.0+IAA 0.01 3.2 + + 丛芽密集 、较壮 ,芽高可达 1～ 2cm
7号　BA 1.5+IAA 0.02 3.8 ++ + 同上
8号　BA 2.0+IAA 0.02 3.6 ++ ++ 同上
9号　BA 3.0+IAA 0.01 3.6 +++ +++ 丛芽较矮小 ,不易分离
10号　BA 1.0+IAA 0.1 2.3 + + 芽粗壮 、少
11号　BA 1.5+IAA 0.5 2.4 + 同上
　　＊玻璃化发生程度表示方法:“ +”表示玻璃化率小于 10%;“++”表示玻璃化率大于 10%,小于 30%;“ +++”表示玻
璃化率大于 30%。
表 3　不同植物生长调节剂对毛葡萄生根培养的影响
培养基 接种株数(株)
生根株数
(生根率%)
愈伤组织
发生程度 生根小苗的长势 、长相
12号　IBA 0.1+B0.1 150 142(95) + 根少,芽细长 ,生长缓慢
13号　IBA 0.4+BA0.1 150 150(100) + 根粗壮均匀 ,芽较匀称
14号　IBA 1.0+BA0.2 150 150(100) 根粗长均匀芽较高
15号　IBA 0.1+IAA0.2+BA0.2 150 150(100) 同上
16号　IBA 0.1+NAA0.1 150 146(97) ++ 根多,苗弱 ,根易分离
17号　NAA 0.1 150 146(97) +++ 同上
18　　　0 150 139(93) 根少 ,芽生长缓慢
幼根容易从小植株基部分离脱落 ,小植株生
长较缓慢 。18 号培养基 ,小芽生长缓慢 ,发
根少;而 12号培养基则小植株生长细弱 、缓
慢 ,发根少。第 13 ～ 15 号培养基发根较粗
长 ,均匀 ,每株 2 ～ 4条 ,不易分离脱落 ,小植
株培养 30 天后 ,可达 3cm 高 ,且较匀称 、健
壮。
2.4　不同介质对组培苗假植成活率的影响
假植结果(表 4)表明 ,只要毛葡萄组培
生根苗健壮 ,根系完整 ,注意保湿遮阳 ,假植
成活率均可达 90%以上。采用河沙介质成
活率虽高 ,但不方便运输和种植 ,因此以干净
塘泥或掺少量河沙作育苗介质较为理想 。
表 4　不同介质对毛葡萄组培苗
假植成活率的影响
假植介质 假植株数 成活株数 成活率(%)
干净河沙 205 194 94.6
塘　泥 200 180 90
1 2河沙+1 2塘泥 200 186 93
　　假植成活 20天后 ,小植株新长 2 ～ 3片
叶子 ,并初步形成根系 ,可适当加大光照度 ,
也可进行叶面追肥 ,喷施 0.2%的进口复合
肥。小植株在土壤介质里生长迅速 , 5天便
开展一片叶子 ,并逐步长高 。在往后的日常
管理中 ,要注意通风降湿见光 ,预防害虫和霜
霉病 ,每隔 7天喷一次乐果或敌百虫 、雷多米
尔(瑞毒霉),预防害虫和霜霉病 。当营养杯
苗长高 10cm 、具 5片叶以上时 ,开棚炼苗 ,随
后即可出圃种植。
3　结论与讨论
3.1　野生毛葡萄是酿造野生葡萄酒的主要
原料 ,在种苗繁育中 ,曾采用播种 、扦插 、嫁接
方法 ,但效果不甚理想。采用组培快繁成功 ,
这对毛葡萄原料基地的建设 ,提供了种苗和
技术保证 。
3.2　在毛葡萄基段离体培养中 ,宜采用 BA 、
IAA 和 IBA 等植物生长调节剂 ,一般不用
NAA和ZT。因为 ZT 成本过高 ,NAA容易诱
·198· 广西农业科学　1998年第 4 期
导生产愈伤组织。适宜的 BA 浓度水平是
1.0 ～ 2.0mg L , IAA 为 0.01 ～ 0.02mg L;生根
培养 , 适宜的浓度水平是:IBA 0.5 ～ 1.0
mg L ,BA 0.1 ～ 0.2mg L。
曹孜义在家葡萄的茎段离体继代和生根
培养中 , BA 和 IBA 的使用浓度分别为 0.02
和0.2mg L ,效果很好[ 4] 。BA和 IAA联用 ,浓
度均为 1.0mg L时 ,对山葡萄等 8种野生葡
萄的离体培养能起到腋芽增殖和幼茎伸长的
双重作用[ 5] 。“龙山一号”山葡萄组培增殖效
果最好的植物生长调节剂水平是:BA 1.0mg
L 、IAA 0.05mg L ,这与我们的试验结果相类
似。可见 ,种类不同 、产地不同的(野生)葡萄
在离体培养中用的植物生长调节剂浓度及产
生的效果是有差异的 。今后值得进一步探索
更有效 、实用 、简化 、低成本的培养基配方和
组培生产工艺路线。
3.3　在毛葡萄组织培养的各个阶段 ,因为温
度 、光照 、培养基配方及植物生长调节剂浓度
等因素影响 ,极易发生玻璃化现象 ,其特征
是:小芽或小植株的叶片 、幼茎或全株呈水渍
透明状 ,组织疏松 ,生长柔弱 ,虽可继代培养 ,
但生根培养易枯死 ,假植成活更困难。产生
玻璃化现象的原因 ,应作进一步研究分析。
参考文献
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西农业科学 , 1997 ,(2):75～ 76.
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萄试管苗生长的影响.上海农业学报 , 1995 , 11
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5　韩东生 ,吴绛云.植物激素和蔗糖对山葡萄离体
茎段腋芽及根发育的影响.北方园艺 , 1993 , 92
(5):15～ 17.
(上接 193 页)
杀死乳油 1 份加一级滑石粉(飘移性能好)
100份 ,采用大马力(最好是西北林机厂产或
日本产久保田)喷粉机 ,于早 、晚气流较小时
喷放。视树高矮增减用药 ,基本要求是让粉
尘覆盖全部树冠 。喷后 30分钟 ,80%的成若
虫倒地 ,下落后 3 ～ 5分钟死亡。此法工效
高 ,一台机 3 人操作每天可喷 10 ～ 13.5 公
顷 ,效果可达 50%～ 70%,果实无“麻疯”斑。
缺点是对卵无作用 ,对喷粉前 、后期开的花防
治不彻底 ,因此最好相隔三天后重喷一次。
5.2　打孔施药 。在花蕾膨大时 、初花前一周
左右 ,采用蚂蝗钉或皮带打孔钉 ,直径约 12
～ 14mm ,视树木大小 ,于树干距地面 1m 左右
高处 ,打1 ～ 3 个孔 ,深 2 ～ 2.5cm ,加入内吸
有机磷农药的药棉球填塞 ,每株视农药种类 、
冠幅大小施药液 2 ～ 6ml。孔口外用纸箱封
口胶封严或用凡士林涂封(雨天)。如花期过
长 ,一个月后可加药补充 。此法可提前作业 ,
效果好 ,保果率达 90%～ 100%。缺点是工
效低 ,劳动强度大。
5.3　涂干施药。在花蕾膨大时 ,于树干1.3
m以下部位 ,将上述类型农药每株按 6 ～ 18ml
的用量施药。先将树干上过厚过老的硬皮 、
青苔 、杂质刮去一圈 ,宽 5 ～ 10cm ,然后将药
液涂上 ,外面用农用地膜包紧 ,上下扎实 。此
法可以提前作业 , 效果可达 90%～ 100%。
缺点是药的用量大 ,成本较高 。
通过上述方法的治理 。八角麻疯病(疮
痂果)是完全可以控制的 。
参考文献
1　韩运发 ,徐祖荫.中国农作物蓟马.北京:农业
出版社 , 1982.
2　黄卓民.八角.北京:中国林业出版社 , 1994.
3　萧刚柔.中国森林昆虫.北京:中国林业出版
社 , 1992.
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术.北京:农业出版社 , 1976.
·199·邹瑜等:野生毛葡萄茎段离体培养和生产应用研究