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蒙药鹅绒藤HPLC指纹图谱研究



全 文 :43
第 1 5 卷 第 8 期
2013 年 8 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 15 No. 8
Aug .,2013
蒙药鹅绒藤为萝藦科植物鹅绒藤Cynanchum
chinense R.Br.的干燥全草,蒙药名哲乐特-特木
根-呼呼。药用全草,味苦,性凉。清“协日”,止
泻[1]。现代研究表明鹅绒藤有多种药理活性[2],但
目前对鹅绒藤化学成分的研究较少,有效成分不
明了。为了对鹅绒藤药材进行整体的质量研究,
本文采用高相液相色谱法,研制了蒙药鹅绒藤药
材的指纹图谱,为鹅绒藤药材鉴定以及质量标准
的建立积累资料。
1 仪器与材料
Lc-20AT高效液相色谱仪,KQ-250E型超声波
清洗器(昆山市超声仪器有限公司);山柰苷(成都
曼斯特生物科技有限公司,A0442-20 mg,含量≥
98%),乙腈(Fisher 色谱纯),娃哈哈纯净水(杭州
娃哈哈集团),乙醇、磷酸(分析醇,天津科密欧公
司),甲醇(色谱纯,天津广成公司)。材料经山东中
医药大学周凤琴教授鉴定,均为萝藦科植物鹅绒藤
Cynanchum chinense R.Br.的干燥全株,样品来源见
表1。
表1 样品来源
样品
编号 产地
样品
编号 产地
1 东营河口陈庄 6 无棣大山镇碣石山枣林
2 东营河口南 7 济南千佛山北麓
3 东营汽车站西 8 内蒙赤峰
4 东营河口五号桩 9 济南东
5 东营河口华联盐池 10 济南南部
2 方法与结果
2.1 标准品溶液的制备
精密称取山柰苷标准品适量,加50%甲醇制成
每毫升含0.1003 mg的标准品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
精密称定粉碎过40目筛的鹅绒藤样品1 g,加
入50%甲醇50 mL超声1 h,过滤,滤液经微孔滤膜
(0.45 μm)滤过,即得供试品溶液。
2.3 色谱条件
XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流
动相 :0.2%磷酸水溶液(A):乙腈(B),梯度洗脱 :B
蒙药鹅绒藤HPLC指纹图谱研究
马艳,周凤琴
(山东中医药大学药学院,山东 济南 250355)
摘 要:目的 :建立蒙药鹅绒藤的高效液相色谱指纹图谱,为鹅绒藤药材鉴定以及质量标准的建立积累资料。
方法 :采用HPLC法,Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长345
nm,流速为0.8 mL/min,分析10批鹅绒藤药材的HPLC指纹图谱。结果 :在选定的色谱条件下,通过相似度分析软
件确定了由11个色谱峰构成的鹅绒藤的高效液相指纹图谱。结论 :该分析方法稳定可靠,为蒙药鹅绒藤的质量评
价与控制提供了理论依据。
关键词:鹅绒藤 ;高效液相色谱 ;指纹图谱
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2013) 08- 0043- 02
收稿日期:2013-01-05
基金项目:国家海洋局资助项目(2001BA701A62-08)
作者简介:马艳(1977-),女,山东日照人,讲师,博士,研究方向 :中药质量控制与资源开发。
通讯作者:周凤琴(1951-),女,山东临沂人,教授,博士研究生导师,研究方向 :中药质量控制与资源开发。E-mail :zfqsdzy@yahoo.com.cn。
HPLC Fingerprint of Mongolian Medicine Cynanchum Chinense R.Br.
MA Yan,ZHOU Fengqin
(College of Pharmacy,Shandong University of Traditional Chinese
Medicine,Jinan 250355,Shandong,China)
Abstract :Objective :To established the fingerprint of the Mongolian Medicine Cynanchum chinense
R.Br.by HPLC. Methods :HPLC with Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)column was used,taking
methanol-0.2% phosphoric acid as a mobile phase and detection wavelength was set at 345 nm. Results :
11 peaks were separated on HPLC fingerprint of the Cynanchum chinense R.Br. Conclusion :This method
is simple,accurate with good reproducibility,and can be used specifically for the quality control of the
Mongolian Medicine Cynanchum chinense R.Br..
Key words :Cynanchum chinense R.Br. ;HPLC spectra ;fingerprint
DOI:10.13194/j.jlunivtcm.2013.08.45.may.078
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 5 卷
相[体积(%)],0~6 min(8~10),6~10 min(10~20),
10~15 min(20~20),15~25 min(20~21),25~52 min
(21~46);流速 :0.8 mL/min ;检测波长 :345 nm ;进
样量 :20 μL ;柱温 :30 ℃。
2.4 方法学考察
2.4.1 空白实验
吸取50%甲醇20 μL注入色谱仪,记录色谱
图,结果表明溶剂对样品指纹图谱中的共有峰检出
无干扰。
2.4.2 精密度考察
取鹅绒藤样品同一份供试品溶液,连续进样
6次,每次20 μL,2.3项下色谱条件洗脱,记录色
谱图。经测定,各共有峰的相对保留时间的RSD
值为(0.05~0.88)%,各共有峰的相对峰面积的
RSD值为(1.03~2.75)%,表明仪器的精密度良
好。
2.4.3 稳定性考察
取同一份鹅绒藤样品供试溶液,分别在0、2、8、
12、24、48 h进样,按2.3项下色谱条件洗脱,记录色谱
图。经测定,各共有峰的相对保留时间的RSD值为
(0.05~0.56)%,各共有峰的相对峰面积的RSD值为
(0.28~2.69)%,说明供试品溶液至少在24 h内稳定。
2.4.4 重现性考察
取同一样品按2.2项下方法制成供试品溶液6
份,依次进样,按2.3项下色谱条件洗脱,记录色谱
图。经测定,各共有峰的相对保留时间的RSD值为
(0.06~0.66)%,各共有峰的相对峰面积的RSD值为
(0.71~2.69)%,表明重现性良好。
2.5 鹅绒藤HPLC指纹图谱的建立
将10批鹅绒藤样品按2.2项下方法制备成供试
品溶液,按2.3项下色谱条件洗脱,得HPLC色谱图
(图1)。将图谱用《中药色谱指纹图谱相似度评价
系统2004A版》软件进行共有峰匹配,得到标准指
纹图谱(图2),其中有11个谱峰可以作为鹅绒藤指
纹图谱的共有特征峰。
2.6 相似度评价
将10批鹅绒藤提取物指纹图谱数据导入《中药
色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行
各指纹图谱与对照指纹图谱的相似度比较。由相
似度比较结果可知,10批鹅绒藤药材的HPLC指纹
图谱的相似度均大于0.95,说明这10批样品质量相
对较稳定,符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术
要求(暂行)》2000版之规定,因此,所建立的鹅绒藤
HPLC对照指纹图谱合格,可作为鹅绒藤药材的标
准图谱。
图1 10批鹅绒藤的指纹图谱
6 s峰为标准品山柰苷峰
图2 鹅绒藤对照指纹图谱
3 讨 论
在本实验色谱条件下,可分离出20多个色谱
峰,色谱峰较多且密集,因山柰苷峰面积较大且相对
稳定,故选取山柰苷做参照峰,从10批鹅绒藤样品
的特征指纹峰图谱标定了11个共有特征峰,其中6
号峰为山柰苷的吸收峰。
由相似度比较结果可知,10批鹅绒藤药材的
HPLC指纹图谱的相似度均大于0.95,说明这10批
样品质量相对较稳定,符合《中药注射剂指纹图谱
研究的技术要求(暂行)》2000版之规定,因此,所建
立的鹅绒藤HPLC对照指纹图谱合格,可作为鹅绒
藤药材的标准图谱。◆
参考文献
[ 1 ] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第63 卷)
[ M ] .北京 :科学出版社,1977 :314.
[ 2 ] 马艳,周凤琴.民间药鹅绒藤化学成分药理及临床应用研究概
况[ J ] .中华中医药学刊,2010,28 ( 2 ) :289-291.
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