全 文 ：藏药达乌里秦艽中环烯醚萜苷的 HPLC测定
孙　菁1 , 徐文华1 , 2 , 王延花1 , 2 , 韩友吉1 , 2 , 陈桂琛 1
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室 , 西宁 810001;
2.中国科学院研究生院 , 北京 100049)
摘　要:采用HPLC法同时测定了藏药达乌里秦艽中龙胆苦苷(gentiopicroside)、
獐牙菜苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)和落干酸(loganic acid)4种主要
环烯醚萜苷类成分 , 利用在线质谱(MS)进行了定性分析 , 并与同属藏药麻花艽
进行了比较 。色谱柱为 Eclipse XDB-C8(4.6 mm×150 mm i.d., 5 μm), 流动相
A:体积分数 5%乙腈(含 10 mmol甲酸)水溶液 , 流动相 B:体积分数 95%乙腈
水溶液 , 以流动相A在 0 ～ 15 min内由100%线性减至 90%, 15 ～ 20 min内保持
90%不变线性梯度洗脱。流速 1.0 mL min , 检测波长 240 nm , 柱温 30 ℃。结果
表明 , 4种成分均达到了基线分离 , 具有较好的线性关系和回收率。本法可作
为达乌里秦艽药材有效成分的测定方法 , 为其有效成分的进一步开发利用提供
依据。
关键词:藏药;达乌里秦艽;环烯醚萜苷;HPLC
中图分类号:O657.7　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-0720(2008)12-051-04
　　达乌里秦艽(Gentiana dahurica Fischer)又名小
秦艽 , 为龙胆科(Gentianaceae)龙胆属多年生草本 ,
生于海拔 800 ～ 4500 m 的草原阳坡 、河谷阶地
下[ 1] , 为藏族民间常用解吉那保类药用植物 , 也是
2005版“中国药典”中所记载的 4种秦艽类药材之
一。干燥根可供药用 , 含有龙胆苦苷(gentiopicro-
side)等生物活性成分[ 2] , 用于治疗扁桃体炎 、荨麻
疹 、风湿性关节炎等症[ 2 ,3] 。目前 , 对藏药达乌里
秦艽的研究仅限于其 rRNA 基因内转录间隔区测
序[ 4] 、龙胆苦苷含量的测定[ 5] 、化学成分分析的研
究[ 6] , 有关其他环烯醚萜苷类成分的测定尚未见
报道。本文应用HPLC分析方法 , 同时测定了达乌
里秦艽药用部位中的龙胆苦苷 、獐牙菜苦苷(当药
苦苷 , swertiamarin)、獐牙菜苷(当药苷 , sweroside)
以及落干酸(loganic acid)的含量 , 建立了其 HPLC
分析方法 , 并利用在线柱后质谱进行了各组分的
定性分析 , 旨在对该药材的客观评价以及苦苷类
有效成分的进一步利用提供依据 。
1　实验部分
1.1　仪器 、试药与材料
Agilent 1100 型高效液相色谱仪(Agilent 公
司), 配备有四元梯度泵 , 在线真空脱气机 , DAD
检测器 , 100位自动进样器 , 大气压化学电离源
(APCI);KQ-200B型数控超声波清洗器(昆山市超
声仪器公司), Milli-Q 超纯水系统(美国 Millipore
公司)。
乙腈(德国 Merck公司)为色谱纯 , 甲醇和甲
酸为分析纯。龙胆苦苷 、獐牙菜苦苷对照品(中国
药品生物制品检定所 , 批号分别为 110770-200308 、
110785-200203), 纯度大于 99%;獐牙菜苷 、落干
酸对照品由中国科学院西北高原生物研究所李玉
林副研究员提供 , 经光谱分析鉴定 , HPLC面积归
一化法表明其纯度均大于 98%。
达乌里秦艽根部材料于 2004 年 9 月采集
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第 27 卷第 12期
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收稿日期:2007-07-22;修订日期:2007-10-18
基金项目:国家中西部专项(2001BA901A47)项目资助
作者简介:孙　菁(1976-), 女 , 博士;E-mail:gcchen@nwipb.ac.cn
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2008.0356
(表 2), 每个采样点内取 20 ～ 30 个个体植株的根
部 , 室温自然状态下阴干 , 混匀粉碎 , 过孔径 180
μm 筛 , 冷藏保存待用。原植物标本由中国科学院
西北高原生物研究所卢学峰副研究员鉴定为达乌
里秦艽(Gentiana dahurica Fischer)。
1.2　实验方法
1.2.1　对照品溶液的配制　准确称取一定量的龙
胆苦苷 , 獐牙菜苦苷 , 獐牙菜苷 , 落干酸对照品分
别配制成 3.63 , 2.75 , 2.76 , 3.30 mg mL的对照品
溶液 , 备用。
1.2.2　提取方法 　参照文献[ 8] 中提取方法的优
化 , 选择超声提取方法 。准确称取 0.2 g达乌里秦
艽根部粉末 , 置于 25 mL 三角瓶中 , 分别加入 10
mL 甲醇于 60 ℃下超声振荡提取 2 次 , 每次 30
min , 超声频率为 60 Hz , 冷却至室温后过滤 , 滤液
置于 25 mL 容量瓶中 , 用甲醇定容 , 摇匀 , 制成供
试品溶液 。
2　结果与讨论
2.1　标准品的色谱分离及在线质谱鉴定
参照文献[ 7] 中色谱条件稍作改进 , 色谱柱为
Eclipse XDB-C8 色谱柱(4.6 mm ×150 mm i.d., 5
μm)。流动相 A:体积分数 5%乙腈(含 10 mmol的
甲酸)水溶液 , B:体积分数 95%的乙腈水溶液 。
流速为 1.0 mL min , 进样量 10μL , 柱温 30 ℃。梯
度洗脱程序为:流动相A 在 0 ～ 15 min内由 100%
线性减至 90%, 15 ～ 20 min内保持 90%不变线性
梯度洗脱。待测成分均被洗脱且达到基线分离
(图 1a)。
图 1　对照品(a)和样品(b)的色谱分离图
Fig.1　HPLC chromatograms of standards(a)and samples(b)
1～ 4分别为:落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、 獐牙菜苷
　　标准品溶液分别进样后 , 利用 DAD检测器在
200 ～ 400 nm扫描其吸收光谱 , 各对照品均在 240
nm波长处有较高的吸收 , 选择该波长为检测波
长。在此条件下 , 4 种对照品均达到了基线分离 。
采用大气压化学电离源(APCI)进行各组分的在线
柱后质谱鉴定(负离子模式), 质谱数据见表 1。以
龙胆苦苷为代表性的质谱定性见图 2(分别为一级
和二级质谱图)。
图 2　代表性龙胆苦苷的一级(a)和二级(b)质谱图
Fig.2　First and second order mass spectra of representative gentiopicroside
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2.2　线性关系
取上述4种对照品溶液 , 逐级稀释 , 进样量为
10μL , 以峰面积来定量 , 测得各组分的回归方程 、
线性范围以及检出限如表 1。
表 1　达乌里秦艽根中 4种环烯醚萜苷的线性回归方程 、 相关系数 、线性范围 、检出限 、 一级质谱数据
Tab.1　Linear regression equations , correlation coefficients , linear range, detection limits and mass spectral data of four iridoid
glycosides constituents in G.dahurica roots
成分 回归方程
Y=Aρ+B
线性相关系数
r
线性范围
m μg
检出限
ρ (μg μL)
质核比
m z
落干酸 Y=517.3ρ+9.75 0.9997 0.25 ～ 7.92 2.85E-06 375
獐牙菜苦苷 Y=700.7ρ+15.95 0.9990 0.33～ 10.54 3.09E-06 449
龙胆苦苷 Y=601.4ρ+25.45 0.9991 0.54-～ 17.40 3.73E-06 401
獐牙菜苷 Y=808.1ρ+13.54 0.9992 0.23 ～ 7.28 2.55E-06 403
2.3　稳定性实验
取上述 4 种对照品溶液 , 分别间隔 0 、 2 、 8 、
12 、 16 、24 h进样 , 进样量 10μL , 测得龙胆苦苷 ,
獐牙菜苦苷 , 獐牙菜苷 , 落干酸的 RSD 分别为
1.3%, 1.2%, 2.8%, 1.6%, 表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2.4　精密度实验
取上述4种对照品溶液 , 分别连续进样 , 每次
为10 μL , 重复 5次 , 测得龙胆苦苷 , 獐牙菜苦苷 ,
獐牙菜苷 , 落干酸的 RSD 分别为 1.0%, 2.4%,
2.5%, 2.7%。
2.5　重复性试验
准确称定同一批样品 , 按照供试品溶液制备
方法 , 得到 5份供试品溶液 , 每次进样 10 μL , 重
复5次 , 测得龙胆苦苷 , 獐牙菜苦苷 , 獐牙菜苷 ,
落干酸的 RSD 分别为 0.4%, 2.3%, 1.6%,
0.8%。
2.6　加样回收率实验
取已知量的药材适量 , 加入一定量的对照品
混合溶液 , 按照样品处理方法制备并进样 10 μL ,
计算对照品的加样回收率 , 龙胆苦苷 , 獐牙菜苦
苷 , 獐牙菜苷 , 落干酸的平均回收率分别为
99.3%, 98.1%, 97.4%和 97.5%。
2.7　样品测定
按照1.2项下提取方法 , 制得供试品溶液。吸
取上述供试品溶液 10 μL 进样 , 重复 3次 , 得到
HPLC色谱分离图见图 1b 。根据对照品的保留时
间 , 参照文献[ 7] 中紫外吸收光谱图确定各峰的位
置 , 利用线性方程和各峰的峰面积积分值计算 4
种成分的质量分数(表 2)。
表 2　达乌里秦艽根部四种环烯醚萜苷类成分测定(n=3)
Tab.2　Contents of four active constituents in G.dahurica roots
采样点(海拔 m) w %落干酸 獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷 总量
青海省同仁县(2630 m) 2.271±0.033 0.724±0.021 6.409±0.303 0.278±0.011 9.682
青海省贵德县(3580 m) 3.089±0.030 1.144±0.015 9.297±0.269 0.536±0.012 14.066
青海省海晏县(3140 m) 1.212±0.023 0.944±0.037 7.731±0.248 0.784±0.015 10.671
青海省平安县(2610 m) 2.255±0.025 0.970±0.017 8.840±0.273 0.962±0.012 13.027
青海省结古镇(4410 m) 1.895±0.025 0.695±0.011 6.415±0.191 0.329±0.009 9.334
　　　　表中 w %=平均值±SD
　　测定结果中 , 4种成分中以龙胆苦苷量为最
高 , 平均值为 7.738%, 超过2005版药典中规定的
2%含量标准。此方法可用来评价达乌里秦艽药材
质量 , 可以更准确更有效地控制该药材的质量 。
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与同时期同属另一藏药麻花艽中相同 4种成
分的含量[ 7] 进行比较 , 二者均以龙胆苦苷的含量
为最高 , 其余3种成分含量略有差异 , 但四者之和
未显示出较大的差别。这表明二者在环烯醚萜苷
的次生代谢方面具相似性 , 将其同时列入 2005版
药典中秦艽类药材 , 且都以龙胆苦苷的含量作为
入药指标也是有科学依据的。
参考文献
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Gentiana.Beijing:Science Press.2001.174
[ 2] 　中华人民共和国药典 , 2005版(一部), 210
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[ 4] 　姬可平 , 张西玲 , 刘丽莎等.中国中药杂志 , 2003 ,
28(4):313
[ 5] 　倪　慧 , 波拉提·马卡比力 , 卿德刚等.中药材 ,
2004 , 27(4):500
[ 6] 　杨　婕 , 马　骥 , 周东星等.中草药 , 2006 , 37(2):
187
[ 7] 　孙　菁 , 陈桂琛 , 李玉林等.分析试验室 , 2005 ,
25(5):28
[ 8] 　林鹏程 , 冶兆辉 , 卢永昌等.中药材 , 2004 , 27(11):
819
Determination of four iridoid glycosides in a famous Tibetan medicine Gentiana dahurica Fischer by HPLC
SUN Jing
1 , XU Wen-hua1 ,2 , WANGYan-hua1 , 2 , HAN You-ji 1, 2 and CHEN Gui-chen＊1(1.Qinghai Key Laboratory
of Qinghai-Tibet Plateau Biological Resources , Northwest Institute of Plateau Biology , Chinese Academy of Sciences ,
Xining 810001;2.Graduate School of the Chinese Academy of Sciences , Beijing 100049), Fenxi Shiyanshi , 2008 ,
27(12):51 ～ 54
Abstract:A simple and reliable method for the simultaneous quantitative determination of four iridoid glycosids genti-
opicroside , swertiamarin , sweroside and loganic acid in a famous Tibetan medicine Gentiana dahurica Fischer by
HPLC was developed.Identification of four analytes was performed by on line post-column mass spectrum (APCI).
Comparison with another Tibetan medicine G.straminea in the same sampling time was also discussed.All the analy-
sis were performed on Eclipse XDB-C8(4.6 mm×150mm i.d., 5μm)at column temperature of 30 ℃with a good
baseline resolution and eluted with the solution of mobile phase A:5% acetonitrile(including 0.01 mol methanoic ac-
id)and mobile phase B:95% acetonitrile.The proportion of A and B changed from 100∶0 to 90∶10 in 0 ～ 15 min
and 90∶10 in 15 ～ 20min.The flow rate was 1.0 mL min.Good linear regression equations(r≥0.9990)within test
ranges and recoveries were obtained.The analytical method was simple , accurate , and could be used for the quantita-
tive determination and quality control of this plant medicine G.dahurica.
Keywords:Tibetan medicine;Gentiana dahurica Fischer;Iridoid glycosides;HPLC
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