全 文 :Mycosystema
菌 物 学 报 15 November 2009, 28(6): 873-877
jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2009 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.
基金项目:广州市科技计划项目(No. 2007Z3-E0421)
*Corresponding author. E-mail: wswx2003@126.com
收稿日期: 2008-11-13, 接受日期: 2009-03-10
尖顶羊肚菌活性提取物降血脂作用的研究
殷伟伟 张松* 吴金凤
华南师范大学生命科学学院 广州 510631
Hypolipidemic effect of the bioactive extract from
Morchella conica
YIN Wei-Wei ZHANG Song* WU Jin-Feng
College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China
尖顶羊肚菌是一种珍贵、稀有的食药用真菌。
研究表明,尖顶羊肚菌具有增强肌体免疫力、抗疲
劳、抗病毒、抗氧化、抑制肿瘤等作用(Elmastas et
al. 2006;孙晓明等 2001;余群力 1997)。然而关
于尖顶羊肚菌活性提取物降血脂的研究尚不多见。
我们通过液体培养提取尖顶羊肚菌活性提取物
(bioactive extract from Morchella conica,BEMC),
并用BEMC溶液灌胃高脂模型小鼠,观察其对小鼠
血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯
( triacylglycerol,TG)、高密度脂蛋白胆固醇
(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低
密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 ( low-density lipoprotein
cholesterol,LDL-C)、脾指数和肾指数的影响,从
而研究BEMC的降血脂作用,为尖顶羊肚菌的降血
脂作用提供理论基础,为开发新的降血脂保健食品
和药品提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株:尖顶羊肚菌 Morchella conica,由华南
师范大学生命科学学院提供。
1.1.2 实验动物:昆明种小鼠,雄性,SPF 级,体重
20±2g,由广州中医药大学动物实验中心提供。
1.1.3 主要药品:TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 测定
试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。非诺贝特
胶囊(Fenofibrate Tablets)由法国利博福尼制药公
司生产。胆固醇、去氧胆酸钠、吐温-80 购自广州
威佳科技有限公司;丙基硫氧嘧啶购自广东华南药
业有限公司。
1.2 方法
1.2.1 BEMC 的提取:将尖顶羊肚菌接种于液体培养
基中,26℃、180r/min 下培养 10d 后,收集培养液,
DOI:10.13346/j.mycosystema.2009.06.019
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55℃减压浓缩至原来体积的 1/5,并用 Sevage 法去
蛋白,减压蒸馏,加 95%乙醇沉淀,静止 24h 后离
心,将沉淀物溶于蒸馏水,透析,真空干燥得到
BEMC,备用。经检测 BEMC,其主要成分为总糖
含量 84.57%,蛋白质含量 1.65%。
1.2.2 脂肪乳剂的配置:参照万丽等(2004)的方
法并作改进,即取猪油 20g 于 40℃水浴加热融化,
加入 10g 胆固醇,1g 丙基硫氧嘧啶,充分搅拌至溶
解,再加入 10%去氧胆酸钠水溶液 20mL,加入吐
温-80 10mL,丙二醇 10mL,搅拌均匀,加蒸馏水
定容至 100mL,冷藏备用,使用前 37℃水浴加热。
1.2.3 小鼠生理生化试验:小鼠适应性喂养 5d 后,
剪尾取血,参照试剂盒说明书测定血清 TC 含量(胆
固醇氧化酶-过氧化物酶法)。根据 TC 水平将小鼠
分为空白对照组、高脂模型组和阳性对照组,尖顶
羊肚菌活性提取物低剂量组(L-BEMC)、中剂量组
(M-BEMC)和高剂量组(H-BEMC)共六个组,
使各组 TC 水平均衡,每组 10 只。除空白对照组外,
其他各组每天灌胃脂肪乳剂,剂量均为 0.5mL/只;
L-BEMC、M-BEMC 和 H-BEMC 组每天分别灌胃
50mg/kg·d、100mg/kg·d、200mg/kg·d 的 BEMC,阳
性对照组灌胃 40mg/kg·d 的非诺贝特,灌胃量均为
0.2mL,空白对照组和高脂模型组分别灌胃等量蒸
馏水,连续灌胃 28d。每周测一次体重,灌胃 2 周
后剪尾取血,测血清 TC 水平。实验结束时,断头
取血,参照不同试剂盒说明书分别测定血清 TC、
TG(胆固醇氧化酶 -过氧化物酶法)、HDL-C
(PTA-Mg2+沉淀法)、LDL-C(PVS 沉淀法)的含
量。同时,实验解剖取脾、肾测定脾指数、肾指数
(以脏器鲜重/体重表示)。
1.2.4 小鼠对 BEMC 最大耐受量试验:参照陈奇
(1993)的方法进行。将小鼠随机分为空白对照组,
BEMC 给药组。每组 20 只,雌雄各半。实验前 12h
禁食不禁水,BEMC 给药组一次性灌胃给药,每只
灌胃量 20g/kg·d 的 BEMC(小鼠 200mg/kg·d 用量的
100 倍),空白对照组灌胃蒸馏水,灌胃体积皆为
0.5mL。灌胃后连续观察 14d 内小鼠活动、呼吸、
毛色、排泄物等,并记录死亡情况。实验结束时处
死解剖观察心、肝、脾、肺、肾等是否异常(颜色、
组织坏死、肿大等),并测脾指数和肾指数(以脏
器鲜重/体重表示)。
数据用 DPS 数据处理系统进行统计(唐启义和
冯明光 2002),采用 LSD 法进行方差分析。
2 结果与分析
2.1 BEMC 对小鼠血清 TC 水平的影响
试验前,各组小鼠血清 TC 水平一致,而试验
后的第 14 天和第 28 天,高脂模型组小鼠血清 TC
比空白对照组分别提高了 23.50%(P<0.01)和
39.04%(P<0.01),这说明灌胃脂肪乳剂能使小鼠
形成高脂模型(表 1)。给药 14d 后,BEMC 在
100mg/kg·d 剂量下使高脂模型小鼠的 TC 水平降低
了 14.98%(P<0.01),其他各剂量组与高脂模型组
相比均无显著差异性。在给药 28d 后,L-BEMC、
M-BEMC 和 H-BEMC 分别使小鼠的 TC 水平降低
了 13.32%,26.82%和 12.38%,其中 100mg/kg·d 的
BEMC 使高脂模型小鼠的 TC 水平降至接近于空白
对照组(P>0.05),其降 TC 作用较阳性对照组非诺
贝特胶囊更为显著(P<0.05)。
2.2 BEMC 对小鼠 TG、LDL-C 和 HDL-C 水平的影响
BEMC对小鼠TG、LDL-C和HDL-C水平的影响
测定表明,BEMC在50mg/kg·d剂量下对TG影响不
明显,而在100mg/kg·d和200mg/kg·d剂量下分别使
高脂模型小鼠的TG水平降低了17.22%(P<0.01)和
35.32%(P<0.01),其降TG作用比阳性对照组非诺
贝特胶囊的好(P<0.01)(表 2),说明BEMC的降
TG效果随剂量的增加而增强。BEMC在100mg/kg·d
和200mg/kg·d剂量时能分别使高脂模型小鼠的
LDL-C 水 平 降 低 30.25% ( P<0.01 ) 和 13.40%
(P<0.05),其中100mg/kg·d的BEMC降LDL-C效果
比非诺贝特胶囊的效果好(P<0.01)。BEMC在
200mg/kg·d使小鼠血清HDL-C升高了10.32%,但作
用效果不显著(P>0.05)。
2.3 BEMC 对小鼠体重及脏器指数的影响
BEMC对小鼠体重及脏器指数的影响测定表
明,各剂量的BEMC都能极显著降低高脂模型小鼠
的体重和脾指数,其中100mg/kg·d的BEMC使体重
和脾指数分别降低了9.44%(P<0.01)和25.83%
( P<0.01 ),效果最佳; BEMC 在 50mg/kg·d 和
100mg/kg·d剂量下分别使小鼠的肾指数降低了
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11.78%(P<0.01)和7.74%(P<0.05)(表3),这表
明BEMC具有一定的肾脏保护作用。
2.4 小鼠对 BEMC 最大耐受量试验
BEMC给药组小鼠活动、行为未见异常,小鼠
摄食量正常,活动自如,毛色光滑,呼吸正常,大
小便正常,无异常分泌物,无任何不良反应,无一
死亡。连续观察14d后,经解剖和病理检查,心、
肝、脾、肺、肾等主要脏器无组织坏死、肿大、颜
表 1 尖顶羊肚菌活性提取物(BEMC)对小鼠总胆固醇水平的影响( x ±s)
Table 1 Effects of the bioactive extract from Morchella conica (BEMC) on total cholesterol level of mouse serum ( x ±s)
总胆固醇(mmol/L)
Total cholestrol (mmol/L)
分组
Groups
剂量(mg/kg·d)
BEMC dose (mg/kg·d)
0d 14d 28d
空白对照组 Control 0 2.07±0.26 2.00±0.05** 2.28±0.41**
高脂模型组 High fat model 0 2.17±0.25 2.47±0.29 3.17±0.34
阳性对照组 Fenofibrate 40 2.09±0.44 2.31±0.27 2.65±0.26**
低剂量组 L-BEMC 50 2.27±0.39 2.43±0.20 2.75±0.36**
中剂量组 M-BEMC 100 2.19±0.15 2.10±0.18** 2.32±0.34**
高剂量组 H-BEMC 200 2.10±0.33 2.68±0.35 2.77±0.31*
注:与高脂模型比较,差异水平*:P<0.05,**:P<0.01.
Note: Compared with the high fat group, the difference level *: P<0.05, **: P<0.01. L-BEMC: Low dosage of BEMC; M-BEMC: Moderate dosage of BEMC;
H-BEMC: High dosage of BEMC, the same below.
表 2 尖顶羊肚菌活性提取物(BEMC)对小鼠 TG、LDL-C 和 HDL-C 水平的影响( x ±s)
Table 2 Effects of the bioactive extract from Morchella conica (BEMC) on the levels of mouse serum TG, LDL-C and HDL-C ( x ±s)
分组
Groups
剂量(mg/kg·d)
BEMC dose (mg/kg·d)
甘油三酯(mmol/L)
TG (mmol/L)
低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)
LDL-C (mmol/L)
高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)
HDL-C (mmol/L)
空白对照组 Control 0 0.39±0.04** 0.53±0.12** 1.54±0.27**
高脂模型组
High fat model
0 0.70±0.11 1.14±0.08 1.06±0.09
阳性对照组 Fenofibrate 40 0.61±0.11* 0.98±0.19* 1.39±0.17**
低剂量组 L-BEMC 50 0.63±0.09 1.09±0.18 1.00±0.08
中剂量组 M-BEMC 100 0.58±0.10** 0.80±0.11** 1.02±0.10
高剂量组 H-BEMC 200 0.45±0.06** 0.99±0.19* 1.17±0.24
注:与高脂模型组比较,差异水平*:P<0.05,**:P<0.01.
Note: Compared with the high fat group, the difference level *: P<0.05, **: P<0.01.
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表 3尖顶羊肚菌活性提取物(BEMC)对小鼠体重、脾指数和肾指数的影响( x ±s)
Table 3 Effects of the bioactive extract from Morchella conica (BEMC) on mouse’s body weight, spleen index and kidney index ( x ±s)
分组
Groups
剂量 (mg/kg·d)
BEMC dose (mg/kg·d)
体重 (g)
Body weight (g)
脾指数 (g/g bw)
Spleen index (g/g bw)
肾指数 (g/g bw)
Kidney index (g/g bw)
空白对照组 Control 0 33.18±1.22** 0.28±0.05 1.32±0.11*
高脂模型组 High fat model 0 36.20±0.66 0.33±0.07 1.44±0.18
阳性对照组 Fenofibrate 40 32.98±0.89** 0.27±0.04* 1.30±0.12**
低剂量组 L-BEMC 50 33.57±0.81** 0.26±0.04** 1.27±0.12**
中剂量组 M-BEMC 100 32.78±0.50** 0.24±0.06** 1.33±0.09*
高剂量组 H-BEMC 200 34.02±0.98** 0.24±0.05** 1.39±0.08
注:与高脂模型组比较,差异水平*:P <0.05,**:P <0.01.
Note: Compared with the high fat group, the difference level *: P <0.05, **: P <0.01.
色异常等病理症状。与空白对照组比较,体重、脾
指数和肾指数没有显著差异。这表明小鼠对 BEMC
经口给药的最大耐受量至少为 20g/kg·d。
3 结论与讨论
受体内激素水平的影响,雄性动物较雌性动物
容易形成高脂血症,本实验选用雄性小鼠进行高脂
造模。实验采用灌胃脂肪乳剂的方法制备高脂模型
小鼠。结果显示,灌胃脂肪乳剂 28d 后,小鼠血清
TC、TG 和 LDL-C 水平分别提高了 39.04%、79.49%
和 115.09%(P<0.01),HDL-C 水平降低了 31.17%
(P<0.01),是典型的血脂代谢紊乱。利用该方法所
建立的模型,用于研究药物对血脂、脂蛋白的影响
是可靠的。
血浆脂蛋白是脂类在血中转运的主要形式,由
于脂蛋白的合成部位、运载脂类的比例,以及在血
液中的代谢过程不同,各种脂蛋白所表现出的生理
功能也不同。低密度脂蛋白的作用是转运肝脏合成
的内源性胆固醇到肝外组织,故与高胆固醇血症的
形成密切相关,机体内过剩的胆固醇容易在细胞内
堆积,高密度脂蛋白可以通过血循环将周围组织中
过剩的胆固醇运至肝脏,进行代谢并排出体外,故
高密度脂蛋白有利于降低血胆固醇(周爱儒
2004)。Yang et al.(2006)的研究发现丛生金钱菌
的菌丝体粉(CCMP)可以明显降低链脲霉素所致
糖尿病大鼠体内 TC 和 TG 水平,但是不能够显著
提高磷脂和 HDL-C 水平,表明 CCMP 不能通过促
进胆固醇的转运发挥降血脂作用,CCMP 可能通过
抑制外源性 TC 和 TG 的吸收发挥降血脂作用。本
研究表明:BEMC 在 100mg/kg·d 剂量下使小鼠血
清 TC 水平降低 26.82%,TG 降低了 17.22%,但是
不能显著提高小鼠血清中的 HDL-C 水平,这与
Yang 的实验结果相似,因此,推测 BEMC 可能通
过抑制外源性 TC 的吸收发挥降血脂作用。本研究
显示:与高脂模型组相比,BEMC 在 100mg/kg·d
的剂量下使 LDL-C 降低了 30.25%,这表明 BEMC
也可能通过抑制肝脏中胆固醇的合成而发挥降血
脂作用。
高脂血症还可以造成脾脏和肾脏的损伤。郭金
英等(2007)的研究表明,食用高脂饲料四周后,
金黄地鼠的脾指数显著升高。张娟等(2007)通过
超声背向散射积分技术评价实验性大鼠高血脂引
起的早期肾脏损害,结果显示试验 16 周后,试验
组雄性 SD 大鼠的肾指数和肾体积显著大于空白对
照组。本实验研究结果显示,高脂模型组的脾指数
和肾指数较空白对照组分别提高了 14.43%和
9.11%;BEMC 在所设定剂量下都能降低高脂小鼠
的脾指数和肾指数,提示 BEMC 具有一定的脾脏和
肾脏保护作用。
本研究结果表明,BEMC 能显著地降低高脂模
型小鼠血清 TC、TG、LDL-C、脾指数和肾指数,
具有良好的降血脂效果,其降血脂作用与金耳多糖
有相似之处(Kiho et al. 2000)。BEMC 对小鼠没有
明显的毒副作用和不良反应,小鼠对 BEMC 的最大
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耐受量至少为 20g/kg·d,尖顶羊肚菌活性提取物属
无毒级物质,这为新的降血脂保健食品和药品的开
发及其临床应用提供了实验依据。
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