全 文 ：407
刘百萍，马 骥* ，张晓静，张 昊，朱贞贞
(1.陕西师范大学生命科学学院，陕西西安 710062;
2.教育部药用植物资源及天然药物化学重点实验室，陕西西安 710062)
摘 要:目的:优化回流萃取、RP－HPLC检测荚果蕨中槲皮素、山奈酚含量的方法，比较不同采收时期荚果蕨营养叶中
总黄酮含量，得出荚果蕨营养叶的最佳采收时期。方法:色谱条件:色谱柱Shimadzu C18(250 × 4.6mm，5μm) ;流动相为
甲醇(A)－0.2%磷酸水(B) ;采用线性梯度洗脱;流速为1.0mL /min;柱温为30℃;检测波长为360nm;进样量20μL。结
果:槲皮素在0.18～4.5μg(r2 = 0.9992) ，山奈酚在0.17～4.25μg(r2 = 0.9994) 范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
加样回收率分别为 99.6%、99.45%，RSD值为 1.90%，0.91%(n = 6)。结论:该方法操作简便，结果准确，重现性好，可
用于荚果蕨的质量评价。9 月份采收的荚果蕨营养叶中总黄酮含量最高，实验结果可用于指导合理采收开发荚果蕨
资源。
关键词:荚果蕨，总黄酮，不同采收时期，高效液相色谱法
Determination of total flavonoids in Matteuccia struthiopteris(L.)
Todaro foliage leaves of different harvest time
LIU Bai－ping，MA Ji* ，ZHANG Xiao－jing，ZHANG Hao，ZHU Zhen－zhen
(1.Life Science College，Shaanxi Normal University，Xi’an 710062，China;2.Key Laboratory of Ministry of
Education for Medicinal Plant Resource and Natural Pharmaceutical Chemistry，Xi’an 710062，China)
Abstract:Using the methods of reflux extraction and detection of quercetin and kaempferol in Matteuccia
struthiopteris(L.)Todaro by RP－ HPLC，the content of flavonoid in different harvest periods and evaluated the
optimal harvest time were compared.The separation of the targets was performed on Shimadzu C18(250mm ×
4.6mm，5μm)column with the column temperature at 30℃，by gradient elution using methanol－ H2O with 0.2%
phosphate acid as the mobile phase at the flow rate of 1.0mL/min，the detective wavelength was set at 360nm.The
linear range of quercetin was 0.18～4.5μg(r2 = 0.9992)and kaempferol was 0.17～4.25μg(r2 = 0.9994) ，with average
recoveries of 99.6%(RSD 1.90%) ，99.45%(RSD 0.91%).The method was simple，accurate and reproducible，can
be used for quality control of quercetin and kaempfero in Matteuccia struthiopteris(L.).The contents of flavonoid
collected at september was the best. These can guide the reasonable collecting and make the best use of
Matteuccia struthiopteris(L.)resource.
Key words:Matteuccia struthiopteris(L.)Todaro;flavonoid;different harvest time;HPLC
中图分类号:TS201.1 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2011)07－0407－03
收稿日期:2010－12－08 * 通讯联系人
作者简介:刘百萍(1985－) ，女，硕士研究生，研究方向:药用植物资源
研究。
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划(2006BAI06A12－04)。
荚果蕨(Matteuccia struthiopteris(L.)Todaro) 俗名
广东 菜、黄 瓜 香、荚 果 蕨 贯 众，是 球 子 蕨 科
(Onocleaceae) 荚果蕨属的植物。我国黑龙江、吉林、
河北、河南、陕西及西藏等地有广泛分布，多生长于
山谷林下及河岸湿地，海拔 80～3000m间。荚果蕨是
著名的山野菜，其幼叶营养可口，具有鲜黄瓜的清
香，在东北地区常常作为出口野菜。荚果蕨具有药
用价值，在秦巴山区应用广泛，是商品贯众的一
种［1－2］。其根状茎及叶柄残基可入药，有清热解毒、杀
虫、止血、预防流感的功效。由于荚果蕨植株形状优
美，也可作为室内盆栽或用作室外观赏植物。黄酮
类化合物是一类在植物中含量丰富的植物次生代谢
产物，杨岚等人研究报道，荚果蕨中含有芹菜素、荚
果蕨素、去甲氧基荚果蕨素、荚果蕨黄素等黄酮类化
合物［3－4］; 李娜等研究表明，槲皮素是球子蕨科共有
成分［5］; 洪叶岚等的研究表明，荚果蕨营养叶中含山
奈酚、槲皮素［6］。黄酮类化合物具有抗衰老、抗癌、抑
菌、保健等功效。槲皮素有很强的抗氧化作用，可透
过血脑屏障，并对人胶质母细胞瘤 U251 细胞有明显
的抑制增殖及诱导凋亡作用［7］; 山奈酚能抑制与儿童
髓母细胞瘤生长和转移有关的肝细胞生长因子及其
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2011.07.024
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受体酪氨酸蛋白激酶［8］，抑制人胃癌细胞 MGC2803
的增殖并诱导其凋亡［9］。本文参照洪叶岚等的方
法［6］，对荚果蕨中槲皮素、山奈酚进行了提取及检测
条件的优化，4 月到 9 月是荚果蕨营养叶的生长期，
对不同采收时期荚果蕨营养叶中的槲皮素、山奈酚
及总黄酮含量的变化规律进行了研究，为合理开发
利用荚果蕨提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
槲皮素、山柰酚对照品 中国药品生物制品检
定所，含量纯度分别为 97.3%、95.9%，批号分别为
110861－ 200606、100081 － 200406; 样品 荚果蕨于
2009 年 4 月至 9 月采自陕西省安康市旬阳坝林场，
经陕西师范大学生命科学学院肖娅萍教授、马骥副
教授鉴定为荚果蕨，标本现存于陕西师范大学生命
科学学院植物学标本室; 甲醇 色谱纯; 水 超纯
水;其余试剂 均为分析纯。
Shimadzu LC－2010 高效液相色谱仪 日本岛津
公司;HH－6B 数显恒温水浴锅 国华电器有限公
司;RE－52AA旋转蒸发器、SHB－Ⅲ循环水式多用真
空泵 上海亚荣生化仪器厂;KQ－300DE 型数控超
声波清洗器 昆山超声仪器有限公司;DAD 检测器，
AT2201 电子分析天平(d = 0.1mg)。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱:Shimadzu C18 (250 ×
4.6mm，5μm) ;流动相为甲醇(A)－0.2%磷酸水(B) ;
采用线性梯度洗脱(0→30min，甲醇 40% →65%，
0.2%磷酸水 60%→35%) ; 流速为1.0mL /min; 柱温
为 30℃;检测波长为360nm;进样量为20μL，见图 1。
图 1 槲皮素、山奈酚对照品(A) 和样品(B) 的HPLC图
注:1－槲皮素;2－山奈酚。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照
品、山奈酚对照品适量，加甲醇溶解，配制成槲皮素
浓度为 0.18mg /mL、山奈酚浓度为 0.17mg /mL 的对
照品溶液，于 4℃冰箱避光保存。
1.2.3 样品溶液的制备 材料清洗、阴干、粉碎、过
65 目筛，精密称取待测荚果蕨粉末 1.000g，置于
50mL圆底烧瓶中，加 30mL 90%乙醇，于 80℃恒温水
浴锅中回流提取 1h，取出后加入 2mL 盐酸回流酸解
1h。取出冷却至室温，抽滤，滤液减压蒸干，用甲醇
定容至 10mL容量瓶，摇匀，用微孔滤膜(0.22μm) 过
滤，待测。
1.2.4 提取溶剂和提取方法的优化 根据槲皮素、
山奈酚的理化性质，结合相关文献［10，12］，选用了不同
浓度的甲醇(100%、90%、80%、70%、60%)、乙醇
(100%、95%、90%、80%、70%、60%) 为提取溶剂，
溶剂量分别为 10、15、20、25、30mL，回流时间 1、1.5、
2、2.5、3h以及提取温度 70、80、90℃进行比较提取，
结果显示，90%乙醇 80℃恒温水浴回流提取 2h，槲皮
素、山奈酚的提取率高，效果最好。
1.2.5 检测条件的优化 比较了用甲醇－水、甲醇－
0.2%磷酸水、甲醇－0.4%磷酸水作为流动相，进行等
度、梯度洗脱，结果显示，用等度洗脱时 2 种物质的
分离效果不好，流动相为甲醇(A)－ 0.2% 磷酸水
(B) ;采用线性梯度洗脱(0→30min，甲醇 40% →
65%，0.2%磷酸水 60% →35%) 的分离效果好，峰
形好。
1.2.6 总黄酮含量的计算 总黄酮含量的计算参照
05 版药典中银杏叶提取物总黄酮甙含量计算方法［13］
计算。
总黄酮甙含量 =( 槲皮素含量+山奈酚含量)× 2.51
2 结果与讨论
2.1 线性关系考察
精密吸取槲皮素对照品溶液 1、5、10、15、20、
25μL，在 1.2.1 的色谱条件下分别进样，记录其峰面
积，以进样量为横坐标(X) ，峰面积为纵坐标(Y) ，得
线性回归方程:Y = 581779X + 175532(R2 = 0.9992) ，
线性范围:0.18～4.5μg。
精密吸取山奈酚对照品溶液 1、5、10、15、20、
25μL进样，记录其峰面积，以进样量为横坐标(X) ，
峰面积为纵坐标(Y) ，得回归方程Y = 684356X +
157868(R2 = 0.9994) ，线性范围:0.17～4.25μg。
2.2 精密度考察
取上述对照品溶液，重复测定 6 次，每次进样
20μL。分别测得槲皮素的峰面积为 14561876、
14544310、14779626、14644654、14542950、14852327;
山奈酚的峰面积为 25159070、25352290、25680726、
25359558、25048931、25443491。计算槲皮素，山奈酚
峰面积的 RSD 值，结果为槲皮素 0.91%、山奈酚
0.87%(n = 6) ，精密度良好。
2.3 重复性考察
取同一份样品 6 份，按照 1.2.3 中方法制备供试
品溶液，精密吸取 20μL进样，测定槲皮素、山奈酚峰
面积，计算含量。得槲皮素的含量分别为 1.139、
1.144、1.122、1.147、1.123、1.135mg /g; 山奈酚的含量
分别为 2.427、2.513、2.438、2.439、2.507、2.454mg /g。
计算 2 种成分含量的 RSD 值分别为 0.93%、1.52%
(n = 6) ，表明方法重复性良好。
2.4 稳定性考察
取同一样品溶液，按照 1.2.3 中方法制备供试品
溶液，按上述色谱条件，分别在提取后的 0、6、12、18、
24、36、48h进行检测，记录槲皮素、山奈酚峰面积，得
409
槲皮素的峰面积分别为 754799、732009、756538、
743277、732975、721453、740996; 山奈酚的峰面积为
1997434、1998332、 1945093、 1924807、 1989091、
1944003、1931907。计算其 RSD 值，结果分别为
1.71%、1.64%(n = 7) ，表明该样品溶液在48h 内稳
定性良好。
2.5 加样回收率实验
精密称取 1.000g 已知含量的样品 6 份，分别加
入适量对照品溶液，按上述供试品的制备方法制成
供试品溶液，进样测定，计算回收率及 RSD 值，结果
见表 1、表 2。
表 1 荚果蕨中槲皮素的加样回收率
测定
成分
样品
含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1.233 0.360 1.566 98.3
1.230 0.360 1.573 98.9
槲皮素
1.229 0.360 1.908 102.1 99.6 1.90
1.231 0.360 1.572 98.8
1.230 0.360 1.593 100.2
1.228 0.360 1.577 99.3
表 2 荚果蕨中山奈酚的加样回收率
测定
成分
样品
含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
2.760 0.340 3.125 100.8
2.762 0.340 3.068 98.9
山奈酚
2.762 0.340 3.062 98.7 99.45 0.91
2.759 0.340 3.080 99.4
2.764 0.340 3.060 98.6
2.761 0.340 3.110 100.3
2.6 样品测定
按照 1.2.3 所述方法分别对 9 月份采集的荚果蕨
样品的不同部位及不同采收期的荚果蕨营养叶样品
进行制备，按 1.2.1 所述色谱条件对样品中槲皮素、
山奈酚进行含量测定，结果见表 3 及图 2。
表 3 荚果蕨不同部位中槲皮素、山奈酚的测定结果(n = 3)
测定部位
槲皮素
含量
(%)
槲皮素
RSD
(%)
山奈酚
含量
(%)
山奈酚
RSD
(%)
总黄酮
含量
(%)
营养叶 0.120 0.98 0.276 0.95 0.99
孢子叶 — — — — —
根状茎 — — 0.012 1.77 0.03
图 2 不同采收时期荚果蕨营养叶中
槲皮素、山奈酚的测定结果
2.7 总黄酮含量
根据 1.2.6中总黄酮甙含量计算方法，得出不同采
收时期荚果蕨营养叶中总黄酮的含量，结果见图 3。
图 3 不同采收时期荚果蕨营养叶中总黄酮的含量
3 结论
在 9 月份后期采收的荚果蕨营养叶中总黄酮含
量最高，此时孢子叶的孢子已生长成熟，保证了荚果
蕨的繁殖能力。荚果蕨是多年生草本植物，根状茎
是其营养繁殖的根本保证，采收其营养叶提取黄酮
类化合物，对荚果蕨资源的保护非常有利。本实验
中优化的反相高效液相色谱测定法操作简单，结果
可靠、准确，可为荚果蕨中黄酮类化合物的进一步研
究开发提供依据。
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