全 文 ：第 27 卷 哈尔滨师范大学自然科学学报 Vol． 27，No． 3 2011
第 3 期 NATURAL SCIENCES JOURNAL OF HARBIN NORMAL UNI
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VERSITY
三蕊柳的组织培养及快速繁殖的研究*
张云慧1，姜长阳2
(1．东北师范大学;2．辽宁师范大学)
【摘要】 以三蕊柳的休眠芽为材料，进行了萌动芽的生长，不定芽的分化，试
管苗的继代培养与留茬培养，生根苗扦插和移植的研究，成功地建立起三蕊柳快速
繁殖技术．研究结果证明:MS+BA0． 1 mg·L－1 +GA 1． 0 mg·L－1 +IAA 0． 2 mg·L－1
是休眠芽生长培养的理想培养基;1 /2MS+BA 0． 6 mg·L－1 + IAA 0． 2 mg·L－1 +
NAA 0． 1mg·L－1是生长芽分化培养的理想培养基;1 /2MS+BA 0． 4mg·L－1 +AgNO3
0． 8 mg·L－1 +GA3 0． 5 mg·L
－1 + IAA 0． 3 mg·L－1 +NAA 0． 1 mg·L－1是不定芽分化
继代培养和留茬继代培养的理想培养基;移植到河滩上的试管苗生长旺盛，呈丛生
状．
关键词:三蕊柳;组织培养;快速繁殖
收稿日期:2011－03－15
* 辽宁省教育厅科学技术研究项目资助(2008353)
0 引言
三蕊柳(Salix triandra var． triandra)又称白
浆柳，属于杨柳科柳属的灌木或小乔木． 分布于
我国的辽宁、黑龙江、吉林、内蒙古、河北、山东等
地［1－2］，生长在海拔 500 m以下的河岸湿地，丛生
于砂质土壤上． 由于三蕊柳萌枝不仅柔软，而且
木质部洁白，适于编织筐、篮等家庭用具和手工
艺品，在国际、国内市场上倍受青睐． 因此，近年
来辽宁南部地区有很多人工栽培的三蕊柳．因三
蕊柳的繁殖生物学特点，目前栽培的三蕊柳都是
通过枝条扦插的方法进行繁殖的．但由于三蕊柳
每年萌生枝条刚刚成熟就被人们全部采收编织
筐篮了，种苗问题成为辽宁南部地区三蕊柳栽培
的制约瓶颈．为此，对三蕊柳进行了快速繁殖的
研究，以期获得大量种苗，满足人们的栽培需要．
虽然现在已多有柳树组织培养及无性系建立研
究的报道［3－4］，但迄今未见三蕊柳组织培养及快
速繁殖的研究的报告．该研究以三蕊柳的萌动芽
为材料，成功地进行了三蕊柳的组织培养，以很
快的繁殖速度繁殖三蕊柳的试管苗，建立起三蕊
柳的快速繁殖体系．
1 材料与方法
1． 1 材料及来源
以采自瓦房店市老帽山山下的三蕊柳休眠
芽为材料．
1． 2 材料处理
4 月中旬，采集三蕊柳一年生枝条，剪取长
4 cm左右有休眠芽的茎段，放入 250 mL 的广口
瓶中，用自来水冲洗 20 min左右后，用 0． 05%安
利洗涤剂振荡洗涤 4 次，再用蒸馏水振荡洗涤
3 次，接着，转移到超净工作台上，加 75%的酒精
灭菌 20 s 左右，迅速用无菌水洗涤 2 次，再用
20%的 NaClO溶液振荡灭菌 16 min，最后用无菌
水振荡洗涤 6 次．即获得无菌材料．
1． 3 培养条件
芽的生长与分化培养基加蔗糖 30 g·L－1，
生根培养基加蔗糖 20 g·L－1，培养基胨力强度
为 180 g·cm2－1［5］，培养基 pH 为 6． 0，培养温度
为 26 ℃，休眠芽生长分别进行暗培养，其他培养
第 3 期 三蕊柳的组织培养及快速繁殖的研究
进行光照培养，光培养其强度为 2500 Lx，其时间
为 10 h·d－1 ．
1． 4 培养方法
1． 4． 1 不同生长素对休眠芽生长的影响
在超净工作台上，用解剖刀和解剖针将无菌
休眠芽外面的包裹物剥掉后，将 0． 2 cm 左右的
休眠芽接种于以 MS + BA 0． 1 mg· L－1 + GA
1． 0 mg·L－1为基本培养基，附加浓度分别为
0 mg·L－1、0． 2 mg · L－1、0． 4 mg · L－1、
0． 6 mg·L－1和 0． 8 mg·L－1的 IBA、IAA、NAA和
2，4－D共 17 种培养基上，进行休眠芽的生长培
养．每种培养基接种 100 个休眠芽，试验重复了 2
次．
1． 4． 2 不同生长素组合对生长芽分化的影响
将上述培养的浅黄色生长芽从培养瓶中取
到无菌培养皿中，用解剖刀在距叶柄约 0． 1 cm
处(实际上是在距生长点约 0． 1 cm 处)切下，使
其形成具有一个生长点的茎段后，接种到以
1 /2MS+BA 0． 6 mg·L－1为基本培养基，附加不
同生长素、不同浓度组合的培养基中，进行生长
芽的分化培养． 每种处理接种 100 个生长芽，试
验重复了 2 次．
1． 4． 3 不同培养基对分化芽继代培养的影响
将分化培养的不定芽从培养瓶中取到无菌
培养皿中，用解剖刀在距叶柄约 0． 1 ～ 0． 2 cm处
切下，使其形成具有 2 个生长点、长 0． 5 cm左右
的茎段后，分别接种到 1 /2MS+BA 0． 4 mg·L－1 +
AgNO3 0． 8 mg·L
－1 + IAA 0． 3 mg·L－1 +NAA 0． 1
mg·L－1、1 /2MS+BA 0． 4 mg·L－1 +GA 30． 5 mg
·L－1 + IAA 0． 3 mg·L－1 +NAA 0． 1 mg·L－1和
1 /2MS+BA 0． 4 mg·L－1 +AgNO3 0． 8 mg·L
－1 +
GA 30． 5 mg·L－1 + IAA 0． 3 mg·L－1 +NAA 0． 1
mg·L－1 3 种培养基上，进行生长芽的分化继代
培养．分化芽继代试验重复了 3 次，每种处理接
种 200 个材料，每次试验继代培养 4 代．
1． 4． 4 丛生生根试管苗的留茬继代培养试验
将分化芽继代培养的丛生生根试管苗上部
剪下，继续进行分化芽的继代培养，基部保留两
个生长点，使其进行留茬继代培养． 丛生生根试
管苗的留茬继代培养试验重复了 3 次．
1． 4． 5 丛生生根试管苗的扦插试验
把留茬培养的丛生生根试管苗取出，剪成长
2 cm左右、至少具有 2 个生长点的茎段后，剪掉
下部的 1 个叶片，把茎的下部切口放到 60 mg·
L－1的 IAA溶液中处理 3 ～ 4 min，扦插到上面铺
着一层约 6 cm 厚河沙、下面为肥沃园土的温室
苗床上．扦插完后用弥雾的方法使插孔淤闭． 扦
插后前 14 d要保持湿度为 95%左右、温度 20 ℃
以上、无直射光照的环境条件． 14d 后按照温室
条件进行正常管理． 扦插试验重复了 3 次，每次
扦插 200 个材料．
1． 4． 6 试管苗的移植
于 5 月中旬，把扦插成活的试管苗移植到辽
宁南部碧流河支流的河滩上． 移植试验重复了
2 次，移植的数量分别为 500 株和 650 株．
2 结果及分析
2． 1 不同生长素对休眠芽生长的影响
培养 15d 时可见，在附加不同浓度的 NAA
和 2，4－D 培养基上会不同程度地生长出愈伤组
织;在附加不同浓度的 IBA培养基上培养材料褐
化或基本没有变化;附加 IAA 的培养基上，有的
可见培养芽开始生长．培养到 50 d 时统计证明:
在附加浓度为 0． 2 mg·L－1的 IAA 培养基上，
91%的培养芽能生长为长 1． 6 ～ 3． 1cm的浅黄色
生长芽．这个结果说明:MS+BA 0． 1 mg·L－1 +GA
1． 0 mg·L－1 +IAA 0． 2 mg·L－1这一培养基是三
蕊柳休眠芽生长培养的理想培养基．
2． 2 不同生长素组合对生长芽分化的影响
培养 45 d观察统计的结果见表 1．由表 1 可
以看出，附加不同浓度 IBA 与不同浓度 NAA 配
合使用的培养基上，不能诱导生长芽分化，而在
附加不同浓度 IAA与不同浓度 NAA配合使用的
培养基上，能不同程度地诱导生长芽分化． 其中
在 IAA的浓度为 0． 2 mg·L－1与浓度为 0． 1 mg
·L－1的 NAA配合使用的培养基上，不仅生长芽
的分化率为 93%、平均每个培养生长芽分化的
不定芽数为 5． 3，而且分化的不定芽长势好． 观
察还表明，接种培养 10 d 后，接种在 IAA的浓度
为 0． 2 mg·L－1、NAA浓度为 0． 1 mg·L－1的培养
基上生长芽基部可见开始分化出不定芽． 接着，
随着培养时间的延长和分化芽不断地生长，在先
分化的不定芽基部，又会陆续分化出多个不定
芽．培养到 45 d时，每个培养生长芽就会分化形
成茎粗 0． 15 ～ 0． 2 cm、株高 1． 0 cm 以上、具有 5
～ 9 个叶片，由 4 ～ 8 个不定芽组成的丛生不定
芽．这个结果说明:1 /2MS +BA 0． 6 mg·L－1 +
IAA 0． 2 mg·L－1 +NAA 0． 1 mg·L－1这种培养基
是三蕊柳不定芽分化培养的理想培养基．
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哈尔滨师范大学自然科学学报 2011 年 第 27 卷
表 1 不同浓度生长素对愈伤组织诱导的影响
生长素浓度 /mg·L－1
IBA IAA NAA
分化数 分化率 /% 平均分化芽数 /个 长势
0 0 0． 1 0 0 0 －
0． 1 0 0． 1 0 0 0 －
0． 2 0 0． 1 0 0 0 －
0． 3 0 0． 1 0 0 0 －
0． 4 0 0． 1 0 0 0 －
0． 5
0
0． 1
0． 2
0． 3
0
0
0
0
0
0． 1
0． 1
0． 2
0． 2
0． 2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
－
－
－
－
－
0． 4 0 0． 2 0 0 0 －
0． 5 0 0． 2 0 0 0 －
0 0． 1 0． 1 68 68 2． 8 ++
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0． 2
0． 3
0． 4
0． 5
0． 1
0． 2
0． 3
0． 4
0． 5
0． 1
0． 1
0． 1
0． 1
0． 2
0． 2
0． 2
0． 2
0． 2
93
45
43
12
76
72
44
21
8
93
45
43
12
76
72
44
21
8
5． 3
4． 3
3． 1
1． 9
3． 1
2． 8
4． 2
1． 6
1． 2
++
+
+
+
++
+
+
+
+
注:+++为长势好;++为长势较好;+长势一般
2． 3 不同培养基对分化芽继代培养的影响
培养 40 d 的统计结果证明，1 /2MS + BA
0． 4 mg·L－1 + AgNO3 0． 8 mg · L
－1 + GA
30． 5 mg·L－1 + IAA 0． 3 mg · L－1 + NAA
0． 1 mg·L－1 这种培养基是三蕊柳不定芽分化继
代培养的理想培养基． 观察统计表明，在上述这
种培养基上培养 20 d 左右，在近培养基表面的
茎和叶片上，就会形成数量不等的气生根． 气生
根长长接触到培养基后，就会成为具有吸收功能
的根系．根系一旦形成，不定芽的分化速度和植
株的生长速度就会明显加快．培养到 40 d 时，就
会培养成为平均茎粗位 0． 17 cm、具有 6 ～ 10 个
叶片、平均株高 3． 1 cm、绿色叶片伸展的、由 4 ～
10 个芽组成的丛生生根试管苗． 平均每个培养
不定芽能繁殖出 6． 2 个丛生生根试管苗．
2． 4 丛生生根试管苗的留茬继代培养试验
试验结果表明，进行 1 次分化芽的继代培
养，可连续进行 2 代丛生生根试管苗的留茬继代
培养．留茬培养的生根试管苗植株粗壮、平均株
高为 4． 3 cm、生长旺盛．留茬培养丛生生根试管
苗，平均每代的培养周期为 30 d，每代繁殖系数
为 4． 2．
2． 5 丛生生根试管苗的扦插试验
观察表明，扦插半个月左右可见成活并开始
生长． 3 次扦插试验的平均成活率为 92． 5% ． 每
株试管苗平均可繁殖出 2． 3 个扦插苗．
2． 6 试管苗的移植
移植的试管苗成活率为 99% ． 与同期的实
生苗相比，移植的试管苗具有植株较大、生长速
度快、株型整齐、根系发达等特点．移植成活的试
管苗 6 月中旬长到高 30 cm 左右时，将上部剪
掉，当年秋天就会生长成为长 110 cm左右、3 ～ 5
个可用作编织材料的萌枝．将当年形成的萌枝剪
掉，翌年秋天生长出 15 ～ 25 个可用作编制材料
的萌枝．所有植株都成丛生状．
3 讨论
在该研究中，采用生长芽分化培养的方法，
1 个生长芽经过 45 d的培养，能繁殖出 5． 3 个不
定芽．按照这个速度，每年可繁殖出 5． 38． 1个后
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第 3 期 三蕊柳的组织培养及快速繁殖的研究
代;采用不定芽分化继代培养的方法，1 个不定
芽经过 40 d 的培养，能繁殖出 6． 2 个丛生生根
试管苗．按照这个速度，每年可繁殖出 6． 29． 1个后
代;采用丛生生根试管留茬继代培养的方法，经
过 30 d的培养，1 株留茬苗能繁殖出 4． 2 个丛生
生根试管苗． 按照这个速度，每年可繁殖出
4． 212． 2个后代．上述分析说明，在该研究中，不论
采用哪种方法进行繁殖，每年都会获得大量的三
蕊柳后代，完全可以满足人们栽培对种苗的大量
需求．这也说明该研究所获得的技术达到了快速
繁殖的目的．但是，由于采用生长芽分化培养的
方法所获得的不定芽长势较弱，无效芽的比率较
高．因此，生产上应采用不定芽分化继代培养与
丛生生根试管留茬继代培养相结合的方法对三
蕊柳进行繁殖．用这两种结合的方法繁殖的丛生
生根试管苗是采取微型扦插的方法进入苗床的．
采取微型扦插方法每株试管苗可繁殖出 2． 3 个
扦插苗，这又使繁殖速度增加了 1 倍多． 虽然国
内已有微型扦插的报道［6－7］，但研究都是在培养
瓶中进行的，迄今未见木本植物微型扦插直接进
入苗床的报道．本研究使三蕊柳微型扦插直接进
入苗床的成功说明，微型扦插手段也可作为试管
苗在生产上应用的技术．
在进行分化芽继代培养的试验中，出现了在
近培养基表面的茎、叶上形成数量不等气生根，
气生根长长接触到培养基后，就会成为具有吸收
功能的根系，从而出现了促进了培养芽的分化速
度和植株的生长速度的现象．产生这种现象与以
下两个原因有关:一方面表明三蕊柳具有形成气
生根的遗传性;另一方面与培养芽处在湿度大、
温度较高的环境有关．气生根长长接触培养基成
为具有吸收功能的根系说明:在人工培养的环境
中，三蕊柳试管苗气生根的功能可以发生改变．
参 考 文 献
［1］ 李书心．辽宁植物志:上册［M］．沈阳:辽宁科学技术出版
社，1988．
［2］ 韩全忠，王正兴．大连地区植物志:上册［M］．大连:大连理
工大学出版社，1993． 102－103．
［3］ 关亚英，陈英，黄敏仁． 簸箕柳组织培养初步研究［J］． 海
南师范大学学报，2009，22(2) :204－208．
［4］ 张天宇，燕丽萍，夏阳，等．柳树愈伤组织的诱导研究［J］．
山东林业科技，2007，(2) :17－19．
［5］ 姜长阳．培养基琼脂用量的商榷［J］．上海:植物生理学通
讯，1990，26(2) :54．
［6］ 庞发虎．驱蚊草微型扦插快速繁殖的研究［J］． 安徽农学
通报，2009，15(1) :68－69．
［7］ 李秋杰，张吉，陈春燕． 月季微型扦插快速繁殖研究［J］．
安徽农业科学，2007，35(32) :10254，10274．
Study of Tissue Culture and Rapid
Propagation of Salix Triandra var． Triandra
Zhang Yunhui1，Jiang Changyang2
(1． Northease Normal University;2． Liaoning Normal University)
ABSTRACT
In this paper，the growing and differentiation of adventitious bud，subculture of test － tube plant，
cattaging and transplanting of rooted seedling are studied by using dormant bud of salix triandra var．
triandra． The results showed that MS+BA 0． 1 mg·L－1 +GA 1． 0 mg·L－1 +IAA 0． 2 mg·L－1 is suitable for
the growth of dormant bud;1 /2MS+BA 0． 6mg·L－1 + IAA 0． 2 mg·L－1 +NAA 0． 1 mg·L－1 is suitable for
differentiation of the bud;1 /2MS+BA 0． 4 mg·L－1 +AgNO3 0． 8 mg·L
－1 +GA3 0． 5 mg·L
－1 + IAA 0． 3 mg
·L－1 +NAA 0． 1mg·L－1 is suitable for subculture of the adrentitious bud． The seedling grew well and
thickly on the flood land by transplanting．
Keywords:Salix triandra var． triandra;Tissue Culture;Rapid propagation
(责任编辑:季春阳)
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