全 文 ：　２０１６，４２（１）：２０３－２０７　 Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ
收稿日期：　２０１４－１１－１６　　　修订日期：　２０１５－０１－２２
基金项目：　广西科技成果转化与推广计划项目（桂科转１４１２５００３－１－１５，桂科转１３４６００３－１４）；国家现代农业产业技术体系广西特色水果创
新团队南宁葡萄综合试验站（ｎｙｃｙｔｘｇｘｃｘｔｄ－０４－１９－１４）
＊ 通信作者 Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｅｙｕｎｆｅｎｇ１１１＠１２６．ｃｏｍ；ｆｕｇ１１０＠ｇｘａａｓ．ｎｅｔ
毛葡萄穗轴溃疡病病原鉴定及防治药剂初步筛选
吴代东１，　付　岗２＊，　叶云峰３＊，　胡凤云３，
苏祖祥１，　覃柳燕１，　牟海飞１
（１．广西农业科学院生物技术研究所，南宁　５３０００７；２．广西农业科学院微生物研究所，南宁　５３０００７；
３．广西壮族自治区药用植物园，南宁　５３００２３）
摘要　毛葡萄穗轴溃疡病主要危害果穗穗轴，引起果穗枯死和果实大量脱落，造成果实产量降低。本研究对该病的
病原菌进行分离、致病性测定，并通过形态学特征、ＩＴＳ　ｒＤＮＡ和ＥＦ－１α基因序列分析将该病的主要病原鉴定为小
新壳梭孢菌（Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍ）。通过抑制菌丝生长法在室内初步筛选防治该病的药剂，试验结果表明，在测
试的２６种药剂中，３０％氟硅唑微乳剂、６４％噁霜·锰锌可湿性粉剂、７０％戊唑·丙森锌可湿性粉剂、７０％代森锰锌
可湿性粉剂、２２．２％抑霉唑乳油、７０％丙森锌可湿性粉剂及６０％唑醚·代森联水分散粒剂等７种药剂对该病病原
的抑制作用较强，抑菌率均达１００％，可作为备选药剂进行田间防治试验。
关键词　毛葡萄；　穗轴溃疡病；　小新壳梭孢菌；　病原鉴定；　药剂筛选
中图分类号：　Ｓ　４３６．６３　　文献标识码：　Ａ　　ＤＯＩ：　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９－１５４２．２０１６．０１．０３８
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｎｉｃｌｅ　ｃａｎｋｅｒ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ａｎｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ
Ｗｕ　Ｄａｉｄｏｎｇ１，　Ｆｕ　Ｇａｎｇ２，　Ｙｅ　Ｙｕｎｆｅｎｇ３，　Ｈｕ　Ｆｅｎｇｙｕｎ３，　Ｓｕ　Ｚｕｘｉａｎｇ１，　Ｑｉｎ　Ｌｉｕｙａｎ１，　Ｍｏｕ　Ｈａｉｆｅｉ　１
（１．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００２３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｐａｎｉｃｌｅ　ｃａｎｋｅｒ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｄａｍａｇｅｄ　ｔｈｅ　ｐａｎｉｃｌｅ　ｏｆ　Ｖｉｔｉｓ　ｈｅｙｎｅａｎａ，ｃａｕｓｅｄ　ａ　ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｆｒｕｉｔｓ　ｄｒｏｐ
ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ．Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉ－
ｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ＩＴＳ　ｒＤＮＡ　ａｎｄ　ＥＦ－１αｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ
ｐａｒｖｕｍ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　２６　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　７　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅ　３０％ ＭＥ，ｏｘａｄｉｘｙｌ·ｍａｎｃｏｚｅｂ　６４％ ＷＰ，ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ· ｐｒｏｐｉｎｅｂ　７０％ ＷＰ，ｍａｎｃｏｚｅｂ　７０％ ＷＰ，
ｉｍａｚａｌｉｌ　２２．２％ ＥＣ，ｐｒｏｐｉｎｅｂ　７０％ ＷＰ　ａｎｄ　ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ·ｍｅｔｉｒａｍ６０％ ＷＧ　ｓｈｏｗｅｄ　ｈｉｇｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ
１００％ｏｎ　Ｎ．ｐａｒｖｕｍ．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅｓｅ　７　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ　ａｓ　ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ　ａｇｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｆｉｅｌｄ　ｔｅｓｔｉｎｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｖｉｔｉｓ　ｈｅｙｎｅａｎａ；　ｐａｎｉｃｌｅ　ｃａｎｋｅｒ；　Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍ；　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ；　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ
　　毛葡萄（Ｖｉｔｉｓ　ｈｅｙｎｅａｎａ　Ｒｏｅｍｅｒ　ｅｔ　Ｓｃｈｕｌｔ）为葡
萄科葡萄属东亚种群，多年生藤本植物。主要分布
在长江以南各省，耐干旱、瘠薄，以野生状态自然生
长在丘陵、石山、灌木丛和森林边缘地带。由于富含
营养、保健及抗衰老物质，被作为酿制特色风味果酒
的原料［１］。广西罗城仫佬族自治县是中国野生毛葡
萄之乡，有超过５　０００ｈｍ２ 的自然生长区域［２］。近
年来，随着毛葡萄酿酒产业在广西的迅速发展，对毛
葡萄鲜果的需求量不断增加，从而提高了人工种植
毛葡萄的积极性。目前，罗城县１１个乡镇全部建立
有野生毛葡萄基地，种植总面积达４　４６７ｈｍ２。随着
毛葡萄人工种植面积的增加，发生的病虫害种类也
日益增多。其中，穗轴溃疡病是近年毛葡萄种植区
发生的一种严重影响果实产量的病害，主要发生在
结果期至成熟期，引起果穗褐变枯死，造成果实在收
获前大量脱落。作者前期初步调查发现，严重地块
果穗发病率达８０％以上，常造成减产５０％～８０％。
目前尚无关于该病害病原分类、发生规律及防治技
２０１６
术方面的研究报道，因此，该病害成为制约毛葡萄产
业发展的重要因素。作者于２０１２—２０１４年对广西
罗城县的毛葡萄穗轴溃疡病病样进行了采集、病原
菌分离鉴定及室内防治药剂筛选试验，以便为该病
害的有效防治提供科学依据。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　供试毛葡萄样品
病原菌分离使用的毛葡萄果穗穗轴病样５份和
致病性测定使用的健康毛葡萄果穗样品均采自广西
壮族自治区罗城仫佬族自治县四把镇水源毛葡萄
基地。
１．１．２　供试药剂
２６种供试药剂分别为：１．８％辛菌胺乙酸盐水
溶剂（广西安嘉科技农化有限公司）；１５％咪鲜胺微
乳剂、２５０ｇ／Ｌ丙环唑乳油、３０％氟硅唑微乳剂（海
南博士威农用化学有限公司）；１０％苯嘧菌酯悬浮剂
（浙江禾田化工有限公司）；２５０ｇ／Ｌ吡唑嘧菌酯乳
油、６０％唑醚·代森联水分散粒剂（德国巴斯夫公
司）；１０％苯醚甲环唑水分散粒剂（安徽绩溪农华生
物科技有限公司）；３０％嘧菌酯可湿性粉剂（美丰农
化有限公司）；７０％代森锰锌可湿性粉剂（四川国光
农化股份有限公司）、７０％丙森锌可湿性粉剂、７５％
肟菌·戊唑醇水分散粒剂（拜耳作物科学公司）；
２４％腈苯唑悬浮剂、３６％硝苯菌酯乳油（美国陶氏益
农公司）、７０％戊唑·丙森锌可湿性粉剂（北京燕化
永乐农药有限公司）；２２．２％抑霉唑乳油（美国仙农
有限公司）；４５％克菌·戊唑醇悬浮剂、５３％苯甲·
戊唑醇乳油、５０％嘧菌酯·百菌清悬浮剂（南京金金
利生物科技公司）；３０％苯甲·丙环唑乳油（先正达
（中国）投资有限公司）；２５％氟吗·唑菌酯悬浮剂
（沈阳科创化学品有限公司）；４５％甲霜·噁霉灵可
湿性粉剂（黑龙江省哈尔滨市农欢化工厂）；６４％噁
霜灵·锰锌可湿性粉剂（天津科润北方种衣剂有限
公司）；６５％多抗·阳光霉素可湿性粉剂（江苏金益
农生物科技有限公司）；１２％春雷霉素可湿性粉剂
（河北上瑞化工有限公司）；３％多抗霉素可湿性粉剂
（山东省禹城市农药厂）。
１．２　病害症状观察
２０１２年６月—２０１３年９月对罗城县毛葡萄基
地的毛葡萄穗轴溃疡病症状及发生扩展情况进行了
观察、记录和拍摄。
１．３　病原菌分离和鉴定
１．３．１　病原菌的分离纯化
选取毛葡萄果穗穗轴上病健交界处组织，切成
０．３ｃｍ小段，用７５％乙醇浸泡３０ｓ，０．１％升汞消毒
４０ｓ，再用无菌水漂洗３次，置于马铃薯葡萄糖琼脂
（ＰＤＡ）平板上，在２８℃培养箱中黑暗培养，待长出
菌丝后，挑取菌落边缘进行纯化，纯化后的菌落通过
单孢分离获得单孢系纯培养分离物。
１．３．２　分离物的致病性测定
从田间剪取健康幼嫩的毛葡萄果穗，用无菌水
冲洗干净。将纯培养的分离物菌丝块通过针刺接种
法接种到离体的毛葡萄果穗穗轴上，置于２８℃的恒
温培养箱内保湿培养，以针刺伤口处放ＰＤＡ培养基
块的穗轴为对照，定期观察各组织的发病情况，发病
后再对病斑进行病原菌分离，通过柯赫氏法则验证
病原菌。
１．３．３　病原菌形态学鉴定
将病原菌（经验证具有致病性的分离物）接种到
ＰＤＡ平板上，置于２８℃的培养箱中黑暗培养，观察
菌落特征。另外，将病原菌接种到添加无菌松针（马
尾松）的水琼脂培养基上［３］，２８℃黑暗培养２５ｄ，显
微观察分生孢子的形态特征，对病原菌进行形态学
鉴定。
１．３．４　分子生物学鉴定
病原菌基因组ＤＮＡ提取采用ＣＴＡＢ法［６］。以真
菌核糖体ｒＤＮＡ区通用引物ＩＴＳ１（５′－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴ－
ＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ－３′）和ＩＴＳ４（５′－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴ－
ＧＡＴＡＴＧＣ－３′）对病原菌的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列进行ＰＣＲ
扩增；同时，参照文献［４］合成引物 ＥＦ１－７２８Ｆ（５′－
ＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧ－３′） 和 ＥＦ１－９８６Ｒ
（５′－ＴＡＣＴＴＧＡＡＧＧＡＡＣＣＣＴＴＡＣＣ－３′）对病原菌的
翻译延伸因子ＥＦ－１α基因序列进行ＰＣＲ扩增。反应
均在２５μＬ体系中进行，体系含有１０×Ｅｘ　ｂｕｆｅｒ
２．５μＬ，２．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ　２．０μＬ，１０μｍｏｌ／Ｌ正反
向引物各０．５μＬ，基因组ＤＮＡ　１００ｎｇ，５Ｕ／μＬ　Ｅｘ　Ｔａｑ
０．５μＬ；ｄｄＨ２Ｏ补足至２５μＬ。反应程序为：９５℃预变
性５ｍｉｎ，进入循环，９５℃变性３０ｓ，５８℃退火３０ｓ，７２℃
复性８０ｓ，３５个循环，最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ
产物经１％琼脂糖凝胶电泳回收目标ＤＮＡ片段，由
上海鼎安生物科技有限公司进行测序，测序结果用
ＢＬＡＳＴ软件在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中进行同源性
·４０２·
４２卷第１期 吴代东等：毛葡萄穗轴溃疡病病原鉴定及防治药剂初步筛选
比对。
１．４　室内药剂筛选
在ＰＤＡ平板上培养７ｄ的菌落外缘，用打孔器
打取直径５ｍｍ的菌饼转接到含不同杀菌剂的ＰＤＡ
培养基中，药剂浓度按说明书推荐的使用浓度。以
不含农药的ＰＤＡ平板为对照，菌丝面朝下置于平板
中央，每平板接种一块菌丝块，每处理重复３次。培
养７ｄ后（对照菌丝长满皿）测量菌落直径，计算平
均抑菌率。
抑菌率（％）＝
对照菌落增长直径－处理菌落增长直径
对照菌落增长直径 ×１００
。
２　结果与分析
２．１　病害症状
该病害主要危害毛葡萄果穗穗轴，在穗轴基部
先出现褐色水渍状斑，病斑环绕果穗发展，并向顶部
穗轴扩展，严重时可扩展到整个穗轴，造成果穗褐变
干枯死亡，随后果实大量脱落，脱落的果实大多数健
康，少数从果蒂腐烂，有时果实不脱落，逐渐干缩。
空气湿度大时，果穗褐变腐烂。该病害从毛葡萄结
果初期到成熟期（６—９月）均可发生，高温多雨时期
发病较重，枝繁叶密、通风不良的地块发病也较重，
着色中期至成熟采收期蔓延速度快。
２．２　病原菌分离和鉴定
２．２．１　病原菌分离和致病性测定
对毛葡萄果穗穗轴５个病害标样进行病原分
离，分离纯化得到形态特征一致的菌株１２株。通过
针刺接种法将这些菌株的菌丝块（平均直径３ｍｍ）
接种到健康的毛葡萄果穗上，接种后第３天，接种部
位均出现明显的发病症状，接种后第５天，病症扩展
到整个果穗，致果穗全部褐变死亡（图１ｂ）。接种发
病症状与田间自然发病症状（图１ａ）相似。对照的
果穗未发病（图１ｃ）。
图１　毛葡萄穗轴溃疡病自然发病及接种发病症状
Ｆｉｇ．１　Ｎａｔｕｒａｌ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ａｎｄ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ｏｆ　ｐａｎｉｃｌｅ　ｃａｎｋｅｒ　ｏｎ　Ｖｉｔｉｓ　ｈｅｙｎｅａｎａ
２．２．２　病原菌形态学鉴定
病原菌在ＰＤＡ培养基上生长迅速，气生菌丝发
达，菌落高度可以达到并紧贴培养皿上盖。初期基
质菌丝和气生菌丝均为白色（图２ａ），４ｄ后气生菌
丝变为灰黑色，基质菌丝变为黑色。在添加无菌松
针（马尾松）的水琼脂培养基上培养２５ｄ后，在松针
上形成黑色的分生孢子器，分生孢子器近球形，直径
为３５０．０～５００．０μｍ。分生孢子单胞，椭圆形至纺
锤形，薄壁半透明，大小为（１２．０～１７．５）μｍ×（４．０
～６．０）μｍ（图２ｂ）。这些病原菌的培养性状和形态
特征与已报道［３，５］的葡萄座腔菌科（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉ－
ａｃｅａｅ）中的一种无性型菌物即小新壳梭孢菌（Ｎｅｏ－
ｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍ）相似。
图２　毛葡萄穗轴溃疡病病原菌形态
Ｆｉｇ．２　Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　ｐａｎｉｃｌｅ　ｃａｎｋｅｒ
２．２．３　分子生物学鉴定
分别以ＩＴＳ１、ＩＴＳ４和ＥＦ１－７２８Ｆ、ＥＦ１－９８６Ｒ为
·５０２·
２０１６
引物对病原菌的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ基因和ＥＦ－１α基因序列
进行ＰＣＲ扩增，并对扩增产物进行测序。结果获得
５７１ｂｐ的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：
ＫＪ５９９６２７）和２９３ｂｐ的ＥＦ－１α基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ
登录号：ＫＭ９２１７６８），将两种序列分别与 ＧｅｎＢａｎｋ
中核酸数据进行ＢＬＡＳＴ比对，ｒＤＮＡ－ＩＴＳ基因和
ＥＦ－１α基因序列均与多个小新壳梭孢菌（Ｎｅｏｆｕｓｉｃ－
ｏｃｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍ）的序列同源性最高，相似性分别为
１００％和９９％。
结合病原菌的形态特征、ｒＤＮＡ－ＩＴＳ及 ＥＦ－１α
基因序列分析结果，将病原菌鉴定为小新壳梭孢菌
（Ｎ．ｐａｒｖｕｍ）。
２．３　室内防治药剂筛选
室内药剂筛选试验结果见表１，在测试的２６
种药剂中，３０％氟硅唑微乳剂７　０００倍液、６４％噁
霜·锰锌可湿性粉剂６００倍液、７０％戊唑·丙森锌
可湿性粉剂４　０００倍液、７０％代森锰锌可湿性粉剂
６００倍液、２２．２％抑霉唑乳油８００倍液、７０％丙森
锌可湿性粉剂６００倍液及６０％唑醚·代森联水
分散粒剂１　０００倍液对病原菌的抑制作用较强，抑
菌率均达１００％。另外，７５％肟菌·戊唑醇水分
散粒剂４　０００倍液、３０％苯甲·丙环唑乳油２　０００
倍液、１５％咪鲜胺微乳剂２　０００倍液、６５％多抗·
阳光霉素可湿性粉剂１　０００倍液、３０％嘧菌酯可湿
性粉剂３　０００倍液及４５％克菌·戊唑醇悬浮剂
１０００倍液对病原菌的抑制作用也较强，抑菌率在
９５．３％～９８．２％之间。抑菌作用较差的药剂是：
３６％硝苯菌酯乳油１　５００倍液和５０％嘧菌酯·百
菌清悬浮剂２　０００倍液，抑菌率分别为２１．２％和
１２．９％。
表１　不同药剂对病原菌菌丝生长的抑菌率１）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ　ｏｎ　ｍｙｃｅｌｉａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍ
编号
Ｎｏ．
药剂种类
Ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ
稀释倍数
Ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｓ
平均抑菌率／％
Ａｖｅｒａｇｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ
１　 ３０％氟硅唑 ＭＥ　Ｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅ　３０％ ＭＥ　 ７　０００　 １００．０ａ
２　 ６４％噁霜·锰锌 ＷＰ　Ｏｘａｄｉｘｙｌ·ｍａｎｃｏｚｅｂ　６４％ ＷＰ　 ６００　 １００．０ａ
３　 ７０％戊唑·丙森锌 ＷＰ　Ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ·ｐｒｏｐｉｎｅｂ　７０％ ＷＰ　 ４　０００　 １００．０ａ
４　 ７０％代森锰锌 ＷＰ　Ｍａｎｃｏｚｅｂ　７０％ ＷＰ　 ６００　 １００．０ａ
５　 ２２．２％抑霉唑ＥＣ　Ｉｍａｚａｌｉｌ　２２．２％ＥＣ　 ８００　 １００．０ａ
６　 ７０％丙森锌 ＷＰ　Ｐｒｏｐｉｎｅｂ　７０％ ＷＰ　 ６００　 １００．０ａ
７　 ６０％唑醚·代森联 ＷＧ　Ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ·ｍｅｔｉｒａｍ　６０％ ＷＧ　 １　０００　 １００．０ａ
８　 ７５％肟菌·戊唑醇 ＷＧ　Ｔｒｉｆｌｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ·ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ　７５％ ＷＧ　 ４　０００　 ９８．２ａ
９　 ３０％苯甲·丙环唑ＥＣ　Ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ·ｐｒｏｐｉｃｏｎａｚｏｌｅ　３０％ＥＣ　 ２　０００　 ９８．２ａ
１０　 １５％咪鲜胺 ＭＥ　Ｐｒｏｃｈｌｏｒａｚ　１５％ ＭＥ　 ２　０００　 ９７．３ａ
１１　 ６５％多抗·阳光霉素 ＷＰ　Ｐｏｌｙｏｘｉｎ·ｓｕｎｓｈｉｎｅ　ｍｙｃｉｎ　６５％ ＷＰ　 １　０００　 ９６．０ａｂ
１２　 ３０％嘧菌酯 ＷＰ　Ｋｒｅｓｏｘｉｍ－ｍｅｔｈｙｌ　３０％ ＷＰ　 ３　０００　 ９５．９ａｂ
１３　 ４５％克菌·戊唑醇ＳＣ　Ｃａｐｔａｎ·ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ　４５％ＳＣ　 １　０００　 ９５．３ａｂ
１４　 ２５０ｇ／Ｌ丙环唑ＥＣ　Ｐｒｏｐｉｃｏｎａｚｏｌｅ　２５０ｇ／Ｌ　ＥＣ　 １　０００　 ９０．４ｂ
１５　 ４５％甲霜·噁霉灵 ＷＰ　Ｍｅｔａｌａｘｙｌ·ｈｙｍｅｘａｚｏｌ　４５％ ＷＰ　 １　０００　 ８７．１ｂ
１６　 ３％多抗霉素 ＷＰ　Ｐｏｌｙｏｘｉｎ　３％ ＷＰ　 ８００　 ８２．３ｃ
１７　 ２５０ｇ／Ｌ吡唑嘧菌酯ＥＣ　Ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ　２５０ｇ／Ｌ　ＥＣ　 １　０００　 ８１．９ｃ
１８　 １０％苯醚甲环唑 ＷＧ　Ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ　１０％ ＷＧ　 １　０００　 ８１．９ｃ
１９　 １．８％辛菌胺乙酸盐ＡＳ　Ｎ，Ｎ－Ｄｉｏｃｔｙｌｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅ·ｔｒｉａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　１．８％ ＡＳ　 ７００　 ８０．０ｃ
２０　 ２４％腈苯唑ＳＣ　Ｆｅｎｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ　２４％ＳＣ　 １　５００　 ７７．６ｃ
２１　 ２５％氟吗·唑菌酯ＳＣ　Ｆｌｕｍｏｒｐｈ·ｐｙｒａｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ　２５％ＳＣ　 １　５００　 ６４．７ｄ
２２　 １０％苯嘧菌酯ＳＣ　Ｂｅｎｚｅｎｅ　ｋｒｅｓｏｘｉｍ－ｍｅｔｈｙｌ　１０％ＳＣ　 ７　５００　 ６３．１ｄ
２３　 ５３％苯甲·戊唑醇ＥＣ　Ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ·ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ　ＥＣ　 １　５００　 ５８．８ｅ
２４　 １２％春雷霉素 ＷＰ　Ｋａｓｕｇａｍｙｃｉｎ　１２％ ＷＰ　 ６００　 ５０．７ｅ
２５　 ３６％硝苯菌酯ＥＣ　Ｍｅｐｔｙｌ　ｄｉｎｏｃａｐ　３６％ＥＣ　 １　５００　 ２１．２ｆ
２６　 ５０％嘧菌酯·百菌清ＳＣ　Ｋｒｅｓｏｘｉｍ－ｍｅｔｈｙｌ·ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ　５０％ＳＣ　 ２　０００　 １２．９ｇ
　１）同列数据后不同小写字母表示差异显著（ＳＡＳ，Ｐ＜０．０５）。
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０５ｌｅｖｅｌ　ｂｙ　ＳＡＳ．
·６０２·
４２卷第１期 吴代东等：毛葡萄穗轴溃疡病病原鉴定及防治药剂初步筛选
３　结论与讨论
本研究对引起广西罗城县毛葡萄果穗大量枯死
的病原菌进行分离，并结合形态学特征及ｒＤＮＡ－
ＩＴＳ序列和ＥＦ－１α基因序列分析结果将病原菌鉴定
为小新壳梭孢菌（Ｎ．ｐａｒｖｕｍ）。Ｎ．ｐａｒｖｕｍ 是葡萄
座腔菌科（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ）中的一种无性型菌
物，曾作为小葡萄座腔菌（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ　ｐａｒｖａ）的
无性阶段被报道［６］。该病原菌在鲜食葡萄上引起溃
疡病已有报道［７－８］，但在用于酿酒业的毛葡萄这个较
特殊的品种上引起溃疡病尚无报道。燕继晔等［９］报
道国内鲜食葡萄溃疡病主要由Ｎ．ｐａｒｖｕｍ、Ｂｏｔｒｙｏ－
ｓｐｈａｅｒｉａ　ｄｏｔｈｉｄｅａ、Ｄｉｐｌｏｄｉａ　ｓｅｒｉａｔａ和Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏ－
ｄｉａ　ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ等４种病原菌引起，造成葡萄穗轴
干枯、烂果、落粒。４种病原菌在地理分布上有差
异，其中，Ｎ．ｐａｒｖｕｍ 和Ｌ．ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ分布在亚热
带季风气候区域，Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ分布于温带季风气候
区域和亚热带季风气候区域，Ｄ．ｓｅｒｉａｔａ主要分布于
温带季风气候区域的山东和河北两省。而本研究报
道的毛葡萄穗轴溃疡病菌（Ｎ．ｐａｒｖｕｍ）也出现在亚
热带季风气候区域，病害症状与葡萄溃疡病症状相
似。此外，Ｎ．ｐａｒｖｕｍ 也是林木和果树上常见的病
原真菌，常引起茎秆、枝条枯萎病或溃疡病，也可引
起叶枯病。国内外已报道的有柏木枯萎病［５］，圆锥
蒲桃梢枯病［１０］，鳄梨、亚洲梨的茎秆和枝条溃疡
病［１１－１２］，油桐叶枯病［３］等。本研究分离到的Ｎ．ｐａｒ－
ｖｕｍ菌株在ＰＤＡ培养基上不易产生无性分生孢子，
参照袁志林等的方法［３］，将菌株接种到含有无菌松
针的水琼脂培养基上，暗培养２５ｄ后才能产生无性
分生孢子。Ｎ．ｐａｒｖｕｍ与同属的其他种类真菌在形
态上极为相似，在分子鉴定方面仅靠ＩＴＳ序列分析
不足以区分不同种类，结合ＥＦ－１α序列分析进行种
类鉴定可使试验结果更为可靠［１３］，因此，本研究结
合ＩＴＳ和ＥＦ－１α序列分析结果对病原菌进行分类
鉴定。
在研究过程中，我们还发现了两种能引起毛葡
萄果穗枯死的致病力较弱的真菌，分别鉴定为胶孢
炭疽菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）和层出镰
刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ），但这两种菌的分离
率较低。此外，史国英等［２］曾报道了主要发生在花
期的毛葡萄穗轴褐腐病病原可可毛色二孢（Ｌａｓｉｏ－
ｄｉｐｌｏｄｉａ　ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ）。可见，毛葡萄穗部病害可由
多种真菌引起，这些真菌存在复合侵染的可能性。
因此，对毛葡萄穗部病害的病原种类和侵染规律等
可进行更为深入系统的研究。
通过抑制菌丝生长法在室内对该病的防治药剂
进行初步筛选，获得多种对病原菌抑制作用较强的低
毒药剂，包括３０％氟硅唑微乳剂、６４％噁霜灵·锰锌
可湿性粉剂、７０％戊唑·丙森锌可湿性粉剂、７０％代
森锰锌可湿性粉剂、２２．２％抑霉唑乳油、７０％丙森锌
可湿性粉剂及６０％唑醚·代森联水分散粒剂等，抑菌
率均达１００％。这些药剂可作为备选药剂进行田间防
治试验，以便筛选出田间防治效果较好的药剂。
参考文献
［１］　吴代东，吴宗立，李朝生，等．毛葡萄各生长期主要病虫害防
治［Ｊ］．广西农业科学，２００４，３５（１）：７０－７１．
［２］　史国英，胡春锦，罗掉爱，等．毛葡萄穗轴褐腐病病原菌鉴定
及其生物学特性［Ｊ］．植物病理学报，２０１０，４０（３）：２４２－２４９．
［３］　袁志林，陈益存，汪阳东．一种新发生的油桐叶枯病病原真菌
［Ｊ］．菌物学报，２０１１，３０（４）：６５８－６６２．
［４］　梁超琼，曹支敏，陈敏，等．杨树水泡型溃疡病菌培养性状、无性
型与分子系统学分析［Ｊ］．林业科学，２０１４，５０（４）：６６－７６．
［５］　李淑斌，张颢．柏木枯萎病病原菌的形态特征及分子鉴定［Ｊ］．
华北农学报，２０１１，２６（Ｓ１）：１９０－１９２．
［６］　Ｐｅｎｎｙｃｏｏｋ　Ｓ　Ｒ，Ｓａｍｕｅｌｓ　Ｇ　Ｊ．Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａａｎｄ　Ｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｒｉｐｅ　ｆｒｕｉｔ　ｒｏｔ　ｏｆ　Ａｃｔｉｎｉｄｉａ　ｄｅｌｉｃｉｏｓａ（Ｋｉ－
ｗｉｆｒｕｉｔ）ｉｎ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｔａｘｏｎ，１９８５，２４：４４５－４５８．
［７］　张玮，燕继晔，黄金宝，等．葡萄溃疡病菌巢式ＰＣＲ高效检测
体系的建立［Ｊ］．植物保护学报，２０１２，３９（５）：４７９－４８０．
［８］　Ｋａｌｉｔｅｒｎａｍ　Ｊ，Ｍｉｌｉｃｅｖｉｃ　Ｔ．Ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ　ｐａｒ－
ｖｕｍａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｇｒａｐｅｖｉｎｅ　ｔｒｕｎｋ　ｄｉｓｅａｓｅｓ　ｉｎ　Ｃｒｏａｔｉａ［Ｊ］．
Ｐｌａｎｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ，２０１３，９７（１２）：１６５６．
［９］　Ｙａｎ　Ｊｉｙｅ，Ｘｉｅ　Ｙｕｅ，Ｚｈａｎｇ　Ｗｅｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａ－
ｅｒｉａｃｅａｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｇｒａｐｅｖｉｎｅ　ｄｉｅｂａｃｋ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｆｕｎｇａｌ　Ｄｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ，２０１３，６１（１）：２２１－２３６．
［１０］Ｐｌｏｅｔｚ　Ｒ　Ｃ，Ｐéｒｅｚ－Ｍａｒｔíｎｅｚ　Ｊ　Ｍ，Ｐａｌｍａｔｅｅｒ　Ａ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｅｏｆｕ－
ｓｉｃｏｃｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍｃａｕｓｅｓ　ａ　ｌｅｔｈａｌ　ｄｉｅｂａｃｋ　ｏｆ　Ｓｙｚｙｇｉｕｍ　ｐａｎｉｃｕ－
ｌａｔｕｍｉｎ　Ｆｌｏｒｉｄａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００９，５８（４）：８０１．
［１１］ＭｃＤｏｎａｌｄ　Ｖ，Ｌｙｎｃｈ　Ｓ，Ｅｓｋａｌｅｎ　Ａ．Ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ
ａｕｓｔｒａｌｅ，Ｎ．ｌｕｔｅｕｍ，ａｎｄ　Ｎ．ｐａｒｖｕｍ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｖｏｃａｄｏ
ｂｒａｎｃｈ　ｃａｎｋｅｒ　ｉｎ　Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ，２００９，９３（９）：９６７．
［１２］Ｓｈｅｎ　Ｙ　Ｍ，Ｃｈａｏ　Ｃ　Ｈ，Ｌｉｕ　Ｈ　Ｌ．Ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃ－
ｃｕｍ　ｐａｒｖｕｍａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｔｅｍ　ｃａｎｋｅｒ　ａｎｄ　ｄｉｅｂａｃｋ　ｏｆ　Ａｓｉａｎ
ｐｅａｒ　ｔｒｅｅｓ　ｉｎ　Ｔａｉｗａｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ，２０１０，９４：１０６２．
［１３］Ｍａｒｑｕｅｓ　Ｍ　Ｗ，Ｌｉｍａ　Ｎ　Ｂ，Ｍｏｒａｉｓ　Ｍ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａ－
ｅｒｉａ，Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ，Ｎｅｏｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍａｎｄ　Ｐｓｅｕｄｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍａｎｇｏ　ｉｎ　Ｂｒａｚｉｌ［Ｊ］．Ｆｕｎｇａｌ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，
２０１３，６１（１）：１９５－２０８．
（责任编辑：王　音）
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