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野生蔬菜白簕的安全性评价



全 文 :野生蔬菜白簕的安全性评价
林春华, 乔燕春, 谭 雪, 郭 爽
(广州市农业科学研究院, 广东 广州 510308)
摘 要:采用急性经口毒性、30 d喂养、遗传毒性等试验研究白簕的食用安全性。 急性经口毒性试验显示,白簕
半致死量 LD50>40 g/kg;30 d 喂养试验白簕对 SD 大鼠的生长影响不明显,对血液生化指标影响也不明显;病理检测
表明,13.34、6.67、3.34 g/kg·d等 3种剂量不会导致大鼠脾、肝、肾脏等器官的损害;在试验最大剂量范围内,骨髓微核
试验和小鼠睾丸染色体畸变试验结果均为阴性。
关键词:白簕; 毒理学; 安全性; 野生蔬菜
中图分类号:S647 文献标识码:A 文章编号:1004-874X(2014)08-0047-05
Safety evaluation of Acanthopanax trifoliatus, a wild vegetable
LIN Chun-hua, QIAO Yan-chun, TAN Xue, GUO Shuang
(Guangzhou Research Institute of Agricultural Sciences, Guangzhou 510308, China)
Abstract: The techniques including acute oral toxicity, long-term feeding (30 days) and genetic toxicity test were
employed to evaluate the safety performance of a wild vegetable——Acanthopanax trifoliatus. The results showed that the
median lethal dose (LD50) was more than 40 g/kg. Long-term feeding of the SD rats with A. trifoliatus for 30 days showed
no significant effect on the growth and blood biochemical indicators of the rats. Moreover, the pathology test result showed
that three dosages (13.34, 6.67, 3.34g/kg·d)of A. trifoliatus in the feeding experiment couldn’t induce any damage on the
spleen, liver and kidney of the rats. Even after the maximum dose(13.4 g/kg) treatment, the test results of Micronucleus test
of bone marrow cell and chromosome aberration in mice were all negative.
Key words: Acanthopanax trifoliatus; toxicology; safety; wild vegetable
白簕〔Acanthopanax trifoliatus(Linn.)Merr.〕又称白
簕、榄树菜、三加皮、三叶五加、鹅掌簕、勒菜等,属五加
科五加属灌木植物[1]。 据《广东中药志》记载,白簕性味
淡、寒,有小毒 [2],能清热解毒、活血祛癖、祛风消肿,用
于目赤肿痛,外用治跌打损伤、乳痈等。 研究发现,白簕
营养价值较高,每克鲜茎叶 Vc 含量 1.21 mg,是番茄的
5~6 倍;叶绿素含量 1.07 mg、粗蛋白 0.25 g、可溶性糖
0.05 g;此外,氨基酸总含量达 20.8%,是一种营养和保
健价值很高的野生蔬菜[3]。白簕是广东恩平最具特色的
农产品,享誉国内外。 恩平人食用野生鲜白簕已有几百
年的历史,近年来,恩平等地开展了较大面积的白簕人
工种植和开发利用, 簕菜茶等保健产品的开发也时有
报道[4-6]。 关于白簕的研究报道主要集中在化学结构[7-8]
和生物活性 [9-10]等方面,但对白簕的安全性评价方面的
系统研究报道尚少。本试验采用急性经口毒性、30 d 喂
养、遗传毒性试验研究白簕的食用安全性,以期为白簕
的安全食用提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 试验材料
选取处于旺盛生长期的野生白簕为材料, 采集地
上可食部分进行试验。 动物试验的白簕配制:取一定量
的白簕, 加适量纯化水, 在电磁锅煮至水分基本蒸发
完。 将样品研磨均匀,加水配置成浓度为 0.667 g/mL的
高剂量溶液。 用超纯水稀释配制 0.33、0.17 g/mL 的中、
低剂量组白簕溶液。Ames试验的白簕配制:取 2 g白簕
121℃高压灭菌 15 min,研磨均匀,加无菌蒸馏水配制
成 50、10、2、0.4、0.08 mg/mL的白簕溶液。
SPF 级 NIH 小鼠,40 只,用于急性毒性检测,合格
证号为 0037483。 SPF级 KM小鼠,100 只,分别用于骨
髓微核试验(50 只),和睾丸染色体畸变试验(50 只),
合格证号分别为 0114008、0114007。SPF级 SD 大鼠,88
只,用于 30 d 喂养试验,合格证号为 0116436。 所有动
物饲养在广东省医学实验动物中心 SPF 级动物房,实
验动物使用许可证号为 SYXK(粤)2008-0002。 饲养温
度 20~26℃,湿度 40%~70%,采用 10h∶14h 昼夜间断照
收稿日期:2014-02-24
基金项目:广东省科技攻关项目 (2008B021500011);广东
省教育部产学研结合项目(2010B090400492)
作者简介:林春华(1966-),女,研究员,E-mail:chunhuagz@
163.com
广东农业科学 2014 年第 8期 47
C M Y K
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2014.08.031
表 1 白簕急性经口毒性试验动物体重及死亡结果
组别
对照组
白簕组
(40g/kg)
性别




死亡数
(只)
0/10
0/10
0/10
0/10
初始值
19.9±0.5
20.0±0.4
19.8±0.4
20.4±0.6
7d 后
26.9±1.0
24.9±1.1
26.8±1.0
23.8±1.5
14d 后
30.6±1.3
27.8±1.1
30.4±1.5
27.2±1.6
体重(g)
明;自由进食和饮水,饲料和饮用水均由广东省医学实
验动物中心提供。 组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌
TA97、TA98、TA100 和 TA102,均由广东省疾病预防控
制中心卫生毒理所提供。
试验用试剂包括酚胺磺 (Fenaminosulf, Dexon),
Dr. Enrenstorfer GmbH 产品, 批号 70321; 叠氮化钠
(Sodium azide, SA),MBCHEM 公 司 产 品 , 批 号
122309;2-氨基芴 (2-Aminoanthracene, 2-AF),Alfa
Aesar公司产品,批号 10128534;注射用环磷酰胺,江西
恒瑞医药股份有限公司产品,批号 11073021。血常规试
剂:稀释液(DH-640)、批号 1201-0123, 清洗液(MEK-
620)、批号 1201-0083,溶血剂(DH-680)、批号 1109-
0071,溶血剂(MEK-910)、批号 1107-0035,来自日本
光电公司产品。 ALT、TP、BUN、TC、AST、TG、CR、ALB、
GLU 试剂盒均是上海复旦张江生物医药股份有限公司
产品 , 批号分别为 120202、120104、111101、120118、
110101、110825、110501、111121、120213。
所用仪器包括:BS-3000A 电子天平, 上海友声衡
器有限公司,精度 0.1 g;PB203-N 电子分析天平:梅特
勒-托利多公司, 精度 1 mg;ECHO 全自动血液生化分
析仪, 意大利爱康公司;MEK-7222K 全自动血球计数
仪,日本光电公司产品;AC9000 系列电解质分析仪,型
号 AC9900, 江苏奥迪康医学科技有限公司;AYW8000
系列半自动凝血分析仪,型号 AYW8001,南京瑞麦科
技开发有限公司提供;TS-12N 生物组织全自动脱水
机, 湖北孝感医用仪器有限公司;BM-VII 生物组织包
埋机及冷冻机,湖北孝感医用仪器有限公司;CS-VI 摊
片烤片机,湖北孝感医用仪器有限公司;RS-18 生物组
织全自动染色机 , 湖北孝感医用仪器有限公司 ;
RM2135 轮转切片机, 德国 LEICA 公司;BX41 荧光成
像系统显微镜,奥林巴斯。
1.2 试验方法
1.2.1 急性毒性分析 SPF 级 NIH 小鼠,18~22 g,雌
雄各 50%。 检疫合格后,随机分成两个处理:白簕组按
20 mL/kg 剂量灌服,连续 2 次,间隔 6 h;对照组给予等
量生理盐水。 每个组 20只。 每天记录给予受试药物后
动物的中毒表现和死亡情况,连续 14 d,并于实验开始
后 0、7、14 d测量小鼠体重,根据《保健食品检验与评价
技术规范》评价受试样品的毒性。
1.2.2 遗传毒性分析 (1)Ames 试验。 设白簕 5 000、
1 000、200、40、8 μg/皿 5 个剂量,另设溶剂对照组和阳
性对照组,各组均设+S9 对照组。 每组在±S9 条件下各
做 3 皿。 采用预培养平板掺入法,37℃培养 48 h,计数
各皿回复突变菌落数。
(2)睾丸染色体畸变试验。 SPF级 KM小鼠,50只,
雄性,体重 23.6~27.3g。检疫合格后,随机分为溶剂对照
组,阳性对照组,白簕高、中、低剂量组,每组 10 只。 各
组小鼠按每 10 g 体重灌胃相应样品液和蒸馏水 0.2
mL,阳性对照组小鼠每天按 20 mg/kg 体重腹腔注射环
磷酰胺,每天 1次,连续 5 d,继续正常喂养 9 d。动物处
死前 6 h 按每 10 g 体重腹腔注射 0.1 mL 的 0.5 mg/mL
秋水仙素。 处死动物,制片,观察染色体的结构畸变,计
算畸变率。
(3)骨髓微核试验。 SPF 级 KM 小鼠,50 只,雄性,
体重 25.0~30.0 g。 检疫合格后,随机分为溶剂对照组,
阳性对照组,白簕高、中、低剂量组,每组 10 只,雌雄各
50%。各组小鼠按 20 mL/kg 体重给予受试溶液 2次。末
次给药 6 h处死小鼠,取胸骨涂片染色,阅片,计算微核
率。
1.2.3 30 d 喂养试验 SPF 级 SD 大鼠,88 只,78.0~
117.4 g,雌雄各 50%。 检疫合格后,随机分为白簕高、
中、低剂量组以及正常对照组,每组 22只。 白簕高、中、
低剂量组大鼠按照 13.34、6.67、3.34 g/kg·d 灌胃给予受
试样品,每天 1 次,连续 30 d。 每天观察动物的临床情
况,每周测量动物体重 1次和食物摄入量 2次。 给药结
束后,检测所有大鼠的血常规、血液生化指标和病理检
测肝、肾、脾、胃肠、睾丸及卵巢组织。
2 结果与分析
2.1 急性毒性分析
从表 1 可以看出,白簕按 40 g/kg 剂量经口灌胃给
药,14 d 内小鼠无一死亡,未出现震颤、抽搐、流涎、腹
泻、嗜睡、昏迷等异常症状,各组雌性和雄性小鼠体重
呈正常增长。
2.2 遗传毒性分析
2.2.1 回复突变菌落数研究 表 2 显示, 阳性对照组
TA97、TA98、TA100 和 TA102 的回变菌落数比溶剂对
照组显著增加;无论有无 S9 活化系统,白簕 5 个剂量
组 TA97、TA98、TA100 和 TA102 的回变菌落数均小于
溶剂对照组回变菌落数的 2倍。
2.2.2 睾丸染色体畸变试验分析 进一步对不同剂量
白簕对小鼠睾丸染色体畸变的影响开展研究,结果(表
3)显示,阳性对照组小鼠的睾丸染色体畸变率为 9.8%,
48
C M Y K
250
200
150
100
50
0


( g

溶剂对照组
13.4g/kg 白簕
6.79g/kg 白簕
3.35g/kg 白簕
0 7 14 21 27 30
处理时间(d)
图 2 雌性大鼠体重变化
表 4 白簕对 KM 小鼠骨髓细胞微核形成的影响
组 别
溶剂对照组
阳性对照组
白簕组
剂量
40mg/kg
13.4g/kg
6.7g/kg
3.35g/kg
雌鼠
1.20±0.43
34.70±2.43**
1.40±0.55
1.40±0.54
1.40±0.54
雄鼠
1.20±0.45
34.00±3.81**
1.40±0.00
1.20±0.44
1.20±0.44
注:“**”表示与溶剂对照组相比差异极显著。
微核率(‰)
表 3 白簕对小鼠睾丸染色体畸变的影响
组 别
正常对照组(NC)
阳性对照(PC)
白簕组
剂量
40mg/kg
13.4g/kg
6.7g/kg
3.35g/kg
断裂
1
18
0
0
0
断片
0
0
0
0
0
易位
0
0
0
0
0
缺失
0
0
0
0
0
环状
2
66
2
2
2
微小体
0
12
0
1
1
单体交换
0
0
0
0
0
多着丝
0
2
0
0
0
裂隙
0
0
0
0
0
畸变
总数
3
98
2
2
3
总畸变率
(‰)
3
98**
2
2
3
注:表中数据为每只动物检查 1000 个细胞的结果。
表 2 白簕对细菌回复突变菌落数的影响
组 别
正常对照组(NC)
敌克松
叠氮化钠
2-氨基芴
白簕
剂量
(μg/皿)
100
5
100
5000
1000
200
40
8
+S9
150±14
1689±198**
131±9
133±6
138±20
128±9
137±17
-S9
127±13
1497±18**
131±10
128±9
129±1
127±6
129±9
+S9
32±2
1623±119**
32±4
32±4
32±3
33±1
32±4
-S9
38±2
1374±97**
34±5
36±6
36±7
39±2
37±4
+S9
153±14
1525±79**
132±13
153±17
147±15
154±5
155±17
-S9
147±14
1583±157**
138±15
144±14
153±17
140±9
138±10
+S9
270±12
1712±52**
243±25
252±11
258±6
255±14
252±11
-S9
277±7
1273±84**
244±13
254±22
255±6
239±27
265±6
注:“**”表示与溶剂对照组相比差异极显著。
平均回复突变菌落数(个/皿)
TA97 TA97 TA100 TA102
与溶剂对照相比显著升高;白簕高、中、低剂量睾丸染
色体畸变率分别为 0.2%、0.2%、0.3%,与溶剂对照组无
显著差异。
2.2.3 骨髓微核试验分析 阳性对照组雌性、 雄性小
鼠的微核率均显著高于溶剂对照组;白簕高、中、低剂
量雌性动物的微核率均为 1.40‰, 与溶剂对照组比较
无显著差异;白簕高、中、低剂量雄性动物的微核率分
别为 1.40‰、1.20‰、1.20‰,与溶剂对照组相比无显著
差异(表 4)。
2.3 毒性试验结果分析
2.3.1 一般症状表现 本试验各处理组间表现无明显
差异,在整个喂养试验期间大鼠生长发育良好,毛色光
亮,口、眼、耳、鼻均未见异常分泌物;呼吸规律,粪便成
形无粘液,无稀烂,在试验期间均未见异常。 图 1、图 2
显示,白簕各剂量组雄性、雌性大鼠每周体重增长量与
正常对照组比较均无统计学差异。
300
250
200
150
100
50
0


( g

0 7 14 21 27 30
处理时间(d)
图 1 雄性大鼠体重变化
溶剂对照组
13.4g/kg 白簕
6.79g/kg 白簕
3.35g/kg 白簕
49
C M Y K
白簕各剂量组雄性大鼠的食物利用率与正常对照
组比较均无统计学差异(F=0.713,P>0.05)。各组雄性大
鼠总食物利用率在 25.5%~26.6%波动。 白簕各剂量组
雌性大鼠第 3 周食物利用率与正常对照组相比显著升
高。 各组雌性大鼠总食物利用率在 16.7%~19.4%波动
(表 5)。
2.3.2 血液学指标和血液生化指标 与正常对照组相
比,白簕低、中剂量组雄性大鼠的 MO 显著降低;白簕
各剂量组雌性大鼠 WBC 含量均显著降低;中、高剂量
组雌性大鼠的 PLT 含量均显著降低, 但均在正常范围
内波动(表 6、表 7)。 白簕中、高剂量组雄性大鼠的 ALB
含量显著升高, 但均在正常范围内波动; 各剂量组雄
性、 雌性大鼠其余各血生化指标与正常对照组差异不
显著。
2.3.3 病理学指标 (1)器官指数。 白簕各剂量组大鼠
在大体解剖肉眼观察下均未见脏器颜色、质地等出现异
常变化。 白簕低、中、高剂量组雄性、雌性大鼠各测定脏
器指数与正常对照组差异不显著(表 8)。
剂量
3.34g/kg
6.67g/kg
13.34g/kg
性别








W1
38.2±2.7
28.6±5.2
38.2±2.9
32.3±3.9
36.9±2.5
32.8±4.4
36.3±4.0
25.5±12.0
W2
29.8±8.9
18.9±2.2
31.6±1.6
18.6±2.6
29.5±2.9
18.7±2.1
27.7±5.3
22.1±5.8
W3
20.6±9.5
10.3±2.8
21.5±4.4
15.5±2.1**
23.4±2.7
16.1±2.4**
22.8±5.6
15.9±6.3**
W4
16.4±5.7
12.4±3.0
18.8±6.9
9.0±3.3
19.3±6.4
12.4±4.7
22.5±2.9
14.6±4.3
总食物利用率(%)
25.5
16.7
26.5
18.2
26.6
19.2
26.6
19.4
注:“**”表示与正常对照组相比差异极显著。
表 5 白簕对大鼠食物利用率的影响
食物利用率(%)
组 别
正常对照组
白簕组
(NC)
表 6 白簕对大鼠血液学指标的影响
性别








WBC
(×103/μL)
6.07±1.61
6.31±1.92
6.71±1.62
4.77±0.76*
7.04±1.91
4.34±0.92*
6.62±1.16
4.45±0.93*
NE
(%)
25.6±7.2
19.0±7.5
26.4±12.2
24.3±7.2
29.3±4.8
21.4±8.5
27.4±7.0
20.6±5.6
LY
(%)
72.8±7.2
79.8±7.4
72.6±11.9
74.5±7.2
69.5±4.7
77.4±8.5
71.0±6.9
78.0±5.6
MO
(%)
1.39±0.39
0.82±0.26
0.85±0.28*
0.96±0.35
0.94±0.24*
0.94±0.22
1.35±0.51
1.08±0.40
EO
(%)
0.17±0.06
0.36±0.38
0.22±0.11
0.22±0.10
0.20±0.08
0.25±0.10
0.23±0.12
0.28±0.13
BA
(%)
0.01±0.03
0.05±0.07
0.02±0.04
0.02±0.04
0.01±0.03
0.01±0.03
0.04±0.05
0.02±0.04
RBC
(×106/μL)
6.89±0.35
6.70±0.53
6.89±0.47
6.81±0.25
6.83±0.43
6.72±0.33
6.98±0.29
6.60±0.39
HGB
(g/dL)
142.2±6.4
143.3±10.7
145.2±8.3
147.6±4.3
144.2±9.6
145.1±4.7
145.9±4.7
142.1±6.9
PLT
(×103/μL)
972±93
1018±99
860±146
935±65
890±70
928±64*
932±90
854±88*
RET
(×109/L)
21.4±1.0
28.0±1.4
20.6±0.7
28.7±1.4
20.6±1.0
28.2±1.4
21.0±1.0
28.6±1.1
注:WBC:白细胞;NE:中性粒细胞;LY:淋巴细胞;MO:单核细胞;EO:嗜酸性粒细胞;BA:嗜碱性粒细胞;RBC:红细胞;HGB:血红
蛋白;PLT:血小板;RET:网积红细胞。
剂量
3.34g/kg
6.67g/kg
13.34g/kg
组 别
正常对照组
白簕组
(NC)
表 7 白簕对大鼠血液生化指标的影响
性别








GLU
(mmol/L)
6.03±0.26
5.86±0.35
5.80±0.57
5.86±0.26
5.88±0.29
5.80±0.35
6.04±0.41
5.72±0.28
BUN
(mmol/L)
7.47±0.40
7.46±0.43
7.41±0.23
7.18±0.81
7.42±0.53
7.35±0.54
7.44±0.37
7.01±0.56
AST
(U/L)
114.1±5.5
115.3±9.0
115.0±6.4
119.5 ±9.5
115.5±9.2
118.1±7.4
112.5±6.9
116.1±4.0
ALT
(U/L)
40.9±4.1
40.8±4.8
42.0±4.1
41.5±2.4
41.4±4.1
39.6±3.8
39.7±3.9
42.4±5.3
CHOL
(mmol/L)
2.48±0.26
2.38±0.27
2.40±0.16
2.52±0.21
2.38±0.25
2.54±0.10
2.51±0.14
2.59±0.15
TG
(mmol/L)
0.90±0.10
0.99±0.14
0.95±0.08
1.04±0.11
0.91±0.12
1.03±0.16
0.91±0.12
1.03±0.16
Cr
Umol/L
38.4±5.6
38.6±4.2
39.2±3.6
40.4±6.1
37.3±7.6
40.0±5.9
37.3±7.6
40.0±5.9
TP
(g/L)
68.5±2.7
68.1±2.0
67.1±2.9
68.0±2.54
66.5±2.8
67.8±2.3
66.5±2.8
67.8±2.3
ALB
(g/L)
27.8±0.5
28.1±0.4
28.5±0.5
28.2±0.8
28.6±0.5
28.2±0.4
28.6±0.5
28.2±0.4
剂量
3.34g/kg
6.67g/kg
13.34g/kg
组别
正常对照组
白簕组
(NC)
50
C M Y K
(2)组织病理学检查 图 3(封二)表明,白簕高剂
量组大鼠的肝脏、脾脏、肾脏、胃、肠、卵巢、睾丸组织结
构及细胞形态与正常对照组相比变化不大, 表明白簕
30 d 灌胃喂养对 SD 大鼠以上脏器没有明显的毒性作
用。
3 结语
在本试验中,我们按照《食品安全性毒理学评价程
序和方法》[11-13] 完成了白簕急性经口毒性、30 d 喂养和
遗传毒性等毒理学试验。 结果表明,白簕急性经口毒性
最大灌胃量为 40 g/kg,属于无毒物质。 无论有无 S9 活
化系统,白簕 5个剂量组 TA97、TA98、TA100、TA102等
4种菌株的回变菌落数均小于溶剂对照组的 2倍。白簕
高、中、低剂量小鼠的骨髓微核率与溶剂对照组差异不
显著;白簕高、中、低剂量组小鼠的睾丸染色体畸变率
分别为 2‰、2‰、3‰,与溶剂对照组差异不显著。 遗传
毒性试验结果均为阴性。 30 d 喂养试验结果显示,在
13.34 g/kg 及以下剂量,白簕低、中、高剂量组的血常规
指标、血生化指标与溶剂对照组差异不显著,病理学检
测未发现毒性靶器官。 因此,深度开发白簕,将其研制
成具有保健功能的食品, 对促进地方经济具有重要的
意义。
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[13] 中国预防医学科学院标准处 .食品卫生国家标准汇编 [M].北
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(责任编辑 张辉玲)
剂量
3.34g/kg
6.67g/kg
13.34g/kg
组别
正常对照组
白簕组
性别








肝脏系数
35.90±2.68
32.54±3.18
34.72±4.30
31.57±1.61
33.16±2.61
32.85±3.73
33.83±0.89
33.87±3.01
脾脏系数
1.96±0.20
1.94±0.22
1.97±0.62
1.88±0.16
1.92±0.27
1.98±0.27
2.05±0.27
1.96±0.22
肾脏系数
8.18±0.72
7.82±0.37
7.98±0.41
8.05±0.44
8.02±0.49
7.77±0.53
7.95±0.45
7.85±0.53
睾丸/卵巢系数
10.37±0.80
0.50±0.06
10.63±1.46
0.57±0.14
10.16±2.69
0.50±0.06
10.75±0.82
0.50±0.10
表 8 白簕对大鼠脏器指数的影响
脏器指数
(NC)
51
C M Y K