全 文 ：中药新药与临床药理 2011年 5月第 22卷第 3期
含量来改善戊四唑致痫小鼠惊厥行为。因此，推测
天然冰片的抗惊厥作用可能与兴奋性氨基酸与抑制
性氨基酸的平衡失调有关，其确切机制有待深入研
究，冰片结构修饰物的抗惊厥作用机制有待进一步
研究。
参考文献：
[1] Meldrum BS. Neurotransmission in epilepsy[J]. Epilepsia，1995，36
（Suppl 1）：S30．
[2] Janjua NA，Kabuto H，Mori A. Increased plasma glutamic acid in
genetic model of epilepsy[J]. Neurochem Res，1992，17（3）：293-
296．
[3] 廉德宜，徐江，范少先. 致痫病人脑脊液 γ-氨基丁酸含量的初步
报告[J]. 中华神经精神科杂志，1988，21（4）：224．
[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京：中国医
药科技出版社，2010：56.
[5] Racine RJ. Modification of seizure activity by electrical stimulation I
After -discharge threshlod [J]. Electroencephalogr Clin Neurophysiol，
1972，32（3）：269-279．
[6] 郑乃智，阮旭中，李震中，等． 青霉素、戊四氮、美解眠癫痫模
型的比较[J]． 临床脑电学杂志，1997，6（2）：101-102.
[7] 沈鼎烈. 临床癫痫学[M]. 上海：上海科学技术出版社，1993：28.
[8] 徐叔云，卞如濂，陈修． 药理实验方法学[M]. 第 3版. 北京：人
民卫生出版社，2002：871.
[9] 方永奇，邹衍衍，李羚，等. 芳香开窍药和祛痰药对中枢神经兴
奋性的影响[J]. 中医药研究，2002，18（3）：40-42.
[10] 薛丽，谌小维，樊宏孝，等. 冰片对长时连续作业大鼠前额叶皮
层单胺类递质水平的影响[J]. 第三军医大学学报，2006，28（18）：
l867-1869.
[11] Granger RE，Campbell EL，Jphnston GA. （+）-And（-）-borneol：
Efficacious positive modulators of GABA action at human recombi－
nant α1β2γ2L GABAA receptors[J]. Biochemical Pharmacology，2005
（69）：1101-1111．
[12] Park TJ，Park YS，Lee TJ，et al. Inhibition of acetylcholin-medi－
ated effects by borneol [J]. Biochemical Pharmacology， 2003， 65
（1）：83-90．
[13] 李伟荣，姚丽梅，宓穗卿，等. 冰片对大鼠下丘脑组胺、5-羟色
胺含量的影响[J]. 中药材，2004，27（12）：937-939．
[14] 李伟荣，姚丽悔，宓穗卿，等． 冰片开放血脑屏障作用与组胺和
5-羟色胺的关系[J]. 中国临床康复，2006，10（3）：167-169.
[15] 王涛. 冰片的结构修饰物及其药理活性研究[D]. 广州中医药大学
2008届博士学位论文，2008：63-64.
[16] 陈传兵. 冰片衍生物的合成及其药理活性的研究[D]. 广州中医药
大学 2010届博士学位论文，2010：93.
（编辑：梁进权）
收稿日期：2010-11-17
作者简介：张佩佩，女，硕士研究生，从事动脉粥样硬化防治研究。Email：zpp19851205@126.com。通讯作者：吴开云，教授，从事动脉粥样硬
的形成与发病机理的研究。Email：wu_ky@163.com。
基金项目：江苏省苏州市科技基础设施建设项目资助（SW0903）。
毛葡萄叶水提物降脂有效部位的筛选
张佩佩，朱占胜，谢梅林，黄金玉，朱春芳，王旻晨，吴开云（苏州大学医学部，江苏 苏州 215123）
摘要：目的 筛选毛葡萄叶水提物降脂的有效部位，为进一步分离提纯提供依据。方法 采用大孔树脂 AB-8
柱乙醇-水系统分离毛葡萄叶水提物，建立昆明种小鼠高脂模型，检测血清中的血脂成分和肝中总胆固醇
（TC）、甘油三酯（TG）以及通过苏丹红染色检测肝内脂质的变化。结果 毛葡萄叶水提物的水洗部分能明显降
低小鼠血清 TC、TG、低密度脂蛋白（LDL）和肝脏 TC、TG和丙二醛（MDA）水平，肝组织的苏丹红染色结果表
明毛葡萄叶水提物的水洗部分有明显降肝脂作用。结论 毛葡萄叶水提物水洗部分是降血脂的有效部位，其效
果与阳性药物非诺贝特相当。
关键词：高脂模型；毛葡萄叶；成分分离；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2011）03-0285-04
Screening of Active Components from Water Extracts of Vitis Quinquangularis Rehd Leaves for Hyperlipi－
demia
ZHANG Peipei， ZHU Zhansheng，XIE Meilin，Huang Jinyu， ZHU Chunfang，WANG Minchen，WU Kaiyun
（Medical college of Soochow University， Suzhou 215123 Jiangsu，China）
Abstract：Objective To screen the effective component from water extracts of Vitis quinquangularis Rehd（VQR）
leaves for hyperlipidemia，and to provide scientific basis for the further separation and purification of water extracts.
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2011 May，Vol．22 No．3
中药在治疗高脂血症中有着独特的优势，疗效
比较确切，副作用小，因此，从植物中研发具有降
脂作用的药物有着广阔的前景 [1-2]。毛葡萄是木质藤
本植物，据文献记载有调经活血、舒经活络等作
用 [3]。本实验室前期研究工作已经证实，毛葡萄叶
水提物具有抗血栓形成和降血脂的作用[4]。为了进一
步筛选毛葡萄叶水提物降脂作用的有效部位，本实
验通过大孔树脂 AB-8柱乙醇-水系统梯度洗脱毛葡
萄叶水提物，得到水洗脱、30 %乙醇洗脱、60 %乙
醇洗脱和 98 %乙醇洗脱部位。观测以上四种分离得
到的毛葡萄叶水提物对小鼠高脂模型的降血脂作用，
筛选出有效部位，为进一步提纯毛葡萄叶降脂作用
的有效成分提供依据。
1 材料与方法
1.1 药材与试剂 毛葡萄（Vitis quinquangularis Rehd）
叶，苏州大学生药研究所鉴定；总胆固醇（TC）、甘
油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）测定试剂盒，
南京建成生物工程研究所，批号：2009100007；超
氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和考马斯亮兰蛋
白测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号分
别是 2009100003，2009100011，2009100007；苏丹
红Ⅲ，苏州大学病理教研室提供；非诺贝特，法国
利博福尼有限公司，批号：76346。高脂饲料的配
制：称取猪油 150 g，电炉加热至液化，加入胆固醇
75 g至完全溶解，随后加入吐温-80和丙二醇各 150
mL，再将预先溶解的 3号胆盐溶液徐徐加入并按顺
时针方向匀速搅拌，使水相和油相充分混匀（注意不
能出现分层），冷却后可灌胃使用[5-9]。
1.2 动物 健康昆明种小鼠 70 只，体重（20±2）g，
清洁级，苏州大学医学部实验动物中心提供，使用
许可证号：SYXK（苏）2010-0037，生产许可证号：
SCXK（苏）2010-011。
1.3 毛葡萄叶水提物的制备及分离 称取干毛葡萄叶
500 g浸泡于水中，加热提取 3次，每次 2 h，合并
提取液，并通过减压蒸馏浓缩至 1000 mL，加入乙醇
至醇含量达 70 %，搅拌静置过夜后取其上清液，将
上清液通过大孔树脂 AB-8柱乙醇-水系统梯度洗脱，
分别得到水洗脱、30 %乙醇洗脱、60 %乙醇洗脱和
98 %乙醇洗脱部位。实验前将各组药液用蒸馏水配
成含生药量 1 g/mL。
1.4 实验分组及高脂模型的制作 取昆明种小鼠 70
只，雌雄各半，随机分为 7组，即正常组，模型组，
阳性药物组，30 %醇洗脱物组，60 %醇洗脱物组，
98 %醇洗脱物组和水洗脱物组，每组 10只。实验前
预防性给药 3 d，然后各给药组每日上午以 10 mL/kg
高脂食物灌胃，下午按生药量 5 g/kg灌胃给药 1次，
对照组只灌等量生理盐水，模型组只灌胃高脂食物，
非诺贝特剂量为 22 mg/kg。给药容积为 5 mL/kg，各
组连续给药 4 周。实验期间，小鼠自由饮水和进普
食。4 周后，小鼠眼眶取血，静置离心后吸取血清
1.5 mL，-20 ℃保存待测。取肝脏称重后，将部分肝
脏用生理盐水制成 10 %匀浆待测，剩余肝脏用 4 %
多聚甲醛固定用于冰冻切片，苏丹红染色。
1.5 血清 TC、TG、HDL-C的检测[10] 分别按照相
应试剂盒操作说明步骤进行。血清 TC的测定采用胆
固醇氧化酶-PAP法；血清 TG含量测定采用磷酸甘
油氧化酶-PAP法；血清 HDL-C 含量测定采用磷钨
酸镁（PTA-Mg2+）法；匀浆 SOD、MDA含量测定按试
剂盒方法操作。血浆 LDL-C按公式 LDL-C=TC-（TG/
2.2+HDL-C）计算。
1.6 苏丹红染色 将肝脏冰冻切片置于 PBS 中浸泡
Methods Alcohol-water system with AB-8 macropore absorbed resin column was used for the separation of active in－
gredients of water extracts of VQR leaves. Mice models of hyperlipidemia were established. Serum lipids levels，hep－
atic total cholesterol（TC） and triglyceride（TG） and hepatic Sudan red staining were measured. Results Water-
washed part of water extracts of VQR leaves remarkably decreased serum levels of TC，TG and low-density lipopro－
tein（LDL），and reduce hepatic contents of TC，TG and MDA. The results of hepatic Sudan red staining showed that
water-washed part of water extracts of VQR leaves had obvious effect on lowering hepatic lipid. Conclusion Water-
washed part of water extracts of VQR leaves is the active component for lowering blood lipid，and its effect is equal to
fenofibrate.
Keywords: Hyperlipidemia model；Vitis quinquangularis Rehd leaves；Component separation；Mice
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中药新药与临床药理 2011年 5月第 22卷第 3期
组 别
正常组
模型组
30 %醇洗脱物组
60 %醇洗脱物组
98 %醇洗脱物组
水洗脱物组
非诺贝特组
剂量/g·kg-1
-
-
5
5
5
5
0.022
SOD/U·mg-1
40.15±8.77*
32.70±2.29
37.47±8.43
42.10±6.84**
30.31±4.48
38.19±2.05*
39.52±2.07*
MDA/nmol·mg-1
1.73±0.43
1.80±1.95
1.52±1.09
1.86±0.67
1.92±0.46
1.05±0.25*
1.72±0.41组 别
正常组
模型组
30 %醇洗脱物组
60 %醇洗脱物组
98 %醇洗脱物组
水洗脱物组
非诺贝特组
剂量/g·kg-1
-
-
5
5
5
5
0.022
TC
2.92±0.43**
4.07±0.64
3.05±0.36**
4.14±0.51
4.36±0.93
2.49±0.52**
2.90±0.29**
TG
1.36±0.36**
1.82±0.26
0.73±0.16***
1.12±0.16***
1.09±0.37***
0.81±0.22***
0.83±0.23***
HDL-C
1.74±0.24**
1.37±0.14
1.08±0.16*
1.44±0.31
1.69±0.10
1.29±0.29
1.38±0.28
LDL-C
0.49±0.12**
2.01±0.47
1.59±0.39
1.89±0.37
1.87±0.58
0.79±0.41**
0.81±0.34**
组 别
正常组
模型组
30 %醇洗脱物组
60 %醇洗脱物组
98 %醇洗脱物组
水洗脱物组
非诺贝特组
剂量/g·kg-1
-
-
5
5
5
5
0.022
TC
6.66±2.48*
9.64±0.71
8.00±2.09*
8.61±2.14
8.57±0.41
7.68±0.41*
7.76±0.39*
TG
10.26±1.48*
11.58±1.96
11.52±3.56
11.59±1.81
12.35±1.82
10.34±1.67*
11.06±1.13*
表 2 对肝匀浆 TC、TG的作用（x± s，mg·g-1，n=10）
Table 2 TC and TG level of liver tissue in different groups
注：与模型组比较， *P < 0.05。
表 3 对肝匀浆SOD和 MDA的作用（x± s，n=10）
Table 3 SOD and MDA level of liver tissue in different groups
注：与模型组比较， *P < 0.05，**P < 0.01。
30 min后滴加苏丹红溶液染色 2 min，流水冲洗 30 s，
放入苏木精染液复染 1 min，自来水冲洗，缓冲甘油
封片后光镜下观察并拍照。每组随机取 4 张切片，
每张切片选取 10个视野，用 Sigma pro5.0 软件测光
密度值并取其平均值。
1.7 统计学方法 用 SPSS11.0 软件处理，计量资料
采用“均数±标准差”（x±s）表示，用单因素方差分析
（one way ANOVA）进行统计分析。
2 结果
2.1 血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C变化 模型组
血清 TC、TG、LDL-C 明显高于正常组，HDL-C 明
显低于正常组（P < 0.01），表明模型建立成功。毛葡
萄叶各分离组均有一定降血脂作用（P < 0.001~0.01），
尤以水洗脱组最明显，阳性药物非诺贝特的效果与
水洗脱组相近，见表 1。
表 1 对血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的作用（x±s，mmol·L-1，n=10）
Table 1 Serum lipid level in different groups
注：与模型组比较， *P < 0.05， **P < 0.01， ***P < 0.001。
2.2 肝匀浆 TC、TG、SOD和MDA的变化 与正常
组相比，模型组肝组织中 TC 和 TG 明显升高（P <
0.05）。水洗脱组和阳性药物组肝组织中的 TC和 TG
水平明显低于模型组（P < 0.05）；30 %醇洗脱物组亦
低于模型组（P < 0.05）；其余各给药组与模型组相比
TC和 TG无明显变化，见表 2。
模型组小鼠肝组织中 SOD明显降低于正常组（P
< 0.05）。水洗脱组、60 %醇洗脱物组和阳性药物组
SOD水平有显著升高（P < 0.05~0.01）。MDA仅有水
洗脱组有显著性降低（P < 0.05），见表 3。
2.3 各组肝组织苏丹红染色病理观察 正常组肝细胞
内仅有少量脂肪颗粒，模型组肝细胞内脂肪颗粒呈
弥漫性分布，有的区域可见较大的脂滴；水洗脱组
和阳性药物组肝细胞内脂滴明显减少，见图 1。光密
度测量结果表明，水洗脱组和阳性药物组与模型组
相比有显著性差异（P < 0.001），见图 2。
3 讨论
高脂血症是加速动脉粥样硬化的最危险因素之
一，也是诱发高血压、糖尿病等的一个重要危险因
素。高脂血症是形成脂肪肝的主要诱因，它既能使
体内的游离脂肪酸（FFA）增多直接损伤肝细胞，也能
促使 TG在肝脏中堆积，从而压迫肝血窦逐渐造成肝
小叶缺血、变形、坏死；还可以通过脂质的过氧化
引起脂肪肝[11]。因此，降低血脂是治疗脂肪肝的重要
方法。实验证明昆明小鼠对外源性胆固醇的吸收较
高，给予高胆固醇和高脂饮食（加入胆酸盐可增加胆
固醇的吸收，加入抗甲状腺药丙基硫氧嘧啶可进一
步诱发高脂血症）易于形成高脂血症脂肪肝[12]。因此，
为了观察毛葡萄叶水提物不同洗脱部位对高脂血症
性脂肪肝的治疗作用，我们选用昆明小鼠建立高脂
模型。
在前期实验证明毛葡萄叶水提物具有抗血栓形
成和降血脂作用[13]的基础上，进一步分离毛葡萄叶水
提物的成分，并观察其对昆明小鼠高脂模型的影响。
结果显示，毛葡萄叶水提物分离成分中的水洗脱部
位有明显降血脂作用，能明显降低血清 TC、TG、
LDL-C 水平，降低肝组织中 TC、TG 水平，提高肝
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2011 May，Vol．22 No．3
注：与模型组比较， ***P < 0.001。
图 2 各组肝组织苏丹红染色的病理观察定量分析（n=10）
A. 正常组，B. 模型组，C. 30 %醇洗脱物组，D. 60 %醇洗脱物组，
E. 水洗脱物组，G. 非诺贝特组
Figure 2 Quantitative analysis of pathological view of liver with
sudan Ⅲ staining in different groups
A B C D E F G
图 1 各组肝组织苏丹红染色病理观察（400×）
A. 模型组，B、C. 正常组，D. 非诺贝特组，E. 30 %醇洗脱物组，F. 60 %醇洗脱物组，G. 98 %醇洗脱物组，H. 水洗脱组。
Figure 1 Pathological view of liver with sudanⅢ staining in different groups（400×）
A B C D
E F G H
中 SOD水平，降低 MDA水平。毛葡萄叶水提物主要
含黄酮、酚类、多糖、氨基酸等，因多糖、酚类等
水溶性物质易洗脱，并且大孔吸附树脂能从极稀水
溶液中富集微量亲水性酚类衍生物，故经过大孔树
脂 AB-8 柱乙醇-水系统对毛葡萄叶水提物的分离，
得到的水洗脱物部分可能含有多糖和酚类物质，因
此我们进一步推测毛葡萄水提物的降脂作用可能与
其所含的多糖、酚类等物质有关。这与文献报道的
酚类具有降血脂作用基本相一致。如丹参酚 [14]类物
质具有抑制血小板聚集，抗血栓形成，降血脂，抗
动脉粥样硬化等作用。本实验室虽已验证了毛葡萄
叶水提物的有效部位，但目前尚未确定有效部位中
的何种成分在发挥作用，因此进一步分离筛选有效
单体成分将成为后续工作的重点。
参考文献：
[1] 李应光，金永明. 高脂血症现况调查及危险因素的病例对照研究
[J]. 泰山卫生，1999，23（2）：8-13.
[2] 庄瑞丰. 中药降血脂作用研究进展[J]. 河北医药，2009，31（9）：
1119-1121.
[3] 全国中草药汇编编写组. 全国中草药汇编下册[M]. 第 2版. 北京：
人民卫生出版社，1996：145-146.
[4] 周芃，荆春霞，王旻晨，等. 毛葡萄叶水提物对 FeCl3诱导血栓形
成的作用及其机制研究[J]. 中药药理与临床，2009，25（1）：44-
46.
[5] 王倩，海新. 化合物哌芳安他对兔和鹌鹑高脂血症性脂肪肝的影
响[J]. 中国药理学通报，2003，19（12）：1349.
[6] 郑新梅，姜惟，周珉，等. 脂肪康胶囊治疗脂肪肝患者的临床研
究[J]. 实用临床医药杂志，2006，10（5）：78-80.
[ 7] Zhao GX，Dai YT，Wang Y， et al. Effects of natural non -shell
seeds on the diet induced hyperlipidemia and fatty liver in quails [J].
Acta Nutrimenta Sinica，1994，16（1）：101-103.
[8] 李仪奎. 中药药理实验方法学[M]. 上海：上海科学技术出版社，
1991：398.
[9] 朱愉，多秀瀛. 实验动物的疾病模型[M]. 天津：天津科技翻译出
版公司，1992：164.
[10] 陈奇. 中药药理研究方法学[M]. 北京：人民卫生出版社，2006：
1146．
[11] 范建高，曾民德，王国良. 脂肪肝的发病机制[J]. 世界华人消
化杂志，1999，7（1）：75-76
[12] 荆春霞，周芃，吴开云，等. 毛葡萄叶水提物对血栓形成和血粘
度的影响[J]. 时珍国医国药，2010，21（1）：45-47.
[13] 杨英昕，毕秀丽. 非酒精性脂肪肝动物模型研究纂要[J]. 中医药
学刊，2005，23（4）：647-650.
[14] 余世春，琚小龙，段广勋. 丹参的化学成分和药理活性研究概况
[J]. 安徽卫生职业技术学院学报，2002，1（2）：43-47.
（编辑：梁进权）
288· ·