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藏药婆婆纳药材薄层鉴别方法学研究



全 文 :收稿日期:2012-04-17 接受日期:2012-08-13
* 通讯作者 Tel:86-23-89029056 E-mail:rongpingyang18@ yahoo. com.
cn。
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012,24:70-73
文章编号:1001-6880(2012)Suppl-0070-04
藏药婆婆纳药材薄层鉴别方法学研究
王云红1,张小梅1,林 芳2,胡 荣1,严倩茹2,杨荣平1*
1重庆市中药研究院重庆市中药资源学重点实验室,重庆 400065;2 成都中医药大学,成都 611137
摘 要:本文建立了藏药婆婆纳药材的薄层鉴别方法。采用单因素试验方法,对影响婆婆纳对照药材的薄层色
谱因素进行系统考察,筛选出最佳的薄层色谱条件。该薄层鉴别条件吸附剂:硅胶 G薄层板;展开剂:环己烷-丙
酮(6∶ 4) ;显色剂:10%硫酸乙醇溶液;显色条件:110 ℃烘箱中加热至斑点显色清晰,日光下检视,所得的薄层色
谱,斑点清晰,分离度好。该方法分离度高,重现性好,简便,可用于婆婆纳的质量控制。
关键词:藏药;婆婆纳;薄层鉴别;质量控制
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
The research of identify Veronica cciliata Fiseh of Tibetan with TLC
WANG Yun-hong1,ZHANG Xiao-mei1,LIU Fang 2,HU Rong1,YANG Qian-ru2,YANG Rong-ping1*
1Chongqing academy of Chinese Traditional Materia Medica,Chongqing Key Laboratory of Traditional Chinese
Medicine Resource,Chongqing 400065,China ;2Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,China
Abstract:To establish a method for indentify Veronica ciliata Fiseh of Tibetan with TLC. The single-factor test method
was used in investigating TLC factors which could influence Veronica ciliata Fiseh and screeing the best TLC conditions
through tests. Using liquid consisted of cyclohexane-acetone (6 ∶ 4)as developing solvent,separated on silica gel thin
layer chromatography plate using CMC Na as adhesion and 10% sulfuric acid and ethanol solution as the color developing
agent,heated under 110 ℃ until the spots became clear. The identified characteristics of Veronica ciliata Fiseh were dis-
tinct and the spots were clear. The method is simple and has a high resolution,and good reproducibility for the quality
control of Veronica ciliata Fiseh.
Key words:Tibetan medicine;Veronica ciliata Fiseh;TLC;quality control
婆婆纳是常用的藏药之一,藏药名冬那端赤,为
玄参科婆婆纳属植物长果婆婆纳 Veronica ciliata
Fiseh的干燥全草。具有清热,愈疮,生肌,止血的功
效,主要用于治疗疮疖,创伤,炎症。婆婆纳被收载
在 1995 年版《藏药部颁》中,但由于婆婆纳的标准
仅有性状描述,没有鉴别,不能很好的控制婆婆纳的
质量。为能有效控制婆婆纳药材的质量,本研究首
次对婆婆纳的薄层鉴别进行了系统研究,建立了婆
婆纳对照药材薄层鉴别的方法,为婆婆纳药材质量
控制提供科学依据。
近年来,婆婆纳的研究较少,其有效成分尚不清
楚,特征成分不明确,选择单一成分的对照品进行薄
层鉴别没有依据。因而,本研究通过建立对照药材
的方法对婆婆纳药材进行薄层定性研究。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
BP121S电子天平(万分之一,北京赛多利斯科
学仪器有限公司) ;BUG25-12 超声波清洗机(220W,
50KHZ,必能信超声(上海)有限公司) ;数显恒温水
浴锅(上海梅香仪器有限公司) ;高效硅胶 G 薄层
板,规格:100 × 100 mm、100 × 200 mm,厚度:0. 20 ~
0. 25 mm,批号:20101102,青岛海洋化工分厂;薄层
色谱展开缸(双槽,规格:100 × 200 mm、200 × 200
mm,上海信谊仪器厂)。
1. 2 试药及药材
所用试剂均为分析纯(重庆川东(集团)有限公
司化学试剂厂) ;
婆婆纳对照药材为西藏自治区食品药品检验所
提供的基地生产对口药材;
婆婆纳药材样品为西藏自治区食品药品检验所
提供的不同批次的样品。
2 方法与结果
2. 1 婆婆纳对照药材薄层条件的建立
2. 1. 1 提取溶媒的考察
取婆婆纳对照药材 3 g(5 份) ,精密称定,置于
锥形瓶中,分别加乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、95%乙
醇、甲醇 40 mL,超声处理 30 min,滤过,滤液蒸干,
残渣加相应的提取液 2 mL 使溶解,作为供试品溶
液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录
IV B)试验,分别吸取供试品溶液 5 μL,点于同一硅
胶 G薄层板上,以环己烷-丙酮(7 ︰ 3)为展开剂,
展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,在 110
℃加热至斑点显色清晰,并置于日光下检视。结果
表明:以甲醇为溶媒提取的供试品斑点较少,反映药
材的信息量少;95%乙醇为溶媒提取的样品斑点较
乙醚等提取样品的斑点少,且 95%乙醇提取的样品
粘度较大,点样过程有困难;乙醚、乙酸乙酯、三氯甲
烷为溶媒提取的样品斑点信息相似,但乙酸乙酯相
对其他两种有机试剂毒性较小。且乙酸乙酯提取的
样品展开后斑点较多,斑点清晰,分离度好,且乙酸
乙酯毒性较小,拟采用乙酸乙酯作为提取溶媒。
2. 1. 2 显色剂的考察
取 2. 1. 1 项下的 5 个供试品溶液,照薄层色谱
法试验,分别吸取供试品溶液 5 μL,点于同一硅胶
G薄层板上,以环己烷-丙酮(7 ︰ 3)为展开剂,三张
薄层板同时展开,取出,晾干,分别喷以 10%硫酸乙
醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、磷钼酸溶液,在 110 ℃
加热至斑点显色清晰,于日光下检视,薄层色谱图见
图 1。结果表明:在日光下检视,10%硫酸乙醇溶液
显色后斑点较清晰,颜色鲜明;5%香草醛硫酸溶液
显色后斑点颜色虽然鲜明,但是显示出的斑点较少;
磷钼酸溶液显色后斑点虽然清晰,但是不能反映出
斑点的颜色。因而,采用 10%硫酸乙醇溶液为显色
剂。
图 1 婆婆纳对照药材薄层鉴别显色剂的考察
Fig. 1 chromogenic reagents test of Veronica cciliata Fiseh
2. 1. 3 提取方法的考察
取婆婆纳对照药材 3 g(2 份) ,精密称定,置于
锥形瓶中,加乙酸乙酯 40 mL,分别超声处理 30 分
钟和加热回流处理 30 分钟,滤过,滤液蒸干,残渣各
加乙酸乙酯 2 mL使溶解,作为供试品溶液。照薄层
色谱法试验,取不同提取方法提取的供试品溶液 5
μL,点于同一硅胶 G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯
(7 ︰ 3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸
乙醇溶液,置 110 ℃烘箱中显色至斑点清晰,于日光
下检视。结果超声和加热回流两种处理方法的结果
差别不大。因此,选用操作简便的超声处理为供试
品的提取方法。
2. 1. 4 提取时间的考察
取婆婆纳对照药材 3 g,精密称定,置于锥形瓶
内,加乙酸乙酯 40 mL,分别超声处理 10、20、30、40
min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙酸乙酯 2 mL使溶解,
作为供试品溶液。照薄层色谱法试验,取不同提取
时间提取的供试品溶液 5 μL,点于同一硅胶 G薄层
板上,以环己烷-乙酸乙酯(7∶ 3)为展开剂,展开,取
出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,置 110 ℃烘箱中
显色至斑点清晰,于日光下检视。结果超声处理 30
和 40 min的样品斑点较超声处理 10 和 20 min的样
品斑点多,且较之更清晰。因而,选用超声处理 30
min为样品提取的时间。
2. 1. 5 展开剂选择
对照药材溶液的制备:取本品粉末 3 g,精密称
定,置于锥形瓶内,加乙酸乙酯 40 mL,分别超声处
理 30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙酸乙酯 2 mL使
17Vol. 24 王云红等:藏药婆婆纳药材薄层鉴别方法学研究
溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取
对照药材溶液 6 μL,点于硅胶 G板上,分别以(1)环
己烷-丙酮(6∶ 4) ,(2)环己烷-乙酸乙酯(7∶ 3) ,为展
开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,置
110 ℃烘箱中加热至斑点显色清晰,日光下检视,结
果:展开剂(1) (2)所展开的对照药材色谱斑点分离
度均较好,但展开剂(1)展开后的供试品分离效果
较好,斑点清晰,颜色鲜艳,因而确定环己烷-丙酮(6
∶ 4)为展开剂。
2. 1. 6 点样量考察
吸取 2. 1. 5 项下制备的对照药材溶液各 4、6、
8、10、12 μL分别点于同一硅胶 G薄层板上,以环己
烷-丙酮(6 ∶ 4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以
10%硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰,结果:点
样量为 6 μL时斑点已清晰。因此,确定对照药材溶
液点样量为 6 μL。
2. 1. 7 方法耐用性实验
预平衡和预饱和方式的考察:照薄层色谱法,吸
取 2. 1. 5 项下制备的对照药材溶液 6 μL,点于硅胶
G薄层板上,以环己烷-丙酮(6∶ 4)为展开剂,不进行
预平衡和预饱和操作,展开,取出,晾干,喷以 10%
硫酸乙醇溶液,置 110 ℃烘箱中显色至斑点清晰,于
日光下检视。结果未经预平衡和预饱和操作得到的
薄层色谱图分离度较好,斑点清晰,无明显的边缘效
应。因此,本薄层鉴别不需预平衡和预饱和。
展开温度和湿度的考察:照薄层色谱法,吸取上
述已制备的对照药材溶液 6 μL,点于硅胶 G薄层板
上,以环己烷-丙酮(6 ∶ 4)为展开剂,在湿度为 77%
时分别于 20、40 ℃环境下及在温度为 20 ℃时分别
于湿度为 77%、32%环境下展开,取出,晾干,喷以
10%硫酸乙醇溶液,置 110 ℃烘箱中显色至斑点清
晰,于日光下检视,结果,温度、湿度对分离效果无显
著影响。因此认为温度和湿度对其没有影响,在通
常条件下操作即可。
展开距离的考察:照薄层色谱法,吸取上述已制
备的对照药材溶液 6 μL,点于硅胶 G 薄层板上,以
环己烷-丙酮(6∶ 4)为展开剂,展开,展开距离分别为
8 cm和 11 cm,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,
置 110 ℃烘箱中显色至斑点清晰,于日光下检视。
结果:展开距离为 8 cm 时对照药材已能较好的分
离,但展距为 11 cm时效果更好。因此,确定展距在
11 cm左右。
不同薄层板的考察:照薄层色谱法,吸取上述已
制备的对照药材溶液 6 μL,分别点于预制硅胶 G薄
层板(青岛海洋化工厂分厂)和实验室自制硅胶 G
薄层板上,以环己烷-丙酮(6∶ 4)为展开剂,展开,取
出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,置 110 ℃烘箱中
显色至斑点清晰,于日光下检视。结果:青岛海洋化
工厂分厂生产的预制板和本实验自制的硅胶 G 薄
层板,对供试品溶液均能起到很好的分离效果,说明
该鉴别方法的耐用性好,但相比之下,预制板分离效
果更好。
2. 1. 8 对照药材薄层色谱图
分别吸取上述已制备的对照药材溶液 6 μL,点
于同一硅胶 G薄层板上,按照拟定的薄层鉴别的方
法,展开,晾干,检视。薄层色谱图见图 2。结果,婆
婆纳对照药材可被分离出 7 个清晰的斑点,做为特
征斑点。
图 2 婆婆纳对照药材薄层色谱图
Fig. 2 TLC of Veronica cciliata Fiseh
2. 2 婆婆纳药材的薄层鉴别
2. 2. 1 婆婆纳供试品溶液的制备
取本品粉末 3 g,加乙酸乙酯 40 mL,超声处理
30 分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙酸乙酯 2 mL 使
溶解,作为供试品溶液。
2. 2. 2 婆婆纳对照药材的制备
取婆婆纳对照药材 3 g,加乙酸乙酯 40 mL,超
声处理 30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙酸乙酯 2
mL使溶解,作为对照药材溶液。
2. 2. 3 薄层色谱条件及结果
色谱条件:吸附剂:硅胶 G 薄层板;展开剂:环
己烷-丙酮(6∶ 4) ;显色剂:10%硫酸乙醇溶液;显色
条件:110 ℃烘箱中加热至斑点显色清晰,日光下检
视;点样量:6 μL。
样品薄层色谱图:按照 2. 2. 3(1)项下的色谱条
件,将 10 批样品的供试品溶液及对照药材溶液点于
同一薄层板上,展开,晾干,显色,薄层色谱图见图
3。结果:10 批样品在与对照药材色谱特征斑点相
应的位置上均显相同颜色的斑点。结果表明:建立
27 天然产物研究与开发 Vol. 24
的方法分离度高,重现性好,简便,可用于婆婆纳的
质量控制。
1-婆婆纳对照药材 2-第一批样品 3-第二批样品 4-第三批样
品 5-第四批样品 6-第五批样品 7-第六批样品 8-第七批样
品 9-第八批样品 10-第九批样品 11-第十批样品
图 3 10 批婆婆纳药材薄层色谱图
Fig. 3 TLC of Veronica cciliata Fiseh
3 讨论
目前,对婆婆纳的研究较少,其有效部位尚不明
确,在以后的工作中将进一步研究婆婆纳的有效部
位,为其质量控制提供依据。本研究以对照药材为
对照,对照药材主要优点是斑点多,反应的信息多。
藏药现行标准为《藏药部颁》1995 年版,很多药
材和制剂,没有“鉴别”项,或者“鉴别”项下没有薄
层鉴别,仅有理化鉴别或显微鉴别,不能更好的控制
的质量。因而,呼吁有关部门应重视民族药质量标
准的提高,使民族药这一非物质文化能得以长久流
传。
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