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安顺缫丝花组织培养中的污染及防控对策



全 文 :1 选题的目的与意义
安顺缫丝花(Rosa sterilis S.D.Shi var.leioclada M.T.An,Y.
Z.Cheng et M.Zhong),别名光枝无子刺梨,为贵州省特有种,
属蔷薇科多年生落叶攀援性灌木,高 4~6 m,生长强旺,开粉
白色花。由于安顺缫丝花没有种子,不能进行有性繁殖,扦
插繁殖自然资源很少。安顺市林业科学研究所经过几年的
研究,现已全面掌握了安顺缫丝花的组织培养技术,安顺缫
丝花的组织培养育苗技术的各个关键环节都已初试过关,
并基本摸清其生产的工艺流程,但目前存在组织培养中污
染率高、规模生产技术难度大的问题,污染率增加必然提高
组培苗的成本,降低安顺缫丝花组培的成活率,因此防治污
染是工厂化育苗中不可忽视的环节。
污染是在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂
菌,导致培养失败的现象。它是影响植物组织培养的一个重
要因素,通常会导致培养失败造成很大的损失。植物组培苗
的工厂化生产在我国发展速度很快,组织培养技术日趋完
善,在市场竞争中如何降低成本是提高经济效益的首要问
题,组织培养中污染率的增加势必引起组培苗成本的提高,
造成很大的经济损失,并对植株造成伤害,增加接种源及污
染机率。因此,组织培养中降低污染率是工厂化生产中不可
忽视的技术环节。采穗圃是生产穗条的林木良种基地,生产
的穗条生长健壮,粗细适中,发根率较高,遗传品质有保证;
采用扦插繁殖方式可保证苗木质量,降低育苗成本[1]。
本试验从通常污染的防控、内源性污染的防控、继代培
养中污染的防控、改善培养基的成分等方面降低污染率,从
而达到降低生产成本、减少对植株造成伤害、减少接种源及
污染的机率等目的,形成创新性研究成果,以解决安顺缫丝
花育苗产业化中技术问题,并为组培工厂化育苗奠定技术
基础[2]。
2 试验地概况
本试验在安顺市林科所完成,所里各项试验设施完善、
齐全,为本试验的顺利完成提供了必要条件。
3 研究方法
3.1 试验设计
本试验主要从安顺缫丝花组培过程产生污染的途径进
行污染防控,主要的污染来源有通常污染、内源性污染、继
代培养中污染,通过设置对照对比试验,分析安顺缫丝花外
植体的污染率,找出污染防控的最佳方法。
3.2 研究内容
一是通常污染的防控研究:①操作污染和环境污染防
控;②外植体的消毒:采用不同的灭菌剂和灭菌时间处理。
二是内源性污染的防控研究:①外植体预处理;②用不同抗
生素进行处理。三是继代培养中污染防控研究。四是改善培
养基的成分,减少培养基中的有机成分研究。
3.3 技术路线
污染防控研究的技术路线如图 1 所示。
4 研究结论
(1)通常污染的防控研究是从操作污染、环境污染和外
植体消毒两方面进行。操作污染、环境污染是可以克服的,
防止措施是通过建立严格的组培操作规程来控制 [3]。外植体
的消毒是通过采用不同的灭菌剂试验,经过分析对比,找到
最好的灭菌剂为升汞,而后经不同灭菌时间试验,找到最佳
灭菌时间为 8 min。
(2)内源性污染的防控研究是从外植体预处理和培养
基中添加抗生素两方面进行。外植体预处理是使用多菌灵浸
泡的方法,经过试验分析,使用多菌灵可使污染降低 20%,
是目前最佳的处理方式。添加抗生素是把青霉素 、阿奇霉
素和链霉素经过滤灭菌器加入到培养基中进行试验,通过分
析比对,阿奇霉素的作用效果最好 ,可使细菌污染率可降
低 35%。
(3)通过试验总结,继代培养中的污染防控主要从以下
2 个方面进行:①保存原种。在对获取的无菌培养物进行扩
大繁殖时,应采取合理的操作程序,通过培养,获得第一代
无菌培养物之后,需要留下一部分作为预留种保存,经过分
安顺缫丝花组织培养中的污染及防控对策
钟 漫 陶文丞 韦景枫 覃凤好 蒙先举 张声涛
(贵州省安顺市林业科学研究所,贵州安顺 561000)
摘要 安顺缫丝花是贵州特有的物种,其果具有较高的经济价值,其组培育苗成活率较低。为探索安顺缫丝花在组织培养过程中造成
污染的原因,提高组培成活率,从污染来源进行研究,通过试验对比分析,发现造成安顺缫丝花组培污染的途径有外植体、培养容器、接种
工具、培养基、接种室和培养环境、接种人员的操作等,应根据不同的污染途径采取相应的措施进行预防和控制。
关键词 安顺缫丝花;组织培养;污染原因;控制对策
中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2015)20-0123-02
收稿日期 2015-09-15
图 1 技术路线
环境、材料及工具灭菌
外植体的灭菌
继代培养中原种复检及加入抗菌剂
改善培养基的成分
达到污染控制的目的
林业科学现代农业科技 2015 年第 20 期
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林业科学 现代农业科技 2015 年第 20 期
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可作为果园人工生草草种,为南方果园生草提供多一种草
种选择。
4 快速育苗技术
毛马齿苋种子微小,发芽后,幼苗细弱,抗逆性较差,一
般不建议在大田大面积无保护直播。快速繁殖育苗分为 2
个阶段进行:一是播种繁殖;二是扦插育苗。先进行种子直
播播种,快繁插穗,然后再采插穗扦插育苗。扦插苗根系长
至足够壮实,新抽生的分枝长 2~3 cm 即可栽种。
4.1 播种繁殖
播种时间在春、夏、秋季,气温高于 25 ℃时进行。选择
排水良好的地块,翻土、破碎、平整,起高 15 cm、宽 1.5 m 的
垄作为苗床。播种前,先缓慢浇水浇透苗床,尽量保持苗床
表土平整,防止种子随水流聚集在低洼处。毛马齿苋种子微
小,播种时直接播撒种子地苗床表面,可以不用覆土。播种
时先浸种 24 h 后,与砂土混匀后撒播,也可以不浸种用砂土
与种子混均后直接撒播。播种后再细水浇水 1 次,使种子与
土壤结合,然后用遮阳网或茅草覆盖防晒保湿,勤浇水保持
苗床湿润。播种后 2~3 d 出苗,及时揭开遮阳网或茅草,防止
生长不良。由于毛马齿苋幼苗极其细弱,幼苗期浇水应少量
多次,使用喷雾器喷水或细水浸灌,如果白天太阳猛烈要覆
盖遮阳网,减缓土壤水分蒸发。
毛马齿苋种子出苗后 15 d,生长缓慢,幼苗脆弱,应细
心照料。15 d 后进入快速生长期,此时期开始萌发分枝,1 个
月后长至约 10 cm 高时,在条件适宜的情况下进入花果期。
4.2 扦插育苗
毛马齿苋属于扦插易成活植物,老茎、嫩茎、叶均可扦
插成活,茎段扦插成活率高,可高达 95%以上。扦插时间一
般在春、夏、秋 3 季,海南除冬季 1 月低温阶段不适宜外,全
年均可进行。
扦插时选用大小合适的育苗盘,盘穴口径约 4.5 cm,高
约 5 cm。育苗基质采用沙土、椰糠、泥碳土按 2∶1∶1 的比例混
合,装满填平育苗盘。采摘毛马齿苋茎段作为插穗,老茎、嫩
茎带叶或不带叶均可,插穗长约 5 cm 即可。插穗扦插入土 2
cm 左右,浇足水,保持基质湿润,5~8 d 后即生根成活。毛马
齿苋扦插后管理较耐粗放,遮荫不遮荫均可,每天浇水 1 次
保持基质不干,扦插成活率高。待扦插苗根长满育苗盘穴,
新分枝长 2~3 cm 时,即可进行移栽。
5 栽培管理技术
毛马齿苋作为盆景观赏,建议采用播种多株密栽,观赏
其花和叶。作为花境植物和果园人工生草草种栽培,采用扦
插苗移栽,栽培密度 20 cm×20 cm。栽种前先翻土,翻土深 15
cm 左右,破碎、平整土地,清除地面杂草,按密度要求将扦
插苗移栽于地块,浇足定根水,进入正常养护管理。
5.1 肥水管理
毛马齿苋耐干旱,较耐水涝,水分管理可较粗放。浇水
视天气而定,遇久旱无雨叶片呈皱缩状时,需及时浇水,平
时浇水采取“不干不浇,浇则浇透”的原则,在不过分干旱的
情况下,可任其自然生长。毛马齿苋根系能忍耐 15 d 以上积
水浸泡,但叶在水淹的情况下容易腐烂。如果积水淹没全
株,需及时排涝,否则处于水下的叶片以及嫩茎容易发生腐
烂,影响生长。
毛马齿苋缺乏营养时,茎叶小、节间短、生长缓慢,栽种
时应施足有机肥,在苗期补充浓度为 0.3%~0.5%复合肥液
体肥,每隔 7 d 淋施 1 次。
5.2 杂草防除
栽种前期,毛马齿苋生长尚未形成连片状覆盖于地面,
抑制杂草生长的能力较差,生长的杂草可采用人工防除,也
可以喷施选择性除草剂除草。若作为果园人工生草,还可以
利用割草机械,割草高度 10 cm,可达到抑制杂草生长而不
影响毛马齿苋生长的目的。
5.3 病虫害防治
毛马齿苋病虫害很少,目前只发现盲蝽危害和滋生少
量粉蚧,盲蝽及粉蚧均为刺吸式口器害虫,危害表现在吸食
植株茎叶的汁液,使毛马齿苋失绿变色,生长不良。
盲蝽可在若虫期防治,喷施 50%辛硫磷乳油 1 000~1 500
倍液、50%马拉硫磷乳油 1 000~1 500 倍液、40%乐果乳油
1 000 倍液、10%吡虫啉 1 500 倍液、90%晶体敌百虫 1 000
倍液等。介壳虫同样需在若虫期防治,在其分泌蜡粉形成介
壳之前,喷洒 2.5%敌杀死或 2.5%功夫乳油或 20%灭扫利乳
油、20%速灭杀丁乳油 3 000~4 000 倍液、10%氯氰菊酯乳油
1 000~2 000 倍液 、50%马拉硫磷或杀螟松或稻奉散乳油
1 000 倍液;对已开始分泌蜡粉的介壳虫若虫,可在上述药
剂添加 0.3~0.5%柴油乳剂,以提高防治效果[3-4]。
6 参考文献
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[4] 杨军衡,马青松.马齿苋栽培技术与开发前景[J].林业科技开发,2001
(6):48-49.
批繁殖和复检,确保为优质植株后,再进行大规模生产培
育。②药剂防控。通过在培养基中加入苯甲酸钠抗菌剂来防
止。经试验,在培养基中加入苯甲酸钠可降低污染率 20%。
(4)安顺缫丝花 MS 培养基添加的有机成分有糖、盐酸
硫胺素(VB1)、盐酸吡哆醇(VB6)、烟酸(VB3)、肌醇、甘氨酸,开
展有机成分用量减少 1/2,除去培养基中的 VB6 、烟酸、甘氨
酸(保留糖、VB1 、肌醇)有机成分试验,分别接种 100 瓶,每
5 d 观察记录芽增殖、生根、细菌、真菌情况,35 d 后分析汇
总统计结果。经 2~3 代培养后,能抑制细菌生长,对丛生芽
增殖有一些影响,对生根培养没有影响。有机成分减半的芽
增殖减少,生根正常,细菌减少,真菌稍减少;保留糖、VB1、肌
醇的芽增殖稍减少,生根正常,细菌减少,真菌稍减少[4]。
5 参考文献
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